史琪琪
- 作品数：7 被引量：20H指数：2
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划陕西省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 重组毕赤酵母表达复合α干扰素聚合与降解现象的研究
- 本文对基因工程菌毕赤酵母GS115表达重组人复合α干扰素进行了研究，主要解决了两方面的问题，一是毕赤酵母表达复合α干扰素的工艺优化，二是对发酵中存在的目的蛋白的聚合与降解现象进行分析与研究，并对聚合与降解问题进行解决。
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- 史琪琪
- 关键词：毕赤酵母降解表面活性剂
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- 免疫重建荷人高转移肝癌SCID鼠模型的建立及其鉴定被引量：5
- 2009年
- 目的:建立具有人免疫学特性的高转移肝癌SCID鼠模型。方法:SCID小鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞,皮下接种人高转移肝癌细胞MHCC97-H,免疫重建人高转移肝癌SCID小鼠模型,并鉴定建立的结果。结果:①免疫重建荷人高转移肝癌细胞小鼠的成瘤率为100%,较荷瘤组成瘤潜伏期延长,体积缩小(P<0.05);转移率为100%,其从皮下转移到肝脏所需时间较荷瘤组延长(P<0.05)。②第2、4、6周小鼠血中人IgG含量的测定:同期相比,人化荷瘤组小鼠血中人IgG含量高于人化组(P<0.05)。③第6周SCID小鼠外周血中人CD3+T淋巴细胞和人CD20+B淋巴细胞含量的测定:人化荷瘤组小鼠血中人CD3+T淋巴细胞和人CD20+B淋巴细胞含量高于人化组(P<0.05)。④免疫组化检测人化荷瘤组小鼠脾脏中存在人CD3+T淋巴细胞和CD20+B淋巴细胞。结论:成功建立免疫重建荷人高转移肝癌SCID鼠模型,为肝癌转移的研究及治疗提供了理想的动物模型。
- 李文新张秀敏胡沛臻隋延仿师建国王军伟史琪琪
- 关键词：肝癌转移SCID小鼠免疫重建动物模型
- 一种重组人复合α干扰素的制备方法
- 本发明涉及一种经真核表达制备重组人复合α干扰素(cIFN)制备方法，其主要步骤是：将酵母工程菌(PichiapastorisGS115/pPIC9K-CIFN)经种子培养、发酵罐培养、外源蛋白诱导表达及目标蛋白纯化后获得...
- 储炬郝玉有张嗣良庄英萍史琪琪王永红杭海峰刘志敏杨士珍吴康华
- 文献传递
- 抗肿瘤疫苗MAGE1-MAGE3-HSP70蛋白特性及其纯化策略的研究
- 2011年
- 目的:对MAGE1-MAGE3-HSP70(M1-M3-HSP70)融合蛋白的理化性质及其纯化策略进行初步研究,为后期的临床前试验提供数据和依据。方法:以本实验室构建的菌种(BL21(DE3)pLysS-M1-M3-HSP70)为材料,采用常规细菌培养及诱导方法进行诱导表达,用聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳、免疫印迹(Western blotting)对目的蛋白进行分析,然后确定盐析条件,使用ButylSepharose HP疏水相互作用层析以及阴离子交换(Source 30Q填料)对目的蛋白的纯化进行分析。结果:M1-M3-HSP70蛋白在大肠杆菌中表达后,目的蛋白分为两部分,一部分为包涵体形式(44.9%),一部分为可溶表达(55.1%)。对其可溶部分进行研究发现,细菌裂解后,目的蛋白存在聚合和降解现象;确定了盐析条件、洗脱缓冲液以及稳定的PH值范围,基本确定了目的蛋白的纯化工艺。结论:明确了M1-M3-HSP70融合蛋白的基本性质,确定了目的蛋白的纯化方法,为基于融合蛋白的肿瘤疫苗的进一步研究提供了参考。
- 张秀敏史琪琪林慧王军伟李增山
- 关键词：融合蛋白降解
- 新基因MAGE-n表位肽与人HSP70融合基因的构建及表达纯化被引量：1
- 2010年
- 目的构建MAGE-n159-167(QLVFGIEVV)表位肽与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因并表达纯化。方法应用PCR方法,将QLVFGIEVV的cDNA序列融合到人HSP70基因的3'端,将融合基因克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70;采用双酶切(Sac Ⅰ、Hind Ⅲ)及PCR鉴定后测序;转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),用IPTG诱导表达,Ni Sepharose6FF亲和填料进行分离纯化,SDS-PAGE检测表达及纯化结果。结果经PCR扩增成功获得约2.0kb的目的片段,重组体经Sac Ⅰ、Hind Ⅲ双酶切分析及PCR结果与预期结果一致,测序正确。转入重组质粒的E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导、SDS-PAGE分析得到71kD左右的目的蛋白条带。用Ni Sepharose6FF亲和填料分离纯化,获得了纯化的融合蛋白。结论成功构建原核表达载体pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70,并获得纯化的融合蛋白,为基于MAGE-n的肿瘤疫苗研制提供良好的抗原奠定了实验基础。
- 张秀敏史琪琪李增山叶菁王军伟林慧曲萍胡沛臻隋延仿
- 关键词：基因融合癌症疫苗MAGE-N表位肽
- 一种重组人复合α干扰素的制备方法
- 本发明涉及一种经真核表达制备重组人复合α干扰素(cIFN)制备方法，其主要步骤是：将酵母工程菌(Pichia pastoris GS115/pPIC9K－CIFN)经种子培养、发酵罐培养、外源蛋白诱导表达及目标蛋白纯化后...
- 储炬郝玉有张嗣良庄英萍史琪琪王永红杭海峰刘志敏杨士珍吴康华
- 文献传递
- 诱导相温度对毕赤酵母表达重组人复合α干扰素聚合的影响被引量：14
- 2006年
- 研究了Pichia pastoris表达重组人复合α干扰素(cIFN)时诱导期温度对cIFN形成聚合体的影响。在5L罐上考察毕赤酵母在不同温度(30、25、20℃)下诱导时菌体生长和cIFN表达的差异,发现毕赤酵母在20℃下菌体生长不受影响,总蛋白表达量有所降低,相当于30℃发酵时胞外总蛋白的67.8%。但是通过非还原性电泳、Native-PAGE及Western blotting分析发现较高温度(30℃)诱导表达时,分泌到胞外的cIFN容易形成聚合体,单体含量很少。诱导相控制温度为20℃时,明显降低了cIFN聚合体的形成,cIFN单体量为570mg/L,发酵上清液抗病毒活性为1.05×109IU/mL。与控制诱导相温度为30℃相比,cIFN单体量提高了7.2倍,发酵上清液中单位体积的cIFN抗病毒活性提高了38.7倍。
- 史琪琪郝玉有吴康华储炬庄英萍张嗣良
- 关键词：毕赤酵母
