公共文化服务平台

共 9 条记录，以下是 1-9

全选清除导出

排序方式：

不同信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白表达的影响被引量：3: 2017年; 目的探讨不同信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白(factor H-binding protein,f HBP)表达的影响。方法运用PCR方法将B群脑膜炎奈瑟菌f HBP原始信号肽分别替换为大肠埃希菌主要外膜脂蛋白(major outer membrane lipoprotein,MLP)、脂蛋白-28(lipoprotein-28,LP)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)P4外膜蛋白信号肽,并将其分别连接至p ET-30a表达载体,转化入大肠埃希菌感受态细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白表达水平。结果替换了P4、LP和MLP信号肽的重组B群脑膜炎奈瑟菌f HBP表达量较带原始信号肽的B群脑膜炎奈瑟菌f HBP相比,分别提高了2.68、1.94和2.91倍。结论替换MLP信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌f HBP蛋白表达的影响最大,为提高B群脑膜炎奈瑟菌f HBP表达量的研究工作提供了新思路。; 宫悦陈晨李亚东张辉李智华肖红剑毕研伟寸韡; 关键词：信号肽原核表达

利用丙型肝炎病毒复制子模型检测重组人λ2干扰素的体外活性: 2017年; 目的:利用丙型肝炎病毒(HCV)复制子细胞模型,体外研究重组人λ2干扰素(hIFNλ2)对HCV复制子的抑制作用。方法:构建重组质粒pcDNA3.1-hIFNλ2-HA,转染293T细胞,表达带有HA标签的hIFNλ2,表达后的上清通过Western印迹检测,然后稀释至不同浓度后作用于带有HCV复制子的Huh7.5细胞系,每隔24h取样并更换培养液,通过报告基因检测hIFNλ2对HCV复制子的抑制作用。结果:构建了pcDNA3.1-hIFNλ2-HA真核表达重组体,并在293T细胞中表达出hIFNλ2,该蛋白能有效抑制HCV复制子的复制。结论:hIFNλ2对HCV复制子具有抑制作用。; 张辉李亚东李亚东宫悦毕研伟丁晨宫悦

树鼩IgE高亲和力受体α亚基的原核表达、抗体制备及鉴定: 2018年; 目的:原核表达树鼩IgE高亲和力受体α亚基(FcεR1α)并制备抗体,为研究树鼩过敏反应动物模型奠定基础。方法:提取树鼩肝脏及脾脏组织RNA,用巢式PCR法扩增树鼩FcεR1α基因,连接至pMD-19T载体后进行DNA测序,将测序正确的目的片段与表达载体pET30a(+)连接,构建重组表达质粒,转入表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化;将纯化的蛋白作为免疫原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;Western印迹检测多克隆抗体的特异性,ELISA检测多克隆抗体的效价。结果:调取了树鼩FCεRIα基因,并将该序列去信号肽的胞外结构(第26～213氨基酸)构建到pET30a(+)载体上,通过IPTG诱导表达并纯化了FCεRIα蛋白,蛋白纯度在90%以上。ELISA效价检测结果表明免疫动物制备的多克隆抗体效价为100 000,且该抗体能够检测到真核细胞表达的树鼩IgE FCεRIα蛋白。结论:在大肠杆菌中表达并纯化获得树鼩FcεRIα,免疫动物制备了多克隆抗体。; 张晶晶肖红剑李育中宫悦毕研伟寸韡; 关键词：树鼩原核表达过敏性反应

一种条件复制型重组单纯疱疹病毒、疫苗及其应用: 本发明提供了一种条件复制型单纯疱疹病毒、疫苗及其应用，所述重组HSV在其基因组内包含：复制必需基因和去稳定结构域编码基因嵌合形成的融合基因，以及通过基因组改造技术敲入的外源基因；复制必需基因包括UL54在内的一类复制必需...; 寸韡宫悦毕研伟刘晓娟李智华杨耀云肖红剑李海巍; 文献传递

