常乐
- 作品数：24 被引量：109H指数：7
- 供职机构：北京医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项深圳市医学重点学科建设基金首都卫生发展科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 内含IncRNA MEG3的重组MS2噬菌体病毒样颗粒靶向EGFR阳性肝细胞癌的治疗研究
- 肝细胞癌(Heptocellular carcinoma, HCC)是一种常见的恶性肿瘤,死亡率较高。传统的手术、放化疗等治疗手法仅对早期肿瘤效果较佳,对于晚期已转移肿瘤的效果较差。由于HCC复杂的发病机制与多种不同信号...
- 常乐
- 关键词：长链非编码RNA
- 文献传递
- 献血者抗-HIVELISA检测屏蔽界限值的确定被引量：6
- 2018年
- 目的确定抗-HIV ELISA检测试剂高特异性且高阳性预期值的S/CO屏蔽界限,用以甄别适宜进入献血者归队流程的抗-HIV反应性献血者,提高抗-HIV ELISA反应性献血者管理的效率。方法 4家血站血液检测实验室使用5种不同抗-HIV ELISA试剂（2种第3代试剂分别以试剂1和试剂5代表,3种第4代试剂分别以试剂2、试剂3及试剂4代表）同时对1 036（人）份献血者标本作抗-HIV检测;检测结果一致者直接判定标本的最终状态为真阳性或真阴性;对结果有差异的标本均作核酸检测（NAT）,NAT阳性即判定为真阳性,NAT阴性者再以WB方法确认。分析检测结果：1）采用百分位数法确定每种试剂受检标本中真阳性标本95%S/CO值,作为该试剂95%的阳性预期值,并作为百分位数法初步建立的屏蔽界限值;2）采用受试者工作曲线（ROC）法分别计算每种试剂ROC曲线99%特异性所对应的S/CO值,作为ROC曲线法初步建立的屏蔽界限值。综合2种分析方法建立的初步屏蔽界限值,以同时满足≥95%阳性预期值和≥99%特异性的S/CO值作为反应性献血者的屏蔽界限。结果最终确认阳性标本136份,其余为真阴性标本。5种试剂分别检出真阳性标本中的134、136、135、135和133份。1）百分位数法分析：5种ELISA试剂初步建立的献血者屏蔽界限值（95%阳性预期值）分别是10.70、5.87、6.24、5.18、10.73;2）ROC曲线拟合法分析：5种ELISA试剂初步建立的献血者屏蔽界限值（99%特异性的S/CO值）分别是10.72—10.99、5.11—6.51、5.54—6.89、5.05—6.83、10.30—10.92。综合2种方法最终确定5种ELISA试剂的献血者屏蔽界限值为：10.72、5.87、6.24、5.18、10.73。结论抗-HIV ELISA试剂屏蔽界限的确定为有效地甄别抗-HIV真阳性献血者提供了依据;不同代际的抗-HIV ELISA试剂屏蔽界限值相差较大,因此建立屏蔽界限时应有所区分;各实验室应根据自身条件及所选用的检测方�
- 孙婧王露楠葛红卫王瑞常乐黄力勤胡京辉王鹏韩卫朱海峰朱绍汶
- 关键词：酶联免疫吸附试验阳性预测值
- 使用相同抗-HCVELISA试剂的6家血站实验室灰区设定分析被引量：12
- 2018年
- 目的探讨6家实验室对相同抗-HCV ELISA试剂盒灰区设定的必要性和合理性。方法由卫生部临检中心组织6家血站实验室使用相同试剂对同一组标本（n=1 053）进行抗-HCV检测,并通过WB试验明确标本真实血清学状态。1）分析灰区设定的必要性：计算6家血站实验室抗-HCV真阳性检出率、灰区标本确证阳性率;2）分析灰区设定的适宜性：通过绘制ROC曲线确定6家血站实验室抗-HCV ELISA试验的最佳临界值,分析3种不同临界值（最佳临界值、厂商推荐临界值、实验室工作临界值）的逻辑关系,并比较不同临界值下灵敏度及特异性的变化。结果 1）6家血站实验室抗-HCV真阳性检出率分别为98.25%、97.37%、97.37%、97.81%、89.47%、98.25%;灰区标本确证阳性率分别为5.88%（1/17）、0、0、25.00%（1/4）、0、0。2）6家血站实验室抗-HCV ELISA试验最佳临界值均高于厂商推荐临界值、更高于实验室工作临界值,设置灰区的5家血站实验室对抗-HCV ELISA试验灵敏度提高有限、特异性有所下降。结论 1）6家血站实验室使用厂商推荐临界值可获得较高灵敏度、满足血液检测要求,研究结果支持取消灰区设置。2）实验室应在综合评估试验性能的基础上,科学、合理确定判定策略。
- 王瑞葛红卫黄力勤胡京辉王露楠常乐潘彤韩卫魏超方建华王芳郑伟
- 关键词：血站实验室酶联免疫吸附试验抗-HCV灰区
- 两家化学发光系统用于血液筛查HIV的性能评价被引量：12
- 2018年
