吴忠华 作品数:50 被引量:85 H指数:5 供职机构: 浙江国际旅行卫生保健中心 更多>> 发文基金: 国家质检总局科技计划项目 浙江出入境检验检疫局科研基金 浙江省重点科技创新团队项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 更多>>
嗜肺军团菌环介导等温扩增检测法的建立 被引量:6 2010年 目的:建立一种快速简便的嗜肺军团菌分子检测方法。方法:运用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),设计一套引物特异性识别嗜肺军团菌毒力基因——mip基因的6个特殊区域,在恒温条件下,对8株嗜肺军团菌和5株其它细菌进行检测,并与普通PCR方法进行比对,验证该方法的特异性和灵敏度。结果:所有嗜肺军团菌扩增产物均产生肉眼可见的白色沉淀,而其它不同菌株均不产生沉淀;加入荧光染料smart green后,嗜肺军团菌扩增产物均产生强绿色荧光,其它菌株呈弱荧光。与普通PCR(检出限约为57.6 pg,)比,LAMP扩增反应的灵敏度大100倍左右,基因组DNA检出限为576 fg,阳性水样检出限为8 cfu/ml。结论:LAMP技术可在简易的实验环境中快速、特异、灵敏地检测嗜肺军团菌。 吕沁风 郑伟 罗鹏 吴忠华 李禾 沈建根关键词:基因扩增 登革病毒检测技术研究进展 被引量:4 2013年 登革病毒可导致登革热、登革出血热和登革休克综合征,准确快速的早期诊断对其预后非常关键,因此登革病毒检测技术的发展势在必行。在此,我们简要综述目前的登革病毒分离、血清学检测、分子生物学检测技术进展。 吴忠华 罗鹏 徐琦 何蕾 吕沁风关键词:登革病毒 血清学检测 分子生物学检测 抗结核菌糖脂抗原抗体及抗阿拉伯甘露糖抗原抗体并联检测在口岸肺结核病快速诊断中的应用 2010年 〔目的〕研究抗结核菌糖脂抗原(TBGL)抗体及抗阿拉伯甘露糖抗原(LAM)抗体并联检测在结核病血清学诊断中的价值。〔方法〕采集结核病患者及健康对照者血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗TBGL抗体,用胶体金法检测抗LAM抗体。〔结果〕91例结核患者TBGL抗体、LAM抗体总阳性率均为62.6%,其中活动性肺结核病人的TBGL阳性率为65.3%,LAM阳性率为69.4%;非活动性结核病人TBGL阳性率为59.5%,LAM阳性率为54.8%,两组间差异不明显。肺结核病人两抗体并联检测阳性率为89.0%,明显高于单独抗体检测阳性率(P<0.05),特异性达85.7%。〔结论〕抗TBGL、LAM抗体并联检测敏感性、特异性高,方法快速简便,对口岸结核病预防控制有较高的实用价值。 郑伟 李禾 吴忠华 吕沁风 罗鹏 孟军关键词:血清 结核 检测布鲁氏菌的试剂及复合探针荧光定量PCR检测布鲁氏菌的方法 本发明提供了一种检测布鲁氏菌的试剂,它包括以下上游引物、下游引物、荧光探针和淬灭探针;上游引物的基因序列为:5′-caagggcaaggtggaagatt-3′;下游引物的基因序列为:5′-ctgcgaccgatttga... 吴忠华 吕沁风 郑伟 黄建可 李禾等温扩增检测猴痘病毒的试剂及等温扩增检测猴痘病毒的方法 本发明提供了一种等温扩增检测猴痘病毒的试剂。它包括:(1)检测猴痘病毒的标准品,所述标准品为采用人工合成的基因片段,克隆入pGSI质粒,得到的重组质粒载体;所述基因片段的碱基序列如SEQ ID NO:1所示;(2)引物,... 吕沁风 郑伟 吴忠华 徐琦 罗鹏 何蕾一种用于检测恶性疟原虫的双环引物环介导等温扩增方法 被引量:1 2015年 目的:设计一种快速环介导等温扩增(LAMP)检测方法,用于恶性疟原虫的检测。方法:根据恶性疟原虫18S r RNA基因设计一组引物,包括外引物、内引物、环引物及第二对环引物,用于恶性疟原虫的LAMP检测。结果:双环引物LAMP检测法灵敏度可达10拷贝DNA模板/μL,可特异地检测出恶性疟原虫DNA,3次重复试验Ct值的CV小于5%,比普通加环引物LAMP检测法时间缩短10 min左右,提高了反应的检测效率。结论:建立的双环引物LAMP方法是一种高效、快速的检测方法。 吕沁风 姜侃 杨永耀 何蕾 罗鹏 吴忠华关键词:环介导等温扩增 恶性疟原虫 检测黄热病毒的试剂及检测黄热病毒的方法 本发明提供了一种检测黄热病毒的试剂,它包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP;引物基因序列如下:外引物F3,TGGGAGAGGAGATTCACGT;外引物B3,TCAAGCCGCCAAATAGCC;内引物... 吕沁风 郑伟 吴忠华 曹筝 何蕾 罗鹏文献传递 食品中沙门菌检测技术研究进展 被引量:5 2016年 沙门菌(Salmonella)是最常见的食源性致病菌,对人类的健康造成重大威胁。近年来,食品中沙门菌检测与鉴定技术不断发展和完善,从最初的传统分离培养法到免疫学方法,以及最新的分子生物学方法都不断得到更新。本文综述各类食品中沙门菌的检测新技术,为更好地了解食品沙门菌检测方法奠定基础,同时提高食品安全水平,更有效地保障人类健康。 张小平 吴忠华 魏莹关键词:沙门菌 转基因大米安全性评价方法 本发明公开了一种转基因大米安全性评价方法,该方法通过人淋巴细胞系传代培养,将转基因大米全蛋白提取物作用于人淋巴细胞,通过检测人淋巴细胞损伤程度及遗传损伤程度来评价其安全性,评价方法周期短,费用低,简便易行,检测敏感度高、... 郑伟 吕沁风 吴忠华 李禾甲型H1N1流感病毒FAST-LAMP检测方法的建立 被引量:4 2015年 建立一种新型等温扩增检测方法,用于提高等温扩增反应的检测速度,应用于甲型H1N1流感病毒检测。根据HA基因设计一组引物,包括外引物、内引物、环引物及套内引物,套内引物的加入增加了引物与模板的接触位点,提高扩增效率,缩短检测时间。结果显示,FAST-LAMP检测法比普通LAMP检测法时间缩短45 min左右,比加入环引物的LAMP检测方法缩短20 min,大大缩短了反应的检测时间。检测灵敏度可达到1×102拷贝。FAST-LAMP是一种高效、更快的检测方法。 吕沁风 罗鹏 何蕾 杨永耀 郑伟 李莉 吴忠华关键词:甲型H1N1流感病毒