郑茂发
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 利用大肠杆菌工程菌生产2,3-二磷酸甘油酸的研究被引量：2
- 2010年
- 通过基因工程的方法,将表达人源BPGM(bisphosphoglycerate mutase二磷酸甘油酸变位酶,E.C.2.7.5.4.)的质粒转化入大肠杆菌内,并进行培养条件的优化摸索,通过向培养基内加入葡萄糖使大肠杆菌大量发酵生产2,3-BPG(2,3-bisphosphoglycerate,2,3-二磷酸甘油酸).结果表明,当培养基中葡萄糖质量浓度为10 g/L,诱导时间为4 h,大肠杆菌工程菌表达的2,3-BPG含量最高.如果诱导后加入终质量分数为0.5%的Tween 80可以有效促进2,3-BPG分泌到培养基中.诱导后4 h添加新培养基,补加葡萄糖可以使2,3-BPG的产量提高1倍,达到7.5 mmol/L.
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- 关键词：2,3-二磷酸甘油酸糖酵解
- 重组根瘤农杆菌葡萄糖耐受型β-葡萄糖苷酶性质
- 2010年
- 目前已发现的葡萄糖耐受型β-葡萄糖苷酶均来源于真菌,尚无原核细胞来源的相关报道。从根瘤农杆菌LBA4404中克隆β-葡萄糖苷酶基因bg1,将其构建在表达载体pET-28b上,转化Escherichia coli RP(DE3),IPTG诱导表达。重组β-葡萄糖苷酶的比活高达36.7μmol/(min·mg)。对经过Ni柱纯化的重组酶进行酶学分析发现:该酶是糖基水解酶家族1的成员,底物亲和力高,专一性低,在温度为40℃和pH在5-8之间时具有较高的酶活,在低于40℃和pH5-10之间时可稳定保存。以pNP-β-Glc为底物,该酶的最适pH为6.4,最适温度为60℃,在37℃和pH6.4的反应体系中,该酶的Km为0.09mmol/L,竞争性抑制剂葡萄糖酸-δ-内酯和葡萄糖的Ki分别为0.03mmol/L和75mmol/L,具有很高的葡萄糖耐受性,当金属离子Ag+和Zn2+存在时,酶活被明显抑制。该酶对pNP-β-Gal和pNP-α-Glc的Km分别为3.61mmol/L和14.31mmol/L。
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- 关键词：Β-葡萄糖苷酶
