- 用单克隆抗体亲和层析法纯化重组人肿瘤坏死因子α被引量：3
- 1992年
- 用抗rHuTNF-α单抗(G_(11)、D_(12))与溴化氰活化的Sepharose4B偶联制成亲和层析柱,纯化了rHuTNF-α。结果表明,经G_(11)-Sepharose4B柱纯化的TNFα比活性比纯化前提高2.71～4.51倍;经D_(12)-Sepharose4B柱纯化的TNF-α比活性提高2.3～3.4倍。G_(11)-Sepha-rose4B柱的蛋白回收率高于D_(12)-Sepharose4B柱。纯化产物经SDS-PAGE确定达电泳纯,其分子量约为17000道尔顿。
- 许辉安献禄刘雪松金伯泉王俊龙智刚黄传书
- 关键词：肿瘤坏死因子-A单克隆抗体
- 两种寡核苷酸基因定位诱导突变方法的比较
- 1991年
- 作者对两种寡核苷酸基因定位诱导突变方法进行了比较.在192个单核苷酸缺失突变中,含U单链基因突变系统和经典噬菌体M13单链突变系统均准确完成缺失突变,两种方法的突变年率分别为6％和1％左右.比较可以发现,含U单链突变系统具有突变率高,易于筛选,突变位点准确等优点,但操作复杂,成本高,需特殊试剂和菌种;噬菌体M13单链突变系统则方法简便,成本低,周期可缩短至1 2d,易于一般实验室使用,缺点是突变率较低,筛选困难.
- 智刚张德震苏成芝
- 关键词：核苷酸基因
- 人肿瘤坏死因子与人γ干扰素重组双功能融合蛋白的研制被引量：1
- 1991年
- 肿瘤坏死因子与γ干扰素具有非常相似的生物学活性,并在一些主要的生物活性方面表现有较强的协同作用。本文采用寡核苷酸指导下的定位缺失-插入体外基因突变技术,删除了干扰素与肿瘤坏死因子串联基因之间的非编码区,去徐了γ干扰素的翻译终止信号,插入了一个人工设计的连接肽,使γ干扰素与肿瘤坏死因子基因在不改变读码框架的条件下融合起来,并在大肠杆菌表达系统中表述了兼有γ干扰素和肿瘤坏死因子功能的融合蛋白。
- 张德震吴淑华智刚张智清金奇金冬雁赵小侠侯云德苏成芝
- 关键词：肿瘤坏死因子Γ干扰素
- 基因突变带来的启示
- 1991年
- 基因突变是自然界生物体存在的一种自然形式的基因结构变化,具有明显的两面性,一是促进生物进化的有利突变,一是影响生物生存的不利突变。一、基因突变的矛盾转归人们认识事物的目的在于透过现象看到本质。通过对基因突变二重性的认识,人们了解了生物进化动力所存,并根据基因突变的频率、快慢和性质推断出不同种属生物亲缘关系上的远近,推断出一种生物同另一种生物分离的时间。
- 智刚苏成芝
- 关键词：基因突变
- 重组人α2a型干扰素单克隆抗体的研制、特性鉴定及初步应用被引量：4
- 1992年
- 应用常规方法建立了5株稳定分泌抗重组人α2a 型干扰素单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞系1B8、2B6、3F1、4G5和5G10,并对其免疫学特性进行了较系统的鉴定.5株单抗均为 IgG1,特异性强,与重组人α1 型、γ型干扰素以及受体菌菌体蛋白成分无交叉反应.间接 ELISA 测定小鼠腹水单抗效价1:320,000～1:10,240,000,其中3F1和5G10单抗对重组人α2a 型干扰素具中和活性(中和效价均为1:10,000)。竞争结合 ELISA 证实5株单抗针对3种不同表位。用3F1和5G10单抗建立的夹心 ELISA 能检测到60pg/ml的重组人α2a 和α2b 型干扰素。3F1单抗用于制备亲和层析柱纯化重组人α2a 型干扰素结果与进口单抗NK2相当。
- 朱勇金伯泉安献禄智刚刘雪松赵宁
- 关键词：干扰素单克隆抗体
- 重组人乙型肝炎病毒E抗原(HBeAg)的基因扩增与表达
