王海滨
- 作品数：30 被引量：51H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 一种诱导iPS细胞向心肌细胞分化的诱导因子及其应用
- 本发明属于心肌组织再生医学领域，本发明公开了抗坏血酸作为诱导因子在诱导iPS细胞向心肌细胞分化方面的应用，以及一种含有抗坏血酸的诱导分化培养基。本发明还公开了利用诱导分化培养基诱导iPS细胞向心肌细胞分化的方法，就是利用...
- 王常勇刘志强王海滨段翠密林秋霞
- 文献传递
- 组织工程化子宫片层构建的实验研究被引量：5
- 2006年
- 目的利用组织工程方法体外构建了与子宫壁内膜和肌层相近的子宫片层。方法将分离培养的兔子宫平滑肌细胞和基质细胞分别与液态Ⅰ型胶原支架材料混合,依次接种于自制静态力学拉伸模具中,再将上皮细胞接种在基质层上,形成组织工程化子宫组织。采用组织学和免疫组织化学方法观察所构建的组织工程化子宫的组织学特征,扫描电镜检测上皮细胞微结构。结果分离培养的兔子宫平滑肌细胞、基质细胞和内膜上皮细胞的纯度均达到95%以上。在静态力学拉伸下培养14天后,在胶原凝胶上生长的平滑肌细胞和基质细胞按拉伸方向有序排列,上皮细胞生长在最上层。激素处理后,扫描电镜观察显示上皮细胞表面有羽状突或纤毛,并且附有大量的微绒毛。结论由平滑肌细胞、基质细胞、上皮细胞和Ⅰ型液态胶原构建,并经静态力学拉伸构建的组织工程化子宫片层能较好地模拟自然子宫的形态结构和功能。
- 王和平宋宇轩江红郭希民王海滨段翠密李晶项婷婷王常勇
- 关键词：细胞培养子宫胶原
- 一种组织工程化肺脏组织及其构建方法
- 本发明公开了属于组织工程与再生医学领域的一种组织工程化肺脏组织及其构建方法。该组织工程化肺脏组织通过如下构建方法获得，(1)制备肺细胞悬液；(2)制备海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊；(3)细胞与支架材料的复合及细胞-...
- 王常勇张文君邱丽媛王海滨段翠密周瑾
- 文献传递
- 一种基于壳聚糖水凝胶和生长因子治疗心肌梗死的产品
- 本发明公开了一种基于温敏性壳聚糖水凝胶的可注射性心肌组织工程产品。具体涉及应用温敏性壳聚糖水凝胶为支架材料，携带一种或几种不同促血管生长因子如bFGF、PDGF－BB、VEGF等，注射移植到动物心肌梗死模型特定区域后观察...
- 王常勇李延民卢文宁王海滨郝彤段翠密
- 文献传递
- 以支持细胞为饲养层培养小鼠精原干细胞被引量：22
- 2006年
- 为探索精原干细胞(Spermatogonialstemcells,SSCs)体外自增殖的条件以及SSCs体外快速扩增的方法,以6-8日龄昆明乳鼠为材料,分离小鼠睾丸细胞,采用Percoll梯度离心法富集SSCs;以经丝裂霉素C处理的Sertoli细胞作饲养层,以DMEM为基本培养基,加入5%胎牛血清和103u/ml的白血病抑制因子(Leukemiainhibitoryfactor,LIF),体外培养SSCs;运用免疫荧光技术,以SSCs特异性表面分子Thy1为标志,对原代培养20d和传代培养14d的细胞进行鉴定。该培养体系下,SSCs贴壁时间为6h-9h,48h后可见细胞分裂,迅速增殖出现在接种12d以后。接种后第20d形成数十至上百个细胞的细胞团,细胞总数比接种时增加了45-245倍,100倍显微镜下观察可见,单位视野内细胞团数为26±4个。传代后细胞增殖较快。原代培养20d和传代培养14d的细胞均为Thy1阳性;而传代20d后,细胞周缘不整,有伪足出现,呈现出死亡迹象。该培养条比较适合SSCs短期快速增殖。
- 李恩中李德雪张世庆王常勇张学明王海滨鲁景艳王静
- 关键词：小鼠精原干细胞SERTOLI细胞饲养层
- 组织工程心肌研究中心肌肌钙蛋白T及细胞间隙连接蛋白43免疫组化检测结果的观察与分析
- 2009年
