刘永忠
- 作品数：6 被引量：10H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 转化生长因子β1对肝癌细胞干性表型的调节作用被引量：9
- 2012年
- 目的:探讨转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)体外对肝癌细胞干性特征的影响。方法:以转化H-ras的鼠肝肿瘤细胞LPC-H-ras和人肝癌细胞株PLC/PRF/5为研究对象,利用MTT法和多细胞球体培养法检测TGF-β1对肿瘤起始细胞增殖的抑制作用,FCM法检测细胞表面分子CD133的表达以及活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平;实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测干细胞样基因的表达水平。结果:TGF-β1在体外能够改变LPC-H-ras细胞的形态并抑制细胞的生长;与未处理组相比,TGF-β1作用后,LPC-H-ras细胞表面CD133的表达降低,多细胞球体形成能力减弱,干细胞样基因的表达受到抑制;同样,在PLC/PRF/5细胞中,TGF-β1也能抑制CD133的表达、AFP基因表达以及多细胞球体的形成;另外,在LPC-H-ras细胞中,TGF-β1可诱导ROS表达升高,ROS的抑制剂N-乙酰半胱氨酸具有削弱TGF-β1诱导CD133表达下调的作用。结论:TGF-β1能够抑制肝癌起始细胞的增殖及干性,其作用机制可能与ROS表达上调有关。
- 刘兰兰杨兆娟邹飞雁刘永忠
- 关键词：肿瘤干细胞转化生长因子Β1CD133活性氧
- 具有缺氧反应性的Notch信号抑制蛋白调节鼠结肠癌细胞的体内生长被引量：1
- 2009年
- 目的:研究缺氧细胞中的Notch信号对小鼠结肠癌细胞体内生长的影响。方法:将缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α中的氧依赖性蛋白降解结构域(oxygen-dependent degradation domain,ODD)、抑制Notch信号的mastermind样(mastermind-like,MAML)突变体蛋白1和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)重组构建融合蛋白表达载体。通过在免疫荧光显微镜下观察荧光强度,应用Western印迹和实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测融合蛋白对缺氧的反应性和抑制Notch信号的能力。通过失巢凋亡实验和小鼠体内肿瘤形成实验,观察融合蛋白DNMAML1-ODD-GFP(DOG)对CT26结肠癌细胞体外失巢凋亡和小鼠体内肿瘤生长的影响。结果:DOG融合蛋白在细胞中的稳定表达依赖于缺氧条件,该融合蛋白能够靶向抑制缺氧CT26细胞中的Notch信号靶基因Hes1 mRNA的表达(P<0.01)。体外失巢凋亡实验表明,DOG融合蛋白可显著促进缺氧CT26细胞的失巢凋亡(P<0.01)。小鼠体内成瘤实验显示,DOG融合蛋白的表达可抑制结肠癌细胞CT26在小鼠体内的生长(P<0.01)。结论:成功构建了靶向阻断缺氧细胞中Notch信号的融合蛋白表达载体。缺氧结肠癌细胞中的Notch信号对于肿瘤生长起重要作用。
- 何爱丽马爱辉瞿玉兰郝向芳赵林川刘永忠
- 关键词：细胞缺氧重组融合蛋白质类NOTCH信号
- 经组成性活化Akt1修饰的鼠胚胎肝前体细胞体内形成肿瘤的观察
- 2009年
- 目的:观察组成性活化Akt1(myr-Akt1)导入的p53-/-鼠胚胎肝前体细胞(fetal hepatic progenitor cells,FHPCs)体外培养的特点和小鼠体内肿瘤模型的建立。方法:利用磁性细胞分选系统(magnetic cell-sorting system,MACS)分离上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)阳性的p53-/-小鼠FHPCs,经细胞体外培养和反转录病毒导入myr-Akt1后,接种到C57BL/6小鼠的脾脏。应用RT-PCR和免疫组织化学法分析肝细胞分化和生长相关基因mRNA和蛋白的表达。结果:导入myr-Akt1后可明显提高E-cadherin阳性p53-/-小鼠FHPCs的体外生长和克隆形成能力,并可导致p16Ink4a和p19Arf mRNA表达水平下降;将该细胞接种到小鼠脾脏后可形成肿瘤,肿瘤细胞内GSK3β呈磷酸化,β-catenin呈一定水平表达。结论:成功建立了经Akt1修饰的p53-/-鼠FHPCs体内肿瘤模型,为探讨肝癌发生的分子机制和对相关抗癌药物的研究提供了平台。
- 马爱辉何爱丽葛超刘永忠
- 关键词：肝肿瘤动物实验钙黏附素
- 生殖细胞条件性敲除Usp16基因小鼠的建立、鉴定及表型分析
- 2022年
- 目的建立生殖细胞特异性敲除去泛素化酶Usp16小鼠,并分析其生殖表型,探究Usp16是否在精子发生过程发挥功能。方法首先,将Vasa-cre转基因小鼠与Usp16条件性小鼠(Usp16flox/flox)杂交获得生殖细胞特异性敲除Usp16小鼠;其次,利用qPCR、Western Blot和免疫荧光检测睾丸中Usp16表达;并通过合笼交配、计算机辅助精子分析和HE染色法进行生殖表型分析。结果成功获得了生殖细胞特异性敲除Usp16纯合子(Usp16flox/flox/Vasa-cre+),及杂合子小鼠(Usp16flox/wt/Vasa-cre+)。与野生型相比,Usp16flox/wt/Vasa-cre+雄鼠生殖表型没有显著性变化,但与纯合子雄鼠交配的雌鼠受孕率仅为7%,精子数量减少约79%,活力下降约87%,精子畸形率高达83%,睾丸曲细精管中出现多核细胞,附睾中早熟精子数增多了约3倍。结论小鼠睾丸内生殖细胞Usp16纯合敲除会严重降低精子质量,从而降低雄性生育能力。
- 李卫杰梁冬丽刘永忠王朝霞乔中东徐汪节
- 关键词：精子发生生殖力CRE-LOXP
- GADD45G负调控JAK/STAT3通路及诱导肝癌细胞衰老的研究
- GADD45g: Growth Arrest and DNA Damage-inducible 45-γ 生长阻滞和DNA损伤诱导基因GGADD45 家族:·GADD45a,GADD45b和GADD45g;·高度同源性(...
- 刘永忠