- 目的对2家化学发光检测系统用于血液筛查HIV项目进行评估。方法使用1种化学发光试剂（CLIA试剂）、1种电化学发光试剂（ECLIA试剂）和2种酶联免疫吸附试剂（国产第3代HIV ELISA试剂、进口第4代HIV ELISA试剂）同时检测卫生部临检中心提供的HIV血清盘,分别将2种化学发光试剂和ELISA试剂的检测性能进行比较。结果 1） 4种试剂的灵敏度由高到低依次为ECLIA（100%）=进口ELISA（100%）〉 CLIA（96. 64%）=国产ELISA（96. 64%）。2） 4种试剂的特异性由高到低依次为CLIA （98. 72%）〉国产ELISA （97. 44%）〉进口ELISA（92. 30%）〉ECLIA（87. 18%）。3） 4种试剂检测结果的一致性很好,准确率均较高（AUC为0. 989 2—0. 999 9）。4）稀释灵敏度：ECLIA试剂能检出稀释比例为1：800的HIV抗体稀释样本,其余3种试剂能检出的最高稀释比例为1：400。5） ECLIA试剂可以检出浓度为1 IU/mL的HIV p24抗原,检出5份窗口期核酸阳性样本（5/7）,与进口第4代ELISA试剂的结果一致。第3代试剂均未能检出。6） ECLIA试剂的批内精密度CV为3. 03%—6. 34%,批间精密度为7. 52%和15. 76%,精密性总体优于2种ELISA试剂; CLIA试剂的批内精密度CV为3. 39%—7. 12%,批间精密度为10. 28%和11. 41%,精密性总体优于2种ELISA试剂。结论 4种评估试剂的检测性能相似,化学发光试剂的准确性与ELISA试剂相近,检测结果一致性好。ECLIA试剂具有较高的检测灵敏度,提高早期感染样本的检出能力,能缩短HIV检测的窗口期,降低输血感染风险。
- 陈剑锋李英莲常乐李文超刘虹呼娜张传兴
- 关键词：性能评价化学发光电化学发光血液筛查
- 人类嗜T淋巴细胞病毒研究进展被引量：1
- 2018年
- 人类嗜T淋巴细胞病毒，也被称为人类T细胞白血病病毒（human T-cell lymphotropic virus，human T-cell leukemia virus，HTLV），是一种单正链RNA病毒，属于逆转录病毒科，RNA肿瘤病毒亚科。在1979年从美国一位28岁的皮肤T细胞淋巴瘤患者的皮肤T细胞中发现并分离，是第一个被发现的人类逆转录病毒。
- 常乐王露楠
- 关键词：人类嗜T淋巴细胞病毒病毒结构
- 含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒的构建和表达被引量：4
- 2012年
- 目的:通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力,构建并表达含轮状病毒NSP3基因耐RNA酶的病毒样颗粒,并探讨其稳定性。方法:设计含PvuⅠ和KpnⅠ酶切位点的上、下游引物,扩增1 049 bp轮状病毒NSP3基因片段,并将包装位点-5位的U替换为C,提高与MS2衣壳蛋白作用的亲和力。用PvuⅠ和KpnⅠ双酶切扩增的目的基因和pACYC-MS2表达载体,连接获得重组载体pACYC-MS2-NSP3,转化TOP10感受态细胞后用PCR验证阳性克隆并测序。阳性克隆转化BL21(DE3)细胞后表达含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒,用超声破碎、纯化获得表达产物,鉴定并讨论其稳定性。结果:成功构建pACYC-MS2-NSP3表达载体并获得了含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒,其可耐受DNA酶和RNA酶的降解,并在-20℃、4℃、室温25℃下10 d保持稳定。结论:通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力,可以成功构建耐RNA酶的病毒样颗粒,本研究所构建的病毒样颗粒具有耐RNA酶的特性和良好的稳定性,为轮状病毒实时荧光定量逆转录-PCR的标准品和质控品的研究提供了一个可行的方法。
- 常乐张括张瑞谢洁红李金明王露楠
- 关键词：轮状病毒属病毒粒子核糖核酸酶类
- 11家血站实验室抗-TP酶联免疫吸附试验临界值的评价被引量：12
- 2017年
- 目的评价11家血站实验室采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测无偿献血者梅毒螺旋体抗体(抗-TP)过程中,血站实验室采用的工作临界值(CO)的适宜性及合理性。方法 11家血站实验室采用8种ELISA试剂中的1/2种均对1 372例标本进行抗-TP检测。对结果有差异的标本进行梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)确证试验,利用确证试验结果明确标本真实血清学状态。对数据进行如下分析:1)分析11家血站实验室采用8种ELISA试剂中的1/2种试剂真阳性检出率、灰区标本确证阳性率;2)分析11家血站实验室抗-TP试验"灰区"设置的合理性,通过绘制ROC曲线确定11家血站实验室采用8种ELISA试剂中的1/2种试剂最佳CO值,比较不同CO值下(最佳CO值、厂商推荐CO值、血站实验室因采用灰区而设置的工作CO值)灵敏度与特异性的变化。结果 1)11家血站实验室采用8种ELISA试剂中的1/2种试剂对1 372例标本进行检测,真阳性检出率均为100%(489/489)、真阳性标本无1例漏检;9家设有灰区的血站实验室共检出136例灰区标本,经确证均为阴性,即灰区标本确证阳性率均为0。2)11家血站实验室采用8种ELISA试剂中的1/2种试剂ROC曲线确定的最佳CO值均大于厂商推荐CO值,设置灰区的9家血站实验室采用工作CO值灵敏度提高有限、特异性有所下降。结论 11家血站实验室使用厂商推荐CO值就可获得较高灵敏度、满足血液筛查的要求,实验结果支持血站实验室取消灰区设置。
