孙大光
- 作品数：8 被引量：19H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技基础条件平台建设计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 寡核苷酸芯片研究人胎儿器官全基因microRNA表达谱
- 目的:MicroRNA（miRNA）是一种大小约21-23个碱基的单链小分子RNA,是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体（pre-miRNA）经过Dicer酶加工而成,在线虫,植物,昆虫和哺乳动物都有...
- 赵建军华友佳孙大光孟宪新汪朝晖肖华胜马旭
- 文献传递
- 低氧诱导因子-3α对胎盘滋养层细胞生长的影响被引量：3
- 2021年
- 目的研究低氧诱导因子-3α(HIF-3α)对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)生物学行为的影响。方法构建人HIF-3α过表达载体(pcDNA3.1-HIF-3α),并筛选HIF-3α抑制剂(HIF-3αsiRNA)最佳靶序列;用2.5μg的pcDNA3.1-HIF-3α质粒和75 pmol/L的HIF-3αsiRNA分别转染HTR8/SVneo细胞作为转染组,同时各自设立阴性转染组。采用EdU法和MTT法检测细胞增殖和细胞活力水平;用细胞流式法检测细胞凋亡水平;并用细胞培养小室(Transwell)法检测细胞浸润和迁移的能力。结果蛋白质印迹法(Western Blot)结果表明成功构建了过表达载体pcDNA3.1-HIF-3α,并筛选到HIF-3αsiRNA#2是最佳抑制靶序列(P<0.05)。EdU实验结果显示,过表达HIF-3α使细胞的增殖显著增强(P<0.05),敲低HIF-3α则使细胞的增殖显著下降(P<0.05)。MTT法检测发现,过表达HIF-3α后细胞活力无显著差异(P>0.05);敲低HIF-3α后细胞活力显著升高(P<0.05)。细胞流式法检测发现,HIF-3α过表达有降低HTR8/SVneo细胞早期凋亡的趋势,但无显著差异(P>0.05);HIF-3α敲低后细胞凋亡无显著差异(P>0.05)。Transwell小室法检测发现,HIF-3α过表达使细胞的迁移以及浸润显著增强(P<0.05),而HIF-3α敲低后细胞的迁移以及浸润显著下降(P<0.05)。结论HIF-3α是调节HTR8/SVneo细胞增殖、迁移和浸润能力的重要因子。
- 张丹张丹张璐孙大光夏红飞
- 关键词：细胞活性
- 遗传性先天无虹膜患者的PAX6基因新突变(c．1286del C)被引量：5
- 2008年
- 为了研究遗传性先天无虹膜(Hereditary congenital aniridia)患者发病的分子遗传学机制,采用PCR扩增PAX6基因编码区的11个外显子(exon4-13)及外显子和内含子相连接的区域、PCR产物直接测序的方法对1个遗传性先天无虹膜家系的所有成员进行了遗传突变分析。结果表明,在家系中两个患者的PAX6基因exon11均存在c.1286delC新突变。此单个碱基的缺失造成了移码突变,导致肽链自309位氨基酸开始产生一段含55个氨基酸的异常肽段,并产生提前终止密码子(Premature termination codon,PTC),使PAX6蛋白羧基端的59个氨基酸缺失。另外,通过PCR-RFLP分析的方法对家系中所有正常成员和50名中国汉族健康对照个体基因组DNA进行分析均未检测到该突变。
- 孙大光阳菊华童绎赵广健马旭
- 关键词：PAX6基因家系突变
- 变性高效液相色谱-测序技术在检测乳腺癌BRCA1基因突变中的临床诊断价值
- 2006年
- 目的探讨变性高效液相色谱(DHPLC)-测序技术在早期检测乳腺癌BRCA1基因突变的临床意义。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增BRCA1基因,该扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后,直接进行DHPLC分析;有峰型改变的样本作测序分析,以确认突变。结果从124例乳腺癌患者中共发现9种突变。包括7种错义突变,其中,1例Stop598,1例A807E合并E809L,1例A807E,2例Y856H,1例T967S,2例I1170F,1例R1203G;一种存在于一号内含子的突变,即IVS101-10 T>C 17例;一种2号外显子的5’非翻译区突变,即A118T 2例。此外,在乳腺癌标本和正常对照标本中都发现有几处常见的单核苷酸多态性位点。结论本研究确定了9种乳腺癌患者可能发生的突变类型,为今后临床应用DHPLC对高危人群BRCA1基因进行早期基因检测提供了9个位点。DHPLC-测序技术可快速、方便地区分带有碱基替换和小片段缺失的DNA片段,是一种可用于早期临床诊断乳腺癌BRCA1基因改变的高效、灵敏和操作简便的方法。
