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AqpZ双顺反子表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达: 大肠杆菌水通道蛋白Z(AqpZ)是大肠杆菌运输水分的通道,由231个氨基酸残基组成,其具有水渗透性高,结构稳定,对蛋白酶具有抗性等特点,在仿生废水回收以及海水淡化等领域具有潜在的重要应用价值.AqpZ的强烈疏水性会导致细...; 黄磊连佳长李晓燕蔡谨徐志南; 关键词：基因克隆大肠杆菌水通道蛋白; 文献传递

低分子量肝素的研究进展被引量：12: 2012年; 低分子量肝素是一种新型抗凝药,具有抗凝血、抗血栓、抗肿瘤等作用,与普通肝素相比具有皮下注射吸收好、半衰期长、生物利用率高等优点。本文介绍了低分子量肝素的化学结构、作用机制及其应用,并对低分子量肝素的制备方法进行了综述。; 杨明康李晓燕钱捷黄磊蔡谨徐志南; 关键词：低分子量肝素肝素

重组大肠杆菌高效可溶性表达芳基硫磺基转移酶的研究被引量：2: 2014年; 3'-磷酸腺苷-5'-磷酰硫酸(PAPS)是生物肝素酶法制备途径的硫磺基供体,价格高且易分解。芳基硫磺基转移酶(ASTIV,EC 2.8.2.1)可以转化对硝基硫酸苯酯(PNPS)和3'-磷酸腺苷-5'-磷酸(PAP)生成PAPS。利用大肠杆菌系统高效可溶性表达ASTIV。对鼠源ASTIV基因序列进行密码子优化并全合成;转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达;对表达条件进行优化,提高可溶表达量;Ni2+亲和层析纯化目标蛋白,重组ASTIV产量达到80 mg/L,纯度高达95.3%,比酶活为42.5 m U/mg;用碱性磷酸酶(CIAP)转化ASTIV构型,比酶活进一步提高到85.0 m U/mg。该研究为ASTIV重组表达,PAPS酶法制备以及生物肝素合成奠定了坚实的基础。; 齐晨杨修亮李晓燕李江涛李江涛黄磊; 关键词：肝素

重组肝素酶I在大肠杆菌中的表达及纯化被引量：5: 2012年; 优化肝素裂解酶I在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pOFX-T7-SL1中的重组表达条件,结果显示接种6 h(OD600≈2.5)后加入0.25 mmol/L IPTG,在25℃下表达8 h目标蛋白酶活达到最高值1.49×105IU/L。进一步于5 L发酵罐中扩大培养,20 h后最高酶活达到5.55×105IU/L。利用亲和层析分离目标蛋白,肝素裂解酶I的纯度可达到96%,回收率为37.58%,比酶活达到1.12×103IU/mg。肝素裂解酶I的高效表达为大规模利用酶法制备低分子肝素打下了坚实的基础。; 任永海李晓燕黄磊徐志南; 关键词：大肠杆菌分离纯化分子伴侣

多酶催化合成3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸反应体系的构建及优化被引量：1: 2017年; 3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸(PAPS)是目前发现的唯一的"活性"硫酸基团供体,在生物肝素酶法硫磺化反应中起到重要作用,但化学合成的成本高。如何大量低成本制备PAPS是实现酶法合成肝素工业化的关键因素。本文克隆表达了酶法合成PAPS的两个酶:三磷酸腺苷(ATP)硫化酶和5’-腺苷磷酰硫酸(APS)激酶。构建了一条体外合成PAPS的途径。首先利用ATP硫化酶将ATP转化生成APS,同时产生副产物无机焦磷酸(PPi),APS再在APS激酶作用下转化生成PAPS。研究了Mg2+浓度、缓冲体系和p H、温度以及无机焦磷酸水解酶(PPase)的添加对该酶反应的影响。通过添加无机焦磷酸水解酶(PPase),极大提高了PAPS的转化率。在最优条件下考察不同ATP浓度下PAPS随时间的积累量变化,发现反应过程中存在底物抑制作用;ATP浓度为50 mmol?L?1时,反应25 h,PAPS的积累量为18.87 mmol?L?1。反应过程中分批补料ATP,能极大提高催化效率。反应11.5 h,PAPS积累量可达20.36 mmol?L?1(10.32 g·L?1),转化率为81.4%。; 李晓燕蔡谨杭宝建黄磊徐志南; 关键词：分批补料

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李晓燕