- 高楠王瑞常乐黄力勤胡京辉甄伟葛红卫王露楠王鹏潘彤韩卫李维王芳臧亮朱海峰朱卫清朱绍汶曾劲峰释艳华
- 关键词：酶联免疫吸附试验梅毒螺旋体抗体灰区
- 无偿献血者中HIV阳性者的病毒载量分析被引量：8
- 2019年
- 目的分析无偿献血者艾滋病病毒(HIV)阳性标本的病毒载量水平及无偿献血人群HIV的携带状态,为评估无偿献血人群HIV感染风险提供依据。方法收集2016—2018年国内25家血站HIV筛查反应性(R)的血浆标本683(人)份,根据HIV反应性类型分为ELISA双试剂反应性组(ELISA R-R)、核酸检测(NAT)反应性组(NAT R),ELISA单试剂反应性组(ELISA R-NR),使用电化学发光试剂法做HIV抗原抗体检测,使用核酸定量试剂做HIV RNA定量检测,核酸定量检测低于检测下限(80 IU/mL)的标本以WB法确认。结果本组无偿献血者筛查R标本中,1)HIV确认阳性率为27.1%(185/683),确认阳性样本ELISA R-R标本占89.2%(165/185),ELISA NR-NR+NAT-R占8.1%(15/185),ELISA R-NR占2.7%(5/185),3(种)组病毒载量(IU/mL)分别集中在10^(4.605±0.047)、10^(3.472±0.328)和10^(5.196±0.655)(P<0.05);HIV窗口期标本病毒载量(IU/mL)>10~5者占20.0%(4/20),其中2例来自ELISA R-NR组,2例来自NAT R组;30.0%(6/20)为10~4者,其中2例来自ELISA R-NR组,2例来自NAT R组;其余50.0%(10/20)为10~1—10~3者,其中1例来自ELISA R-NR组,剩余9例来自NAT R组。2)在HIV确认阳性者中发现3名疑似HIV精英控制者(ECs)。结论我国无偿献血者中HIV ELISA R-R感染者病毒载量较抗原抗体窗口期感染者高;HIV窗口期感染者中多为低载量病毒感染者。疑似HIV ECs的发现揭示我国无偿献血人群HIV感染状态日益复杂多样化,需要加强对血液筛查实验室检测质量的管理,探究更合理的HIV筛查策略。
- 赵俊鹏常乐郭飞张路姬慧敏姜心怡王露楠
- 关键词：无偿献血者病毒载量
- 一种定量检测人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒的方法
- 本发明公开了一种定量检测人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒的方法，属于医学检验技术领域。一种定量检测人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒的质粒，所述质粒以大肠杆菌为载体，转化了该质粒的克隆菌株的保藏编号为CGMCC No.19437。本发...
- 王露楠姬慧敏常乐闫颖姜心怡孙慧珍郭飞
- 文献传递
- 新型冠状病毒核酸血液筛查系统的检测性能评价被引量：3
- 2020年
- 目的采用假病毒对三种新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)核酸血液筛查试剂的检测性能进行比较和分析,为SARS-CoV-2核酸血液筛查的试剂选择提供依据。方法使用慢病毒包装系统构建包含SARS-CoV-2基因组片段的假病毒。使用A、B、C三个单位的SARS-CoV-2核酸血液筛查系统进行RNA提取和扩增,根据各试剂检测结果计算其检测限(limit of detection,LoD)、特异度和精密度。结果A、B、C三个单位N区段的单检LoD分别为3.46、8.73、23.87 copies/mL,混检LoD分别为13.65、78.92、159.14 copies/mL。ORF1ab区段的单检LoD分别为6.32、12.22、24.05 copies/mL,混检LoD分别为26.94、67.97、94.80 copies/mL。各试剂检测SARS-CoV-2阴性血浆的特异度均为100%,检测2LoD和较高浓度假病毒的批内和批间变异系数均小于5%。结论A公司的SARS-CoV-2核酸血筛系统灵敏度最高。三种试剂均有良好的特异度和精密度。
- 闫颖常乐罗文新刘珺懿郭飞王露楠
- 关键词：新型冠状病毒核酸检测血液筛查检测限
