崔京腾
- 作品数：15 被引量：66H指数：5
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：山东省科技发展计划项目国家水禽产业技术体系建设项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：27
- 2012年
- 【目的】利用SYBR GreenⅠ荧光定量技术建立一种相对定量检测坦布苏病毒的方法。【方法】针对坦布苏病毒NS5、E基因分别设计了1对特异性引物,同时设计1对扩增内参基因β-actin引物,将PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,倍比稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中NS5、E基因及内参基因β-actin标准曲线的构建,并进行反应的灵敏性、特异性和重复性试验。【结果】结果显示标准曲线线性关系R2值均在0.99以上,检测极限约为1.0E+01拷贝数质粒DNA;特异性结果表明只能检测到坦布苏病毒的扩增曲线;批内和批间重复性试验的变异系数均小于0.5%;用已建立的方法对临床样品进行3次重复检测,病毒RNA的检出率为100%。【结论】本研究初步建立了基于坦布苏病毒NS5、E基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR的方法,为养鸭场诊断和监测坦布苏病毒提供了一种新的特异、灵敏的检测方法。
- 于春梅刁有祥唐熠崔京腾高绪慧张颖鞠小军武利利
- 关键词：E基因SYBR
- 鸭瘟病毒对SPF鸭的致病性研究被引量：2
- 2012年
- 【目的】探讨鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)对SPF鸭的致病性。【方法】将DPV分别通过点眼滴鼻和皮下注射接种途径人工感染SPF鸭,以未攻毒健康SPF鸭为对照,观察各组鸭的发病情况及症状,于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组SPF鸭,采集肝脏、脾脏、肾脏、肺、心脏、气管、食道、肠道、胸腺、法氏囊、脑和泄殖腔等组织,常规方法制备石蜡切片,HE染色,观察各器官病理组织学变化,同时利用间接免疫荧光染色法(IFA)对DPV抗原在鸭体内的分布进行检测,并进行血常规和血液生化指标检测,分析了DPV对SPF鸭淋巴细胞转化率的影响。【结果】DPV接种后,引起鸭高热、下痢,组织器官出血、坏死,食道、泄殖腔黏膜出血、溃疡并有灰黄色假膜覆盖;病理组织学变化以血管壁损伤为主,肝、脾细胞变性、坏死,消化道黏膜上皮细胞坏死脱落。DPV感染后,在鸭的脾脏、胸腺、法氏囊、肝脏、食道、泄殖腔、肠道、肾脏、肺及气管中均检测到DPV抗原,且以肝脏、脾脏等组织中荧光最强;在脑和心脏中均未检测到DPV抗原。DPV感染组鸭血清中白细胞总数(WBC)、红细胞总数(RBC)、血小板总数(PLT)和总蛋白(TP)、血红蛋白(HGB)含量及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、淋巴细胞转化率与对照组差异大多达显著或极显著水平。【结论】DPV感染主要引起SPF鸭各组织器官广泛性出血;脾脏、胸腺、法氏囊等免疫器官首先受到攻击和损害,并造成免疫抑制;皮下注射接种DPV比点眼滴鼻接种对SPF鸭的致病性强。
- 张坤刁有祥程彦丽崔京腾王蛟刘鑫
- 关键词：鸭瘟病毒淋巴细胞转化病理组织学
- 鸭源NDV对SPF鸭免疫机能的影响被引量：2
- 2013年
- 【目的】探讨鸭源新城疫病毒(NDV)对SPF鸭免疫机能的影响。【方法】选用120只已免疫H5N1禽流感油乳剂灭活疫苗的SPF鸭,随机分为静脉注射组、点眼滴鼻组和对照组,每组40只。攻毒(2个试验组接种鸭源NDV 0.2mL(含病毒106 ELD50),对照组点眼滴鼻等量生理盐水)后观测各组鸭的发病死亡情况,于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组鸭,采集脾脏、法氏囊,按常规方法制备石蜡切片,TUNEL法检测脾脏、法氏囊细胞凋亡情况,同时检测血液生化和血液常规指标,并测定鸭源NDV对SPF鸭外周血中淋巴细胞转化率和H5N1油乳剂灭活疫苗HI抗体效价的影响以及CD4+/CD8+的动态变化,分析不同处理组鸭源NDV对SPF鸭免疫机能的影响。【结果】攻毒后,试验组SPF鸭发病率为100%,死亡率为32.5%,并出现呼吸困难、肺脏出血、腺胃乳头出血等症状及剖检变化;血常规检测结果显示,鸭源NDV静脉注射组和点眼滴鼻组血液中红细胞总数、血红蛋白含量先降低后显著升高,血小板总数、白细胞总数降低且均与对照组差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);血液生化检测结果显示,试验组鸭谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、淀粉酶活性升高,总蛋白含量降低,与对照组相比差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);静脉注射组和点眼滴鼻组的H5N1油乳剂灭活疫苗HI抗体效价比对照组低但差异不显著,淋巴细胞转化率与对照组相比降低且差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);静脉注射组与点眼滴鼻组的CD4+/CD8+变化趋势基本一致,均为先升高后降至正常水平以下。TUNEL法检测脾脏、法氏囊均出现细胞凋亡,且凋亡率随着攻毒后时间的增加而升高。【结论】SPF鸭接种鸭源NDV后能引起免疫抑制。
- 崔京腾刁有祥王蛟孙晓艳刘鑫
- 关键词：鸭源新城疫病毒免疫抑制
- 1株B亚型禽偏肺病毒的分离与鉴定被引量：8
- 2014年
- 从山东省多个地区的商品肉鸡养殖场采集64份疑似病料，通过RT—PCR方法检测出37份禽偏肺病毒阳性病料，以此作为病毒分离材料接种SPF鸡胚，盲传至第7代时鸡胚生长明显迟滞。取阳性尿囊液在CEF中培养，呈现禽偏肺病毒典型细胞病变（CPE）：细胞变圆、悬浮，有合胞体形成。将分离株接种于Veto细胞及DF-1细胞均出现类似病变。对分离株F基因进行测序，并与GenBank中发表的部分代表序列比较。结果显示，与B亚型禽偏肺病毒的核苷酸同源性最高，为97．4％～99．3％；与A亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性较低，为77．4％～78．1％；而与C亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性最低，为69．5％～69．7％。基因分型显示分离株为B亚型禽偏肺病毒，将该毒株命名为禽偏肺病毒SDWF株。
- 薛聪唐熠陈琳崔京腾欧全宾孙晓艳裴苹苹刁有祥
- 鸭源新城疫病毒的分离鉴定及其对SPF鸭免疫机能的影响
- 鸭新城疫(Duck Newcastle disease)是由新城疫病毒引起的一种急性、高度接触性传染病，该病以呼吸道、消化道粘膜充血、出血或溃疡，出现扭头、转圈等神经症状为主要特征。传统理论认为新城疫病毒不感染水禽，即使...