一种外源片段高效定点定向插入DNA病毒基因组的方法: 本发明属于病毒基因重组技术领域，具体涉及利用非同源重组机制，将外源DNA片段定点、定向地高效插入特定大型DNA病毒基因组。本发明包括下列步骤：1)设计并构建针对DNA病毒基因组特定切割位点的CRISPR‑Cas9(clu...; 寸韡宫悦毕研伟李智华李育中张晶晶; 文献传递

Optiprep连续密度梯度离心方法的建立被引量：2: 2016年; 目的：试验不同条件,优化Optiprep密度梯度离心方法,建立最佳的Optiprep连续密度梯度,为纯化病毒提供良好的参数。方法：试验不同的旋转角度、重复次数、离心时间,以及用不同浓度的Optiprep制备连续密度梯度等条件,摸索制备连续密度梯度的最佳方案,将此最佳方案应用于纯化丙肝病毒（HCV）,并通过q RT-PCR验证纯化效果。结果：通过各种条件的摸索,确立了制备连续密度梯度的最佳方案,即制备10%~40%Optiprep连续密度梯度,在旋转角度为85°时,1号程序设置为30 r/min离心5 s,2号程序设置为0 r/min 15 s,重复1~2程序10次。将此程序用于纯化HCV,得到了较好的纯化效果。结论：建立了制备Optiprep连续密度梯度离心的方法,为进一步提高病毒的纯化效果提供了参数。; 张辉毕研伟李智华李亚东宫悦寸韡; 关键词：碘克沙醇纯化

一种条件复制型重组单纯疱疹病毒、疫苗及其应用: 本发明提供了一种条件复制型单纯疱疹病毒、疫苗及其应用，所述重组HSV在其基因组内包含：复制必需基因和去稳定结构域编码基因嵌合形成的融合基因，以及通过基因组改造技术敲入的外源基因；复制必需基因包括UL54在内的一类复制必需...; 寸韡宫悦毕研伟刘晓娟李智华杨耀云肖红剑李海巍

一株Ⅰ型单纯疱疹病毒的分离鉴定及增殖特性: 2015年; 目的对一株Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)进行分离鉴定和增值特性研究。方法从病人口唇疱液样本中分离得到一株病毒,经噬斑纯化、形态鉴定、序列分析,确定该分离株为HSV-1,被命名为HSVIZW6A。用其分别感染Vero细胞、KMB17细胞、A375细胞,观察其细胞病变情况,并绘制生长曲线,分析病毒的生物学特性。结果 HSVI-ZW6A株病毒以MOI=10感染不同细胞,细胞外和细胞内病毒在0~4h,病毒复制缓慢,4~12h病毒增殖进入对数生长期,12~24h病毒增殖缓慢,进入平台期,但24h之后病毒效价测定显示病毒滴度开始呈现下降的趋势,且细胞外病毒最大量高于细胞内,且HSVI-ZW6A株病毒毒力上高于HSVI-strain17病毒。结论通过本实验成功分离和鉴定了一株Ⅰ型HSV病毒,并对其生物学特性进行了分析,为今后的实验奠定了基础。; 陈晨李智华丁晨李亚东张辉宫悦刘彤云寸韡; 关键词：单纯疱疹病毒

提高脑膜炎奈瑟菌fHBP蛋白表达的方法: 本发明涉及提高重组脑膜炎奈瑟菌fHBP蛋白表达的方法，属于基因工程技术领域。本发明通过分别更换流感嗜血杆菌P4外膜蛋白信号肽、大肠杆菌脂蛋白‑28信号肽和大肠杆菌主要外膜脂蛋白信号肽表达重组脑膜炎奈瑟菌fHBP，表达量与...; 寸韡宫悦李智华陈晨李亚东闫玲梅李育中张辉龙琼丁晨肖红剑毕研伟; 文献传递

全选清除导出

共1页<1>

宫悦