杨耀云
- 作品数：7 被引量：16H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金国家高技术研究发展计划国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种条件复制型重组单纯疱疹病毒、疫苗及其应用
- 本发明提供了一种条件复制型单纯疱疹病毒、疫苗及其应用，所述重组HSV在其基因组内包含：复制必需基因和去稳定结构域编码基因嵌合形成的融合基因，以及通过基因组改造技术敲入的外源基因；复制必需基因包括UL54在内的一类复制必需...
- 寸韡宫悦毕研伟刘晓娟李智华杨耀云肖红剑李海巍
- 文献传递
- Vero细胞无血清培养基的筛选及其培养流感病毒H5N1条件的优化被引量：3
- 2016年
- 目的筛选适宜Vero细胞培养的无血清培养基,并优化其培养流感病毒H5N1的条件。方法取VP-SFM培养的Vero细胞(SFM-Vero),以增殖速率为指标,筛选无血清培养基[VP-SFM、EX-CELL^(TM) VERO、Virus Pro ^(TM) VERO、自制无血清培养基1(SFM-1)和2(SFM-2)];采用中心组合实验(Box-Behnken)优化SFM-Vero培养流感病毒H5N1的pH、TPCK-Trypsin浓度和病毒接种MOI。结果 Vero细胞在VP-SFM和自制SFM-1培养基中生长情况好于其他无血清培养基;H5N1病毒株能够感染无血清适应的Vero细胞;SFM-Vero培养流感病毒H5N1较优条件为:p H 7.64,TPCK-Trypsin浓度0.68μg/ml,MOI 0.01。在该条件下培养的流感病毒HA滴度可达768 HAU/50μl,为正常培养基培养的Vero细胞的2.33倍。结论筛选出适宜Vero细胞生长的无血清培养基,优化了流感病毒H5N1 Vero细胞适应株无血清培养的条件。
- 李在晗苏杨起常亚军杨家方王婷婷杨耀云刘圆圆杨建波唐聪徐丽兰张恒廖国阳李卫东
- 关键词：无血清培养基H5N1
- TritonX-100裂解流感病毒的研究被引量：7
- 2009年
- 在流感病毒高浓度条件下，寻找TritonX-100裂解流感病毒的适宜条件．在不同条件下用TritonX-100裂解WHO推荐用2007～2008年度流感病毒疫苗毒株制备的3个亚型的流感病毒，用电镜观察裂解程度，通过蔗糖密度梯度离心纯化抗原后免疫动物，以检测疫苗的免疫效果．结果表明当流感病毒的血凝效价是1：16382，裂解时间为24h时，TritonX-100在质量分数为1％可以完全地裂解B型，质量分数达到2％才可以完全裂解流感病毒H1N1和H3N2，这说明TritonX-100对A，B亚型毒株的裂解效果不同．由于每年都要更换毒株工人生产新的流感疫苗，因此应该对使用TritonX-100的裂解不同亚型的流感病毒条件进行研究，以保证裂解疫苗的质量．
- 宋绍辉李卫东廖国阳马娜杨佳梁海孝杨耀云马忠飞
- 关键词：流感病毒TRITONX-100裂解疫苗
- Sabin株和野毒株脊髓灰质炎灭活疫苗在恒河猴体内不同免疫方案的比较被引量：2
- 2013年
- 目的评价Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV)和野毒株脊髓灰质炎灭活疫苗(Wild strain inactivated poliovirus vaccine,wIPV)在恒河猴体内不同免疫方案的免疫原性。方法将25只恒河猴随机分为5组:sIPV组(免疫3剂sIPV)、sIPV/口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(oral attenuated poliovirus vaccine,OPV)组(免疫2剂sIPV后,再免疫2剂OPV)、wIPV组(免疫3剂wIPV)、wIPV/OPV组(免疫2剂wIPV后,再免疫2剂OPV)和对照组(免疫3次稀释液M199),每组5只。OPV口服接种,IPV和M199经上臂三角肌处肌肉注射,2剂间免疫间隔时间为1个月。