- 崔京腾
- 关键词：鸭源新城疫病毒F基因HN基因
- 文献传递
- B亚型禽偏肺病毒重组G蛋白间接ELISA方法的建立及应用被引量：4
- 2013年
- 以纯化的B亚型禽偏肺病毒(aMPV)疫苗株(VIR-115B)重组G蛋白作为包被抗原,对各项条件进行优化,确定判定标准,建立检测B亚型aMPV抗体的间接ELISA方法。将构建好的重组质粒转入Rosetta(DE3)感受态细胞进行诱导表达,获得重组G蛋白。利用亲和层析法对表达产物进行纯化,并用Western-blotting对表达产物进行鉴定。以纯化后的重组G蛋白作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立检测B亚型aMPV抗体的间接ELISA诊断方法。结果显示,成功表达并纯化了B亚型aMPV疫苗株(VIR-115B)重组G蛋白,Western-blotting检测结果证明表达产物具有良好的反应原性。以重组G蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。交叉试验结果表明重组G蛋白与新城疫、禽流感(H9N2)、传染性支气管炎和传染性法氏囊阳性血清均不发生交叉反应。该方法与法国IDEXX公司生产的aMPV抗体检测试剂盒符合率为96.0%。采用本试验建立的间接ELISA方法对山东省7个地区鸡场的1 139份鸡血清进行了检测,结果表明,山东省部分地区aMPV的抗体阳性率为37.05%。本试验建立的间接ELISA方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,利用该方法初步证实山东省部分地区存在aMPV感染现象。这一研究为aMPV诊断试剂盒的研制奠定了基础,并为该病的诊断与流行病学调查提供有效的技术手段。
- 陈琳刁有祥邹金峰唐熠程彦丽欧全宾薛聪崔京腾鞠小军孙晓艳裴萍萍
- 关键词：B亚型间接ELISA
- 鸭源新城疫NP蛋白的遗传变异与原核表达
- 本试验对分离自患病鸭一株鸭源新城疫SDFC株的NP基因进行了克隆和原核表达载体的构建，进行了诱导表达和重组蛋白抗原性的检测。从而为进一步研究NP的功能及鸭源新城疫预防和控制提供了理论依据。SDS-PAGE分析表明，可见大...
- 程彦丽刁有祥欧全宾崔京腾
- 关键词：鸭源新城疫病毒NP蛋白原核表达
- 鸭源新城疫NP蛋白的遗传变异与原核表达
- 引言鸭源新城疫,是一种有囊膜的、单股不分节段的负链高致病性的RNA病毒,其基因组共编码六种结构蛋白。其中NP蛋白、L蛋白、P蛋白及病毒RNA相结合组成了病毒的核衣壳。NP蛋白主要是保护病毒基因组RNA,参与病毒的复制和转...
- 程彦丽刁有祥欧全宾崔京腾
- 文献传递
- 鸭源新城疫病毒的分离鉴定及共对SPF鸭免疫机能的影响
- 鸭新城疫(Duck Newcastle disease)是由新城疫病毒引起的一种急性、高度接触性传染病，该病以呼吸道、消化道粘膜充血、出血或溃疡，出现扭头、转圈等神经症状为主要特征。传统理论认为新城疫病毒不感染水禽，即使...
- 崔京腾
- 关键词：鸭源新城疫病毒F基因HN基因
- 文献传递
- 山东地区16株H9N2亚型禽流感病毒HA基因的序列分析被引量：6
- 2012年
- 为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)山东分离株的遗传变异情况,采用RT-PCR技术对16株从山东不同地区分离的H9N2亚型禽流感病毒的HA基因进行扩增、克隆和测序,并对所获得的HA全序列进行同源性和遗传进化分析。结果显示,16个分离株的裂解位点均为RSSR↓GLF,符合低致病性禽流感病毒的分子特征;有7～9个潜在糖基化位点;受体结合位点除198位有变异,其他位点均较保守;234位氨基酸均为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特征;16个分离株HA基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为96.3%～99.9%和97.1%～99.6%;16个分离株同属于欧亚分支中的A/Duck/Hong Kong/Y280/97亚群。
- 武利利刁有祥鞠小军于春梅崔京腾
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型HA基因