- 1992年
- 本文从两例临床确诊为乙型肝炎患者的2mg肝穿刺标本中利用基因扩增方法,设计扩增出缺失羧基端34个氨基酸的乙型肝炎病毒C抗原(HBcAg)基因的0.45kb基因片段,将此片段克隆入表达载体,导入大肠杆菌中表达,结果获得每毫升培养液含有100万酶联反应单位的HBgAg,也存在1万酶联反应单位的HBcAg。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,其表达产物占菌体总蛋白的30～37％,分子量为155kD。HBeAg基因结构及表达形式有待进一步研究和探讨。
- 智刚王东李波安献禄王军楼王利兵张迺蘅
- 关键词：基因扩增基因表达乙型肝炎病毒抗原
- 重组人r干扰素的纯化及其N端氨基酸序列分析被引量：4
- 1991年
- 本文对两个重组人γ干扰素高效表达株pIFN-γ及PBVIFN-γ的表达产物进行了纯化并对纯化的γ干扰素进行了活性鉴定及N端氨基酸序列分析。采用连续沉淀的方法对高表达菌株pBVIFN-γ及低表达菌株pIFN-γ,裂解液进行初步纯化,然后应用单克隆抗体亲和层析方法进行纯化,分别可纯化14倍与933倍,均达电泳纯,回收率分别为25％和30％,比活性达7.56×10~7U/mg蛋白。SDS-PAGE电泳上γ干扰素分子量约17.5kD。测定了纯化的γ干扰素N末端19个氨基酸序列,与由其DNA序列推导的氨基酸序列完全一致,确认了本研究所表达、纯化的γ干扰素达到了较高纯度。本方法为γ干扰素的批量生产奠定了基础。
- 张德震金冬雁吴淑华智刚张智清侯云德苏成芝
- 关键词：干扰素纯化氨基酸分析
- 重组人α2a干扰素的高效表达与纯化被引量：14
- 1991年
- 构建了人α2a型干扰素的表达载体,并在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量平均为10~ IU/L菌液。还对其表达产物进行了纯化。经盐酸胍裂解菌体、硫酸铵沉淀、酸化处理,再经阴、阳离子交换层析和单克隆抗体亲和层析,使表达产物纯化了1072倍,比活性达1.2×IO~ IU/mg蛋白,达到序列纯,回收率达54％。表达产物N端21个氨基酸序列分析结果与IFN-α2a cDNA推导的序列相符合。
- 智刚周园李玉英张智清苏成芝侯云德
- 关键词：干扰素基因表达
- 肿瘤坏死因子α的活性测定与放线菌素D的作用被引量：3
- 1991年
- 作者比较了检测肿瘤坏死因子α生物学活性的几种方法,认为直接在镜下观察肿瘤坏死因子α对L929细胞的杀伤作用最为简捷,但客观性较差。同位素标记法敏感准确,可靠安全,但操作较复杂且易受污染。中性红染色检测结果与实际细胞病变程度不相符。结晶紫染色法操作简单,能客观反映镜下所见的细胞病变情况,并与同位素标记法所得结果一致,可代替其它方法作为肿瘤坏死因子α的常规检测方法。放线菌素D可增加L929细胞对肿瘤坏死因子α细胞毒性的敏感性,在检测系统中加入微量放线菌素D(0.5mg/L),可使检测系统敏感性增加1000倍。
- 张德震智刚苏成芝
- 关键词：肿瘤坏死因子活性检测放线菌素D
- 重组人乙型肝炎核心抗原昆虫杆状病毒表达载体的构建
- 1990年
- 作者利用寡核苷酸定位诱导突变技术,将重组的人乙型肝炎核心抗原(HBcAg),插入丫蚊夜蛾核多角体蛋白病毒,表达载体pAc360的-35位BamH 酶切位点,经突变缺失多角体蛋白基因调控区和HBcAg起始码ATG间32个非编码核苷酸序列,获得一个与自然核多角体蛋白基因结构形式相同的表达载体,即核多角体蛋白基因调控区的-1位紧连核心抗原的起始码ATG.
- 智刚胡裕文张德震金奇侯云德容敏清苏成芝王克为
- 关键词：乙型肝炎核心抗原昆虫杆状病毒