- 目的建立组织工程心肌研究中系统观察免疫组化检测结果的程序与方法。方法取新生大鼠心脏制作石蜡组织切片;用0.25%胰酶消化法分离原代新生大鼠心肌细胞,一部分进行细胞爬片培养,一部分与液态胶原混合构建组织工程心肌并施加力学拉伸刺激,制作组织工程心肌石蜡组织切片。对三者分别进行心肌肌钙蛋白T(cTnT)及细胞间隙连接蛋白43(Cx43)抗体的免疫组化染色。比较观察天然心肌组织、体外培养心肌细胞及组织工程心肌组织免疫组化的检测结果,对其形态结构的变化进行综合分析。分别选取5个不同视野对细胞总数和cTnT阳性细胞进行计数,计算百分比。在细胞和再造心肌组织培养过程中观察自发收缩的细胞区域与cTnT着色区域的关系。结果天然心肌和组织工程心肌切片分别反映了天然在体心肌和体外构建心肌的细胞形态和组织结构特征;心肌细胞爬片显示了体外心肌细胞与非心肌细胞的形态,以及随体外培养时间的延长其形态和数量比例的改变。细胞在体外培养时间越长,成纤维细胞比例越高。尽早将分离的原代新生大鼠心肌细胞与液态胶原混合体外再造心肌组织进行三维拉伸培养有助于抑制其中的成纤维细胞的增殖速度。将分离细胞爬片培养4h后可相继观察到能自发收缩的细胞,其收缩区域与染色片中cTnT的着色区域基本相符;再造的组织工程心肌的收缩自拉伸后48h开始,逐渐从单个细胞到肌束再到整条再造心肌,频率逐渐加快,从1～2/min到5～10/min。结论建立了观察与分析组织工程心肌免疫组化结果的程序和方法,为优化实验设计与条件提供了客观参数,也为构建其他组织的形态学观察与分析方法提供了有利借鉴。
- 段翠密李颖王海滨周瑾刘志强江红王常勇
- 关键词：心肌肌钙蛋白T连接蛋白43
- 蜘蛛牵引丝蛋白MaSp1原核表达载体构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：1
- 2014年
- 目的通过基因工程手段实现牵引丝关键组成蛋白MaSp1在大肠杆菌中的异源表达,并对其进行分离纯化,从而建立基因工程蜘蛛丝基因序列串联拼接、载体构建以及原核表达与纯化的关键技术体系。方法利用同尾酶连接法对合成的基因工程蜘蛛丝基因单体序列进行串联拼接,获得多倍串联体克隆重组子,将鉴定正确的多倍串联体克隆重组子与原核表达载体pET28a(+)连接,转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导其表达,表达产物通过SDS-PAGE和Western印迹进行鉴定。在此基础上对工程菌进行高密度发酵,所获蛋白通过硫酸铵分级分离方法进行纯化。结果与结论成功构建了基因工程蜘蛛丝MaSp1多串联体的表达载体,原核表达蛋白的相对分子质量与预期一致,且纯化的目的蛋白纯度达80%以上。上述研究工作为开展基因工程蜘蛛丝蛋白的规模化制备建立了关键技术方法,并为后续基因工程蜘蛛丝的人工纺丝提供必要的前提和工作基础。
- 乔鑫王妍李俊杰段翠密王海滨周瑾杜芝燕王常勇
- 关键词：基因工程原核表达蛋白质纯化
- 一种组织工程化肺脏组织及其构建方法
- 本发明公开了属于组织工程与再生医学领域的一种组织工程化肺脏组织及其构建方法。该组织工程化肺脏组织通过如下构建方法获得，(1)制备肺细胞悬液；(2)制备海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊；(3)细胞与支架材料的复合及细胞-...
- 王常勇张文君邱丽媛王海滨段翠密周瑾
- 一种工程化子宫组织片层
- 一种工程化子宫组织片层，其特点是由子宫平滑肌细胞和基质细胞分别与凝胶材料混合后按顺序叠加而成双层结构，再在其上叠加上皮细胞，进一步形成具有类似于正常子宫壁的组织结构，包括平滑肌层、基质层和上皮层。本发明可用于子宫组织的修...
- 王常勇王和平江红郭希民段翠密王海滨宋宇轩
- 文献传递
- OPF水凝胶通过抑制心肌成纤维细胞转分化改善心梗后的心室重塑
- :作为可注射性心肌组织工程的支架材料,OPF水凝胶心梗部位注射后具有明显的抑制纤维化、改善心室重塑的作用,然而其机制尚未明确.Cardiac fibroblasts(CF)向Myofibroblast(MF)的转分化(C...
- 王海滨王丽曼王妍王常勇
- 关键词：水凝胶转分化心室重塑
