于建石
- 作品数：14 被引量：57H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金World Health Organization更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- SARS冠状病毒N蛋白基因的表达及其在SARS诊断中的应用
- 2006年
- 目的获得重组SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白抗原,建立特异性诊断SARS病毒感染的免疫学方法。方法大肠埃希菌中表达SARS病毒N蛋白基因,用金属螯合层析纯化N蛋白,建立检测SARS抗体的ELISA方法。结果大肠埃希菌中表达了SARS病毒全长N蛋白抗原,经包涵体洗涤和金属螯和纯化后得到纯度较高的重组蛋白。用重组抗原ELISA检测30名SARS患者抗体全部为阳性,30名正常人血清为阴性,30名发热非SARS患者血清为阴性。结论SARS表达核蛋白可以在大肠埃希菌中得到高效表达,纯化的重组N蛋白具有良好抗原性,可用于检测SARS抗体。
- 杜培革王笑英于建石安丽萍吕刚
- 关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒科酶联免疫吸附测定
- 乙型脑炎病毒表达载体的研究
- 第一部分：乙型脑炎病毒全基因克隆的研究
我国是唯一使用乙型脑炎减毒活疫苗的国家，活疫苗使用的毒株为SA-14-14-2。该毒株是将乙脑病毒强毒株SA14株通过地鼠肾细胞在36℃下长期培养传代，在100代后进行多...
- 于建石
- 关键词：乙型脑炎病毒登革病毒嵌合病毒黄病毒SARS冠状病毒VERO细胞
- 文献传递
- 在昆虫细胞表达汉坦病毒的核蛋白及其在血清检测中的初步应用被引量：1
- 2003年
- 李川孟祥芝张全福刘琴芝于建石胡孔新刘刚梁米芳李德新
- 关键词：昆虫细胞汉坦病毒核蛋白血清检测杆状病毒ELISA
- 乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的构建乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体，为进一步研究以乙脑病毒为载体的新型疫苗奠定基础。方法（1）构建了两个乙脑病毒复制子：一个为完全缺失PrM／E基因（命名为Full △prMJE Replicon）；一个保留E基因C端213bp（命名为Partial △prM／E Replicon），并代之以多克隆位点。（2）将复制子RNA转染BHK-21细胞，于24、48、72、96h采用Real-time PCR验证复制子的自主复制能力。（3）于复制子多克隆位点处插入YFP报告基因，并将含报告基因的复制子RNA转染BHK-21细胞，采用荧光显微镜观察及流式细胞仪检测验证YFP的表达。结果（1）两个复制子RNA转染BHK-21细胞后，RNA有随时间增加而不断增多的趋势。（2）含报告基因的复制子RNA转染BHK-21细胞后，荧光信号持续增强，表达YFP的阳性细胞率也逐渐增多。结论构建的乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体Full △prM／E Replicon及Partial △prM／E Replicon具有自主复制能力及对外源蛋白的表达能力。
- 韦艳李川陆鹏于建石李建东刘琴芝张全福李德新
- 关键词：脑炎病毒复制子杂合子检测
- 在传染性非典型肺炎患者组织和血液中发现冠状病毒被引量：7
- 2003年
- 用RT-PCR从广东两例传染性非典型肺炎(非典型肺炎)死亡病例的肺和脾标本中,以及北京、辽宁和宁夏非典型肺炎患者血清中,扩增出冠状病毒核苷酸序列。这些PCR产物为冠状病毒RNA聚合酶基因部分片段,所有测定的序列和国内外SARS病毒序列相同。这些发现提示,冠状病毒和非典型肺炎关系密切,有助于确定我国非典型肺炎的病因。所建立的套式PCR方法可以用于检测临床标本。由于血液中存在SARS病毒,进行血清操作时需要注意安全保护。
- 李德新于建石胡孔新段淑敏毕胜利许文波崔爱利张燕洪涛吴昊窦志勇何雅慧韩玉霞刘刚杜润蕾张全福刘琴芝梁米芳王建伟郭元吉徐红戴淑玲董小平梁国栋阮力
- 关键词：传染性非典型肺炎冠状病毒PCR核苷酸序列
- 人源抗严重急性呼吸综合征(SARS)病毒基因工程抗体的初步研究被引量：9
- 2003年
