郑焕钦
- 作品数：80 被引量：319H指数：12
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 地高辛素标记弓形虫DNA探针的制备及在产前诊断的应用被引量：19
- 1995年
- 本文建立了地高辛素标记的弓形虫ＤＮＡ探针并在２３例产前咨询孕妇中作产前诊断。通过聚合酶链反应扩增弓形虫ＲＨ株ＴＧＲ４核酸片段，扩增产物７７８ｂｐ片段经寡核苷酸层析柱纯化后，用地高辛素标记作为探针，与待检材料斑点杂交。结果显示该探针与待杂交的弓形虫ＲＨ、ＺＳ１、ＺＳ２、ＳＨ１株ＤＮＡ杂交；而与恶性疟原虫、卡氏肺孢子虫、杜氏利什曼原虫、大肠杆菌、巨细胞病毒ＤＮＡ无杂交。并能在待杂交液中检测出相当于１ｐｇ水平ＤＮＡ，表明该探针具有高度的特异性及敏感性。检测２３例孕期１０—１４周孕妇中，阳性３例，其中一孕妇外周血、绒毛组织及羊水均呈阳性。另一例的外周血及绒毛组织呈阳性。该探针稳定、敏感、操作简单，具有推广意义。
- 陈观今韦相才朱家铭罗超权郑焕钦
- 关键词：弓形体病产前诊断DNA探针
- 含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅲ.免疫鼠肌组织表达产物免疫酶法定位及血清IgG抗体测定被引量：9
- 1999年
- 目的 用所构建的弓形虫ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 真核表达重组质粒，经肌肉注射免疫小鼠，观察它在肌组织中的表达及不同免疫途径所诱导的体液免疫应答。方法 碱裂解法大量制备ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 质粒，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，每只鼠注射１００ｕｇ，两周后同量加强免疫一次，以ｐｃＤＮＡ３ 空质粒及生理盐水组为对照。于免疫后第５０ 天用间接免疫酶法检测注射局部肌组织重组蛋白的表达；ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ抗体滴度。结果 免疫鼠肌组织石蜡切片呈特异性阳性反应；血清ＩｇＧ抗体９０天后测定为阳性；皮下及肌肉不同免疫途径血清均显示阳性结果，无显著性差异。结论 ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１质粒ＤＮＡ 免疫小鼠后，肌组织内有重组蛋白表达。
- 郭虹陈观今郑焕钦周永安
- 关键词：重组质粒DNA免疫
- 含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究 IV.免疫鼠血清细胞因子IFN-γ、IL-2及NO的测定被引量：15
- 2000年
- 目的 用 pc- ROP1重组质粒免疫小鼠 ,观察其对细胞因子 IFN-γ、IL - 2及 NO的影响。方法 碱裂解法大量制备 pc- ROP1质粒 DNA,经肌肉注射免疫 BAL B/ c小鼠 ,每只鼠注射 10 0μg,两周后同量加强免疫一次 ,以 pc DNA 3空质粒及生理盐水组为对照。分别于免疫后第 30天、5 0天、70天共三次用双夹心 EL ISA测定血清细胞因子 IFN-γ、IL - 2含量 ;酶法测定NO活性。结果 三次检测免疫组 IFN-γ、IL - 2及 NO含量均显著高于对照组 ,随着免疫时间的延长有增高趋势。结论 pc-ROP1重组质粒 DNA免疫小鼠 ,可刺激细胞因子 IFN-γ、IL - 2产生 。
- 郭虹陈观今郑焕钦
- 关键词：弓形虫病DNA免疫质粒
- 含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅴ.IFN-γ基因真核表达重组质粒的构建及其在DNA免疫中基因佐剂的作用被引量：6
- 1999年
- 目的 构建ＩＦＮ－γ基因真核表达重组质粒作为基因佐剂，观察其与ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１（ｐｃ－ＲＯＰ１） ＤＮＡ共同免疫小鼠所诱导的免疫应答。方法 将ＩＦＮ－γ基因片段定向插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３，双酶切鉴定，获得ｐｃＩＦＮ 重组子；碱裂解法大量制备，经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，每只鼠注射ｐｃＩＦＮ、ｐｃ－ＲＯＰ１ 各１００μｇ，两周后同量加强免疫一次，以ｐｃＤＮＡ３空质粒及生理盐水组为对照。分别于免疫后第３０ 天、５０ 天、７０天共三次用ＭＴＴ法测定小鼠脾脏Ｔ淋巴细胞增殖活性及ＮＫ细胞活性；双夹心ＥＬＩＳＡ 测定血清细胞因子ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２及酶法测定ＮＯ含量；ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ抗体滴度。结果 构建成功的作用下，该两项指标均明显提高，且ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２ 及ＮＯ水平均较不加佐剂组显著提高（Ｐ＜ ０．０１）；而对ＩｇＧ抗体滴度无显著影响（Ｐ＞ ０．０５。结论 ＩＦＮ－γ基因佐剂具有协同ｐｃ－ＲＯＰ１ＤＮＡ免疫的作用，可增强免疫鼠细胞免疫应答，ＩＦＮ－γ。
- 郭虹陈观今郑焕钦
- 关键词：弓形虫DNA免疫
- 3株弓形虫GRA7基因的保守性鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的 比较弓形虫不同地理株 (RH株、ZS2株、GT株 )GRA7基因的异同。 方法 从弓形虫不同地理株的基因组DNA中扩增出GRA7基因 ,对目的基因用限制性内切酶 (Esp3I、CfrI、MboI)酶切并比较。将目的基因克隆至pGEX 4T 1质粒 ,转化大肠埃希菌JM 10 9,进行测序并比较。 结果 PCR扩增出 3株弓形虫的目的基因片段 ,大小均在 5 0 0～ 75 0bp之间 ;经 3种限制性内切酶酶切 ,其大小均与理论值相符 ;3株弓形虫GRA7基因序列相同。
- 郑斌何蔼李卓雅申川军余南郑焕钦张瑞琳李道宁詹希美
- 关键词：弓形虫限制性内切酶克隆
- 阳离子脂质体介导的弓形虫SAG1/ROP1复合基因的DNA免疫
- ＜正＞ 弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种危害人体及家畜健康的食源性寄生虫。人群感染普遍广泛,没有年龄和性别的差别,均可得到感染。国外人群的感染率在0.6％～94。6％,国内为 0.33％～11.8％。人...
