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基于甲病毒复制子的猪繁殖与呼吸综合征DNA疫苗的构建及在BHK-21细胞上的表达特性: 2013年; 以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)FZ06A株全长cDNA为模板,扩增并修饰GP3、GP5、M蛋白的基因,同时融合牛疱疹病毒VP22基因,构建了基于甲病毒复制子的PRRSV DNA疫苗pSCA-VPm3、pSCA-VPm5、pSCA-VP6和pSCA-V56。将其分别转染BHK-21细胞,通过检测转染细胞中目的基因的mRNA水平、目的蛋白的表达水平和转染细胞的凋亡情况,对该疫苗的体外表达特性进行初步研究。结果显示,PCR扩增得到长度分别为765、603、525bp的GP3、GP5、M蛋白的基因。经置换、敲除、融合VP22基因等修饰后获得长度分别为1 545、1 386、1 320bp的修饰后基因。疫苗转染细胞后,用RT-PCR能检测到目的蛋白的mRNA。IFA和Western-blot结果显示,转染细胞中均有目的蛋白表达,转染48h后细胞发生核固缩,甚至核裂解现象。证实,成功构建了基于甲病毒复制子的疫苗pSCA-VPm3、pSCA-VPm5、pSCA-VP6和pSCA-V56,在转染的BHK-21细胞中能实现目的蛋白的表达,且能诱导转染细胞发生凋亡。; 梁欠欠侯绍华李秀岭贾红袁维峰鑫婷孙建涛朱鸿飞; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒

基于甲病毒复制子的PRRSV DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答: 2013年; 本研究旨在构建含PRRSV FZ06A株GP3、GP5、M蛋白修饰后基因的复制子疫苗pSCA-Km5、pSCAVPm3、pSCA-VPm5、pSCA-VP6和pSCA-V56,研究其特异性表达目的蛋白的能力和在小鼠体内诱导免疫应答的能力。将构建的复制子质粒和空载体以100μg·只-1的剂量免疫小鼠,免疫3次,监测血清中特异性抗体和中和抗体水平及淋巴细胞经特异性抗原刺激后的增殖情况和释放IFN-γ、IL-4的水平。结果显示,各疫苗均能在转染细胞中高效表达目的蛋白。免疫小鼠,pSCA-VPm3、pSCA-VP6能引起较好的细胞免疫应答,但血清中未检测到特异性抗体。pSCA-Km5、pSCA-VPm5血清中能检测到低水平特异性抗体,但引起的细胞免疫较pSCA-VPm3、pSCAVP6低。pSCA-V56和pSCA-VPm5-PEI均能诱导细胞免疫反应和体液免疫反应,但体液免疫水平低于pSCAVPm5。pSCA-VPm5-PEI抗体水平在首免后7周突然降低,至首免后10周,无特异性抗体再次产生。所有免疫小鼠中未能检测到中和抗体。结果表明,构建的基于甲病毒复制子的PRRS DNA疫苗能诱导动物机体产生一定水平的细胞免疫和体液免疫,有望成为具有开发价值的PRRS标记疫苗。但各目的基因所能诱导机体产生体液免疫和细胞免疫的能力不同。; 梁欠欠侯绍华贾红袁维峰郭晓宇朱鸿飞; 关键词：PRRSV 小鼠免疫应答

基于甲病毒复制子载体的猪繁殖与呼吸综合征DNA疫苗的构建及免疫效力评价: 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起，以母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道疾病以及断奶仔猪高死亡率为特征的高度接触性传染病。目前世界上普遍用于预防PRRS的灭活苗和弱毒苗不能提供完全的保护或存在...; 梁欠欠; 关键词：PRRSV 免疫效力; 文献传递

非洲猪瘟P72基因在Bac to Bac系统中的表达及抗原性鉴定被引量：2: 2012年; 本研究旨在通过在Bac to Bac系统中表达非洲猪瘟病毒(ASFV)的P72基因,为进一步研究P72基因的结构、功能和免疫学特性奠定基础。本研究从含P72全长基因的菌株pGEX-6p-1-P72中扩增出P72基因全序列1941bp,将扩增的基因连接于pFastBac HTa杆状病毒载体中,构建重组质粒pFastBac HTa-P72,转化至感受态DH10Bac中,获得重组杆粒rBac-mid-P72,再将其转染至Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。经Western blotting和夹心ELISA分析,结果表明,P72在昆虫细胞Sf9中获得正确表达,重组P72蛋白可被特异性兔抗ASFV P72血清、P72单抗识别。结果提示,Bac to Bac系统表达的P72重组蛋白特异性强、活性稳定,具有良好的抗原性,为快速诊断ASF提供良好的候选抗原。; 柏丽华侯绍华贾红袁维峰郭晓宇梁欠欠朱鸿飞; 关键词：非洲猪瘟 BAC BAC 抗原性

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梁欠欠