陈宝珍
- 作品数：8 被引量：3H指数：1
- 供职机构：上海理工大学医疗器械与食品学院更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程理学化学工程更多>>
- 产胸苷磷酸化酶菌株初筛方法的建立及其应用被引量：1
- 2014年
- 建立了一种快速简便地筛选高产胸苷磷酸化酶菌株的初筛方法及其在紫外诱变育种中的应用。结果显示,在液体培养基中,添加25mmol/L胸苷不会影响菌体生长且菌体中的胸苷磷酸化酶能催化胸苷生成胸腺嘧啶,在同等浓度下产物胸腺嘧啶OD290nm远大于胸苷OD290nm,从而导致发酵液OD290nm显著升高,据此建立产胸苷磷酸化酶短乳杆菌的初筛方法。在此基础上结合紫外诱变条件的优化,确定初次紫外照射时间为20 s,停止5 min后再照射10 s、15 s、20 s,控制紫外致死率在80%左右,以此条件构建突变文库。通过初筛和复筛确定突变株EB27、EA42酶活分别达到1.025 U/mg湿菌体和0.916 U/mg湿菌体,较初始菌株提高了50%和35%,且具有良好的遗传稳定性。
- 陈宝珍李红梅王伟洁陈群毅
- 关键词：短乳杆菌紫外诱变胸苷磷酸化酶
- 一种发酵培养基及用该培养基发酵生产尿苷磷酸化酶的方法
- 本发明提供的一种发酵培养基，包含：NaCl (3~12g/L)，葡萄糖（10~25g/L），酵母膏（5~15g/L），蛋白胨（2~15g/L），K<Sub>2</Sub>HPO<Sub>4</Sub>.3H<Sub>2<...
- 李红梅陈宝珍王伟洁侯堃周思远刘阳
- 文献传递
- 一种发酵培养基及用该培养基发酵生产胸苷磷酸化酶的方法
- 本发明提供一种发酵培养基，包含：NaCl(5~10g/L)，葡萄糖（20~30g/L），酵母膏（10~20g/L），蛋白胨（10~20g/L），胸苷（10~20mmol/L），以及双蒸水。基于上述发酵培养基的发酵方法，步...
- 李红梅王伟洁陈宝珍薛芳
- 短乳杆菌产胸苷磷酸化酶发酵培养基的优化
- 2013年
- 胸苷磷酸化酶在核苷类物质合成中具有重要作用,本研究以短乳杆菌为胸苷磷酸化酶生产菌种,对短乳杆菌产胸苷磷酸化酶发酵培养基进行优化。首先通过Plackett-Burman设计筛选出影响短乳杆菌产胸苷磷酸化酶的3个较为重要因素:发酵时间(P=0.030)、接种量(P=0.033)和葡萄糖浓度(P=0.019)。在此基础上采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,并利用响应面中心组合设计对影响显著因素进行优化,得到最适培养基组成成分和培养条件为:发酵初始pH 8.0,葡萄糖18 g/L,酵母膏15 g/L,NaCl 7.5 g/L,蛋白胨10 g/L,胸苷15 mmol/L,摇床转速110 r/min,发酵温度38℃,发酵时间10.57 h,接种量1.54%。在此优化条件下,短乳杆菌产胸苷磷酸化酶能力得到了很大提高,短乳杆菌胸苷磷酸化酶活从0.400 U/mg湿菌体提高到1.172 U/mg湿菌体,比优化前提高了2.93倍。蛋白质凝胶电泳分析显示经优化后每克湿菌体胸苷磷酸化酶的含量明显高于优化前。
- 王伟洁李红梅薛芳陈宝珍高露娇
- 关键词：短乳杆菌胸苷磷酸化酶响应面法发酵培养基
- 基因组重排选育胸苷磷酸化酶高产菌株被引量：1
- 2013年
- 以短乳杆菌为研究对象,通过基因组重排技术选育胸苷磷酸化酶高产菌株。首先采用紫外复合诱变筛选出EA_(42)、EB_(27)作为基因组重排育种的亲本并制备成原生质体,分别采用紫外照射50 min和60℃水浴加热60 min双亲灭活原生质体,然后用质量分数40%PEG 6000,30℃恒温诱导融合10 min进行基因组重排。经过3轮基因组重排育种,成功选育出3株胸苷磷酸化酶高产菌株,其中菌株F3-36在菌体发酵量提高的前提下,进行5次传代测试其胸苷磷酸化酶活均在2.500U/mg湿茵体,比原始茵株酶活提高了260%。
- 李红梅王伟洁薛芳陈宝珍
- 关键词：基因组重排原生质体短乳杆菌胸苷磷酸化酶
- 双蒸水储水箱装置
- 双蒸水储水箱装置包括主体支架、储水箱支架和可释放地固定在储水箱支架上的双蒸水储水箱。储水箱支架通过水平枢转轴与主体支架连接，使其相对于主体支架向上并向外枢转180度。当处于静止位置时：储水箱支架的外侧与主体支架的外侧对齐...
- 侯堃薛芳陈宝珍李红梅
- 文献传递
- 一种利用短乳杆菌发酵生产胸苷磷酸化酶的方法
- 本发明提供的一种利用短乳杆菌发酵生产胸苷磷酸化酶的方法，包括：将短乳杆菌划线接种培养16～24h，并在4℃下保存备用；取一定量酵母膏溶于双蒸水中，调节其pH值在6.0～8.0之间，在121℃下灭菌15～20min，得到酵...
- 李红梅王伟洁陈宝珍薛芳
- 文献传递
- 蜡样芽孢杆菌亮氨酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的表达及重组酶性质被引量：1
- 2015年
- 本研究采用PCR技术从蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus基因组DNA中克隆出亮氨酸脱氢酶基因，构建重组表达质粒pET280t（＋）-ldh，实现在大肠杆菌中的高效表达，并分析重组亮氨酸脱氢酶的酶学性质。结果表明，从Bacillus cereus成功克隆的亮氨酸脱氢酶编码基因约为1000bp，表达的重组亮氨酸脱氢酶相对分子质量约为40kDa。酶学研究结果表明：该酶的最适反应温度为37℃，其热稳定性好，30℃的半衰期长迭330h；最适反应pH为9．5；在pH7．0-8．0的缓冲液中保存24h后仍保持原有酶活力的80％以上；金属离子Fe2＋对该酶具有明显的促进作用，而EDTA强融抑制亮氨酸脱氢酶的活性。动力学分析结果表明该酶对底物NADH催化的km和Vmax。分别为0．635mmol／L和1．54μmol／（L·min）。亮氨酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的成功表达为手性氨基酸的生物合成提供了可能。
- 陈宝珍李红梅段琳琳
- 关键词：蜡样芽孢杆菌克隆表达酶学性质