- 陈海峰陈观今郑焕钦郭虹吕芳丽
- 文献传递
- 弓形虫不同分离株ROP1和P30基因的体外扩增被引量：8
- 1999年
- 通过体外扩增弓形虫ＲＨ、ＺＳ１、ＺＳ２、ＧＴ１４个分离株的编码棒状体蛋白（ＲＯＰ１）和主要表膜蛋白（Ｐ３０）抗原的基因片段，比较虫株间差异，为克隆及其ＤＮＡ免疫的研究做准备。特定引物的设计；弓形虫虫株的复苏、接种、收集、纯化；提取弓形虫ＲＨ、ＺＳ１、ＺＳ２及ＧＴ１分离株的基因组ＤＮＡ，并以此为模板进行ＰＣＲ扩增，扩增产物经１％琼脂糖凝胶电泳分析。结果从４个分离株基因组ＤＮＡ中均扩增出编码ＲＯＰ１、Ｐ３０抗原的基因片段，其大小ＲＯＰ１约７５６ｂｐ，Ｐ３０约１０２５ｂｐ，电泳条带未见虫株间的明显差别。研究表明，所扩增４个弓形虫分离株的ＲＯＰ１和Ｐ３０基因片段均与理论预测值相符，并具有高度保守性。
- 郭虹陈观今郑焕钦周永安
- 关键词：弓形虫分离株表膜抗原扩增
- 刚地弓形虫RH株微线体蛋白MIC3成熟肽的克隆与表达被引量：2
- 2005年
- 目的 克隆编码刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)RH株微线体蛋白MIC3成熟肽的基因,构建原核表达载体pET MMIC3,并在大肠杆菌BL2 1株中表达。方法 采用PCR技术从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码微线体蛋白MIC3成熟肽的基因,并克隆到T载体上,经测序鉴定后,将目的基因亚克隆到表达载体pET30a(+)上,构建质粒pET MMIC3。表达产物用Westernblot进行进一步确认。结果 经初步菌液PCR鉴定,提取质粒双酶切鉴定并测序,确认插入T载体的序列为所需的目的序列;亚克隆构建pET -MMIC3,转化到宿主菌大肠杆菌BL2 1,得到分子量为37.2kDa的重组表达蛋白,Westernblot的结果与预测相符。结论 成功的克隆并融合表达了刚地弓形虫RH株微线体蛋白MIC3成熟肽,为进一步研究其在弓形虫粘附和入侵中的作用奠定了基础。
- 余南何蔼郑小英申川军郑斌郑焕钦李卓雅曹爱莲詹希美
- 关键词：刚地弓形虫克隆
- 弓形虫ROP1基因的体外扩增及克隆
- 1997年
- 弓形虫棒状体蛋白（ROP1）存在于速殖子棒状体内。根其已知基因序列设计合成一对引物，用PCR技术从弓形虫RH及ZS2株的基因组DNA中扩增出编码ROP1的基因片段，将扩增产物与pBV220原核高效表达质粒重组，构建成功pBV200-RCP1重组子，转化大肠杆菌TG1，DHSα，以进一步诱导表达RCP1非融合蛋白，用于对弓形虫侵入机制及免疫特性的研究。
- 郭虹陈观今刘彦文郑焕钦
- 关键词：弓形虫克隆寄生虫
- 全文增补中
- 弓形虫ZS1株抗原基因的扩增及克隆被引量：1
- 1997年
- 本文采用PCR技术，自行设计一对寡核酸引物(P1，P2)，从弓形虫ZS2基因组DNA中特异扩增出编码P30抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用FxcoRⅠ和HindⅢ双酶切后,克隆到真核表达质粒pcDNA3中，转化人大肠杆菌TG1，用氨苄青霉素和PCR初筛，将PCR扩增阳性的重组子用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定。结果成功地构成建真棱型表达质粒pcDNA-P30，从而为进一步进行重组P30抗原的体外表达创造有利条件。
- 周永安陈观今刘彦文罗树红郑焕钦
- 关键词：弓形虫抗原基因克隆聚合酶链反应
- 全文增补中