首次免疫前和每剂免疫后1个月采血,分离血清,采用微量中和试验法测定血清中抗脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体效价。结果除对照组外的4个试验组全程免疫结束后,恒河猴血清中均可检出较高水平的中和抗体,且所有恒河猴血清中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体全部阳转。Ⅰ型和Ⅲ型抗体免疫应答中,接种sIPV的2个试验组中和抗体水平高于接种wIPV的2个试验组(P<0.05);Ⅱ型免疫应答中,接种wIPV的2个试验组中和抗体水平高于接种sIPV的2个试验组(P<0.05)。采用wIPV/OPV序贯免疫,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体免疫应答均可获得与单独接种wIPV同样的效果;而采用sIPV/OPV序贯免疫,Ⅰ型抗体免疫应答效果低于单独接种sIPV,Ⅱ型抗体水平差异无统计学意义(P>0.05),Ⅲ型抗体第4剂免疫后水平也有所上升。结论 sIPV和wIPV在恒河猴体内均可诱导良好的免疫应答,初步证实了IPV/OPV序贯免疫的可行性,为今后免疫策略的制定提供了一定的实验依据。
- 杨卉娟陈俊英和占龙李华杨耀云叶君岳俊孙强明施海晶马绍辉
- 关键词：脊髓灰质炎野毒株中和抗体
- 一种条件复制型重组单纯疱疹病毒、疫苗及其应用
- 本发明提供了一种条件复制型单纯疱疹病毒、疫苗及其应用，所述重组HSV在其基因组内包含：复制必需基因和去稳定结构域编码基因嵌合形成的融合基因，以及通过基因组改造技术敲入的外源基因；复制必需基因包括UL54在内的一类复制必需...
- 寸韡宫悦毕研伟刘晓娟李智华杨耀云肖红剑李海巍
- 生物反应器微载体系统培养Sabin株脊髓灰质炎病毒条件的优化被引量：2
- 2017年
- 目的优化生物反应器微载体系统培养Sabin株脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)的条件,以提高Sabin株PV产量。方法应用搅拌式生物反应器培养PV,对其进行Vero细胞培养密度、病毒培养温度及病毒接种MOI条件的优化,收获病毒液后,检测病毒D抗原含量和感染性滴度,并进行全基因组深度测序。结果 9.0 g/L微载体培养Vero细胞得到病毒D抗原含量显著高于低微载体浓度培养结果(P<0.01);病毒D抗原含量在34℃培养时最高(P<0.01);病毒D抗原含量在MOI 0.050接种时最高(P<0.05),MOI 0.010和MOI 0.005时无明显差异。SabinⅠ型480、525和Ⅲ型Pfizer株472、2 493位点突变率随着细胞培养密度(微载体浓度)的增加而增加;提高病毒培养温度以及改变病毒MOI,大多数毒力相关位点突变率无明显变化。结论提高细胞培养密度、以MOI 0.050接种病毒以及34℃培养病毒均有利于提高病毒产量。
- 章孟学周健杨耀云胡文著杨璐洁王虓宇赖超彭佳孙明波杨卉娟
- 关键词：生物反应器脊髓灰质炎病毒
- 携带eGFP基因慢病毒颗粒的制备及鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的:通过eGFP基因慢病毒颗粒的包装和感染,明确重组慢病毒对外源基因在细胞中的转导能力。方法:把慢病毒质粒Lv105-eGFP转染到293 Ta细胞中并包装为慢病毒颗粒,经电镜检测病毒颗粒和实时定量PCR(qPCR)测定病毒滴度,之后感染H1299细胞,通过荧光显微镜观察比较eGFP在靶细胞中的表达效率。结果:eGFP在包装细胞中转染和表达效率在48h时达90%以上,到72h时细胞病变效应(CPE)逐渐显著;电镜检测可看到典型的慢病毒颗粒形态特征;病毒原液的滴度是4.4×107VG/mL、浓缩液的是2.68×1010VG/mL;1μL病毒原液感染H1299细胞时,eGFP表达水平可达10%、增加到100μL感染时表达水平达到99%以上,证明eGFP基因得到有效转导并可在细胞中高水平表达绿色荧光蛋白。结论:成功包装了eGFP慢病毒颗粒并可在靶细胞中获得高效表达。
- 陈瑜杨耀云鲁帅尧王晓囡和占龙乞素冬李鸿钧
- 关键词：细胞