- 严重急性呼吸道综合征(severeacuterespiratorysyndrome,SARS)或称传染性非典型肺炎,已严重威胁人民健康和生命安全。快速研制一种可用于紧急预防SARS病毒感染的基因工程抗体预防制剂迫在眉睫。为此,运用噬菌体表面呈现技术,从多个SARS病人恢复期血中获得淋巴细胞,通过基因工程手段,构建了人源抗SARS病毒基因工程抗体文库,并筛选获得37株特异抗SARS病毒基因工程Fab抗体,其中11株人源抗体结合基因工程重组的SARS病毒核(N)蛋白,其中的1株在Westernblot分析中与SARS病毒结合,识别SARS病毒N蛋白线性位点。对所获抗体的功能鉴定及基因分析正在进行中。人源抗SARS病毒基因工程抗体的获得,将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径。
- 杜润蕾于建石梁米芳刘琴芝李川韩露露段淑敏周为民张全福王涛毕胜利李德新
- 关键词：严重急性呼吸综合征SARS病毒基因工程抗体FAB抗体抗体库
- 乙型脑炎病毒表达载体的研究
- 2005年
- 用RT-PCR方法分段扩增了乙型脑炎病毒SA14-14-2疫苗株5′、3′NCR,利用融合PCR技术在5′、3′NCR之间引入BamHⅠ酶切位点,将5′NCR置于T7启动子控制之下,构建乙脑病毒微复制子表达载体pMR。分别将绿色荧光蛋白(GFP)和汉滩病毒核蛋白编码区基因插入到pMR中,构建两种表达外源基因的乙脑病毒微复制子表达载体:pMR-GFP和pMR-84FliS。经荧光显微镜直接观察、Westernblot、ELISA等方法检测,证实外源基因能够在辅助病毒SA14-14-2感染的BHK-21细胞中表达。
- 于建石孟祥芝胡孔新刘琴芝张全福李川李德新
- 关键词：BHK-21细胞T7启动子PMR基因插入汉滩病毒复制子
- 严重急性呼吸综合征(SARS)患者不同组织中冠状病毒的分离和鉴定被引量：6
- 2003年
- 严重急性呼吸综合征(SARS)自2002年11月在中国广东爆发后,已迅速蔓延成为全球性传染疾患。为了了解SARS冠状病毒的特征,对先前SARS冠状病毒PCR检测呈阳性的来自广东的3份尸检肺组织标本、2份尸检脾组织标本,来自北京的2份咽拭子标本和1份血清标本,利用10种不同的细胞系分离病毒。结果显示,上述标本在感染细胞后,分别可在293、Vero-E6、Vero、RD和HeLa细胞系中产生细胞病变(CPE)。不同标本在上述细胞系中致CPE的能力不同,但CPE出现的时间和病变形态学特征无显著性差异。以恢复期SARS病人血清为抗体,用间接免疫荧光法对感染后细胞培养的检测,冠状病毒RT-PCR对感染后细胞RNA的检测,初步证明分离的病毒为冠状病毒。结果再次证明冠状病毒为SARS的病原,它具有较广泛的器官分布和细胞感染能力。血清中SARS冠状病毒的分离,高度提示在SARS发病过程中存在有病毒血症。
- 段淑敏赵新生温瑞福李德新洪涛毕胜利王健伟于建石胡孔新黄晶晶张素香徐红许文波郭元吉戴淑玲董小平阮力
- 关键词：严重急性呼吸综合征SARS冠状病毒
- 猪瘟病毒石门株全基因组cDNA文库构建、序列测定及分析被引量：18
- 1999年
- 根据已发表的猪瘟病毒序列 ,设计并合成了 1 8对覆盖全长基因组的引物 .应用RT PCR技术从猪瘟病毒石门株感染的猪血中扩增出各相应的cDNA片段 ,分别克隆 ,构建了石门株全基因组的cDNA文库并完成了序列测定 .石门株基因组全长 1 2 2 98nt,其中 5′端和 3′端非编码区长度分别为 373和 2 31nt,中间一个大的开放阅读框长 1 1 6 97nt,翻译成一个包含3898个氨基酸残基的多聚蛋白 .
- 黄茜华张楚瑜王家富付烈振王宁朱燕怀济森张玮于建石许晖
- 关键词：CDNA文库克隆
- 用重组汉坦病毒NP、GP检测急性期HFRS患者血清中特异性IgG、IgM、IgA抗体被引量：12
- 2003年
- 目的 探讨肾综合征出血热 (HFRS)患者急性期IgA、IgG、IgM抗体的变化规律。方法 使用套式RT PCR检测此次病毒感染情况。用杆状病毒表达的汉坦病毒重组核蛋白 (rNP)和糖蛋白(rGP)为抗原 ,使用ELISA方法检测了 14例急性期肾综合征出血热患者的 6 1份系列血清中的IgA、IgG、IgM抗体。结果 14例肾综合征出血热患者中 ,11例患者的血清用RT PCR检出家鼠型汉坦病毒核酸。几乎所有肾综合征出血热患者早期即有IgA、IgM、IgG抗体的迅速升高 ,抗rNP抗体滴度明显高于rGP。 3种抗rNP抗体中早期IgG上升趋势最为显著 ,IgM与IgA次之 ,IgM与IgA上升趋势相近 ,但IgA的滴度明显高于IgM。抗rGP抗体中IgA变化最显著 ,IgG次之。IgM发病 2周内总的变化趋势不明显 ,但是发病 1周内滴度上升趋势明显 ,而发病第 2周内则呈下降趋势。其中 1例RT PCR阳性的患者 ,早期IgM未测出 ,IgA的滴度却较高。 1例重度患者 ,抗糖蛋白IgG、IgM和IgA抗体滴度均低于其他患者 ,且整个急性期一直维持较低水平。结论 肾综合征出血热急性期IgA、IgG、IgM变化具有明显的规律 ,抗糖蛋白和核蛋白抗体病患规律不同 ,检测IgM的同时检测IgA 。
- 孟祥芝陈宇萍李川于建石郭彦敏张全福孙玉兰李德新
- 关键词：急性期HFRSIGM抗体套式RT-PCR