- 李丹吴永和闵大六汪朝晖郑俊峰孙大光马旭
- 关键词：变性高效液相色谱乳腺肿瘤基因突变
- 硫代硫酸钠干扰斑马鱼胚胎发育并致畸被引量：5
- 2009年
- 硫的衍生物潜在的威胁着胚胎的发育过程.斑马鱼被用于研究不同浓度(1×10-6～1mol/L)的硫代硫酸钠(sodiumthiosulfate,STS)对胚胎发育的影响,在解剖显微镜下实时观察斑马鱼胚胎发育的全过程.采用Western印迹法检测乙酰化的微管蛋白——α-微管蛋白(acetylatedtubulin,α-tubulin)和神经元增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达,分别检测STS暴露后胚胎的运动神经元功能,神经元的增殖状态.发育中的斑马鱼胚胎暴露于0.1～1mol/LSTS,呈现出严重的发育迟缓,并且伴随多脏器畸形;暴露于10μmol/L～10mmol/LSTS,胚胎呈现循环系统,神经系统以及颌面部畸形.胚胎在48hpf(hourspostfertilization)时,对STS的暴露敏感高于24hpf和96hpf.STS可能干扰细胞的增殖及运动神经元的正常分化.STS可能干扰正常的细胞骨架结构,并在胚胎发育晚期影响细胞增殖,对胚胎神经系统、循环系统及颌面部有致畸作用.
- 胡玮程露阳宋韫韬夏鸿飞孙大光李鹏李丹陆彩玲马旭
- 关键词：硫代硫酸钠斑马鱼畸形微管蛋白
- MicroRNAs在新生鼠卵巢中的表达研究被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨microRNAs(miRNAs)对原始卵泡的形成和发育的影响。方法:取1d龄新生小鼠卵巢,制备卵巢切片,利用原位杂交技术观察mir-143、let-7a、let-7b、let-7c和mir-125b在新生小鼠卵巢中的表达情况。结果:1d龄新生小鼠卵巢内只含有大量原始卵泡,mir-143、let-7a、let-7b、let-7c和mir-125b表达于这些原始卵泡的颗粒细胞内,在卵母细胞中不表达。结论:miRNAs可能通过调控原始卵泡颗粒细胞的增殖和/或分化,或通过调控下游靶基因表达直接或间接地影响卵泡形成和发育中的重要因子(FSH、抗苗勒氏管激素、生长分化因子9等),从而对原始卵泡的形成和生长启动产生影响。
- 姚楠陆彩玲李丹王冲孙大光吴尔若马旭
- 关键词：卵巢颗粒细胞小鼠
- 区分孕期巨细胞病毒原发与非原发感染的ELISA方法的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:根据机体对巨细胞病毒重组抗原pp52和pp150不同的IgG免疫反应,建立一种快速、简便和适用的ELISA方法,用于区分孕妇巨细胞病毒近期原发与非原发感染。方法:应用间接ELISA方法测定巨细胞病毒两种重组抗原pp52和pp150 IgG,计算pp52 OD与pp150 OD的比值(pp52 OD/pp150 OD)。结果:共检测858份血清,其中812例为既往感染,46例为活动性感染(15例为原发感染、31例为继发或再感染)。当以pp52 OD/pp150 OD比值>1.5作为原发感染标准时,4组的阳性率分别为1.5%、32.6%、66.7%和16.1%,各组间差异有统计学意义(P<0.05),方法的敏感性和特异性分别为66.7%和98%。结论:本研究建立的测定巨细胞病毒重组蛋白pp52 OD/pp150 OD的酶联免疫吸附方法是辅助区分巨细胞病毒原发与非原发感染的较好的血清学方法,有待扩大样本量进一步证实。
- 侯林浦张萌安莉莎孙大光牛向兰谷学英何欢马旭
- 关键词：巨细胞病毒原发感染重组抗原酶联免疫吸附试验
- Leber’s遗传性视神经病变3460A点突变及临床预后被引量：2
- 2006年
- 目的报道一个携带线粒体G3460A点突变的Leber's遗传性视神经病变(Leber'she-reditaryopticneuropathy,LHON)家系及其临床预后。方法对一LHON家系10母系成员进行临床检查,应用聚合酶链反应扩增目的基因、琼脂糖凝胶电泳、切胶纯化并双向测序,对三个原发突变位点G3460A、G11778A、T14484C进行检测。结果所有母系成员均携带G3460A点突变,家系内对照未携带该突变;所有的家系成员未携带其他两个原发突变。结论携带G3460A点突变的患者有较好的视力预后。
- 杜利平金学民孙大光马旭
- 关键词：线粒体聚合酶链反应
