杜威世
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 新型pⅨ噬菌体展示系统的建立及初步评价
- 2005年
- 目的:构建新型噬菌体展示载体,评价其展示效果,为构建scFv库寻找新的展示体系。方法:PCR分离、扩增M13KO7中pⅨ蛋白编码基因,克隆入噬菌体展示载体PHB-gⅢ,替换原载体中的gⅢ-CT段,构建载体PHB-pⅨ,并将相对分子质量约50×103的碱性磷酸酶的编码基因分别克隆入两展示载体,观察其展示碱性磷酸酶能力的差别。结果与结论:成功构建了展示载体PHB-pⅨ,该载体具有与PHB-gⅢ相当的展示碱性磷酸酶的能力,且相同滴度的PHB-gⅢ噬菌体DNA含量略高于PHB-pⅨ噬菌体DNA含量,提示PHB-gⅢ系统展示外源蛋白时存在感染能力下降。PHB-pⅨ系统具有用于展示噬菌体抗体库的良好应用前景。
- 王双孙志伟杜威世张锦超俞炜源
- 关键词：噬菌体展示抗体库
- 细胞粘附分子P-selectin功能片段在CHO细胞表面的锚定表达被引量：1
- 2008年
- 为了筛选出针对细胞粘附分子P-selectin的特异性抗体,克隆了P-selectin功能性基因片段,使其通过糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定表达于真核细胞的细胞膜上,以用作筛选的抗原。提取人血小板的总RNA,RT-PCR扩增出P-selectin目的基因片段,同时用重叠延伸PCR的方法合成细胞膜锚定信号肽GPI基因;将二者按上下游顺序插入含有弱化neo基因的真核表达载体pMCEw2中;并将构建的重组质粒pMCEw2-GPI-P-selectin转染CHOdhfr-细胞,G418筛选获得阳性细胞株,利用ELISA、免疫印迹和免疫荧光法检测P-selectin的表达。实验证实了P-selectin在细胞膜上获得稳定表达。为进一步进行抗P-selectin的特异性抗体的筛选提供了必要前提。
- 娄晓芳王双杜威世于蕊俞炜源孙志伟
- 关键词：糖基化磷脂酰肌醇粘附分子
- 抗肝癌人源化单链抗体hscFv_(25)的体外亲和力成熟被引量：2
- 2004年
- 目的:提高人源化抗肝癌单链抗体hscFv25的亲和力. 方法:设计并合成人源化抗肝癌单链抗体hscFv25重链及轻链CDR3的半随机突变引物,构建突变体抗体库,竞争筛选亲和力更高的突变体抗体,对所得到的高亲和力的候选抗体,在大肠杆菌中进行可溶性表达,并采用细胞ELISA、细胞涂片免疫组织化学染色的方法,对该抗体进行初步的活性鉴定. 结果:得到了3株候选高亲和力突变体抗体,其中的一株在大肠杆菌中获得了可溶性表达后,进一步的活性检测结果表明,该抗体的相对亲和力比亲本单链抗体提高了60倍左右,同时该抗体对肝癌细胞(SMMC-7721)的免疫组织化学染色呈强阳性,着色情况与亲本抗体相一致,而对正常肝细胞(HL-02)染色呈阴性. 结论:成功地构建了人源化抗肝癌单链抗体hscFv25的突变体抗体库,并筛选到了一株亲和力更高的突变体抗体.
- 孙志伟王双杜威世俞炜源
- 关键词：大肠杆菌
- 噬菌体抗体库研究进展被引量：2
- 2006年
- 治疗性抗体的发展经历了异源抗体、人源化抗体和人源性抗体几个阶段。目前,人源性抗体是治疗性抗体发展的主要方向,而噬菌体抗体库技术的出现为人源性抗体的制备提供了良好的技术平台,并且逐渐成为目前获得人源性抗体的主要手段之一。噬菌体抗体库技术是20世纪90年代初期抗体工程领域的一项重大进展,它是噬菌体展示和抗体库2种技术的集成,目前广泛应用于生物医学领域。本文对该技术的原理、类型、特点及研究进展进行了综述。
- 杜威世孙志伟俞炜源
- 关键词：噬菌体展示抗体库
- DNA分子片段与载体连接的方法及在大容量抗体库构建中的应用
- 本发明公开了一种DNA分子片段与载体连接的方法，载体上包括至少三个不同的酶切位点E1、E2和E3，其中E2位于E1和E3之间；待连接的DNA分子片段至少包括酶切位点E1和E3，先对载体上酶切位点E1和E2进行酶切和去磷酸...
- 孙志伟王双俞炜源杜威世余云舟
- 文献传递
- 全合成人源性噬菌体抗体库的构建被引量：5
- 2006年
- 目的:构建全合成人源性噬菌体抗体库。方法:选择部分使用频率较高的人抗体胚系基因家族的框架区基因进行人工合成,同时人工设计合成半随机CDR3,通过重叠拼接延伸PCR的方法合成抗体基因。然后利用限制性内切酶SfiⅠ、NotⅠ分别双酶切抗体基因和噬菌体展示载体。连接后的重组噬粒通过电击转化的方法转入大肠杆菌TG1,构建抗体库。结果与结论:PCR结果显示,通过优化后的方法能在保证抗体库多样性的前提下,高效地获得抗体基因。经过数十次电击转化构建了库容量为2×109的全合成抗体库,菌落PCR、测序及筛选结果表明,抗体库质量优良,为筛选人源性治疗抗体奠定了基础。
- 杜威世王双孙志伟俞炜源
- 关键词：噬菌体展示单链抗体
- DNA分子片段与载体连接的方法及在大容量抗体库构建中的应用
- 本发明公开了一种DNA分子片段与载体连接的方法，载体上包括至少三个不同的酶切位点E1、E2和E3，其中E2位于E1和E3之间；待连接的DNA分子片段至少包括酶切位点E1和E3，先对载体上酶切位点E1和E2进行酶切和去磷酸...
- 孙志伟王双俞炜源杜威世余云舟
- 文献传递
