段翠密
- 作品数：121 被引量：376H指数：11
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程农业科学更多>>
- 骨髓间质干细胞复合生物陶瓷构建组织工程化人工软骨被引量：19
- 2003年
- 目的 探索以多孔β-磷酸三钙 (β- TCP)生物陶瓷材料为支架 ,经体外诱导的骨髓间质干细胞 (MSCs)为种子细胞 ,构建组织工程化软骨修复羊关节软骨缺损的可行性。方法 将 2 8只中国美利奴绵羊分为三组。实验组 (n=12 ) :分离培养羊自体第 7代 MSCs,经转化生长因子 - β诱导后接种到预制的 β- TCP多孔生物陶瓷材料上 ,细胞 -材料复合体经体外孵育后 ,无菌条件下植入预制的羊单侧肱骨近端关节面缺损处 ;单纯材料组 (n=12 ) :采用单纯β- TCP材料修复羊关节软骨缺损 ;空白对照组 (n=4 ) :制备的羊关节软骨缺损区未做任何修复。术后 12周和 2 4周分别取材 ,进行组织学、组织化学和免疫组织化学分析。结果 实验组术后 12周羊关节软骨缺损处肉眼可见透明软骨样组织形成 ,组织学检查发现 ,材料降解明显 ,未降解吸收的材料孔洞内广泛分布着新生软骨组织 ,软骨细胞外基质丰富 , 型胶原染色阳性 ;术后 2 4周 ,支架材料几乎完全降解 ,缺损区被新生软骨组织所取代。单纯材料组术后 12周 ,缺损区边缘有新生软骨组织向支架材料内长入 ,支架材料吸收明显 ;术后 2 4周 ,见从缺损区边缘长入到支架材料内的新生软骨组织逐渐增多 ,但材料的中心部位未发现新生软骨形成。空白对照组至术后 2 4周 。
- 郭希民王常勇薄斌方泽强段翠密赵强王永红张旭辉范明卢建熙
- 关键词：骨髓间质干细胞人工软骨生物陶瓷材料Β-磷酸三钙
- 结核分枝杆菌抗体双抗原夹心ELISA检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2015年
- 目的:建立2种结核分枝杆菌(Mtb)抗体的双抗原夹心ELISA检测方法,并初步评价其在Mtb血清学临床辅助诊断中的应用价值。方法:采用Mtb融合抗原38k D+ESAT6+CFP10作为包被抗原,分别以辣根过氧化物酶(HRP)和生物素(Bio)标记的38k D+ESAT6+CFP10作为标记抗原,建立2种Mtb双抗原夹心ELISA法,即HRP-ELISA法和Bio-ELISA法;采用所建立的2种方法对结核患者和健康对照血清进行检测。结果:经过一系列的反应条件优化,确定HRP-ELISA法和Bio-ELISA法的最佳抗原包被浓度分别为2、0.25μg/m L,最适加样量均为100μL血清原液,最佳标记抗原稀释率分别为1∶500、1∶2000,检测的灵敏度分别为43.66%、52.11%,特异性均为100%。结论:建立了2种Mtb双抗原夹心ELISA法,它们均适用于Mtb血清学的临床辅助诊断。
- 蒋纾芳郭兰芹宗克亮杨锡琴刘志强赵照修冰水段翠密陈堃张旭辉张嵘冯晓燕张贺秋
- 关键词：结核分枝杆菌
- 一种基于骨髓间充质干细胞的组织工程化软骨
- 本发明是一种基于骨髓间充质干细胞的组织工程化软骨，属于组织工程领域。以自体骨髓间充质干细胞作为种子细胞，多孔生物陶瓷作为支架材料，二者复合体体外培育时加入增殖剂和分化剂，体外培育一段时间后手术移植修复关节软骨缺损。本发明...
- 王常勇张玉富郭希民段翠密赵强
- 文献传递
- 失重的生物学效应研究与应用
- 刘长庭王常勇王俊锋樊尚春吕双红李天志郭占社段翠密章烨郝彤郝从均王滟濛李旭邱丽媛王德龙
- 该项目属于空间医学与生物学领域，在国家863计划等15项基金资助下。开展了失重的生物学效应研究工作，并选择药物进行干预和利用失重环境进行组织工程研究。1、率先系统研究了胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞和心肌...
- 关键词：
- 关键词：失重生物学效应种子细胞
- 组织工程心肌研究中心肌肌钙蛋白T及细胞间隙连接蛋白43免疫组化检测结果的观察与分析
- 2009年
- 目的建立组织工程心肌研究中系统观察免疫组化检测结果的程序与方法。方法取新生大鼠心脏制作石蜡组织切片;用0.25%胰酶消化法分离原代新生大鼠心肌细胞,一部分进行细胞爬片培养,一部分与液态胶原混合构建组织工程心肌并施加力学拉伸刺激,制作组织工程心肌石蜡组织切片。对三者分别进行心肌肌钙蛋白T(cTnT)及细胞间隙连接蛋白43(Cx43)抗体的免疫组化染色。比较观察天然心肌组织、体外培养心肌细胞及组织工程心肌组织免疫组化的检测结果,对其形态结构的变化进行综合分析。分别选取5个不同视野对细胞总数和cTnT阳性细胞进行计数,计算百分比。在细胞和再造心肌组织培养过程中观察自发收缩的细胞区域与cTnT着色区域的关系。结果天然心肌和组织工程心肌切片分别反映了天然在体心肌和体外构建心肌的细胞形态和组织结构特征;心肌细胞爬片显示了体外心肌细胞与非心肌细胞的形态,以及随体外培养时间的延长其形态和数量比例的改变。细胞在体外培养时间越长,成纤维细胞比例越高。尽早将分离的原代新生大鼠心肌细胞与液态胶原混合体外再造心肌组织进行三维拉伸培养有助于抑制其中的成纤维细胞的增殖速度。将分离细胞爬片培养4h后可相继观察到能自发收缩的细胞,其收缩区域与染色片中cTnT的着色区域基本相符;再造的组织工程心肌的收缩自拉伸后48h开始,逐渐从单个细胞到肌束再到整条再造心肌,频率逐渐加快,从1～2/min到5～10/min。结论建立了观察与分析组织工程心肌免疫组化结果的程序和方法,为优化实验设计与条件提供了客观参数,也为构建其他组织的形态学观察与分析方法提供了有利借鉴。
- 段翠密李颖王海滨周瑾刘志强江红王常勇
- 关键词：心肌肌钙蛋白T连接蛋白43
- 蜘蛛牵引丝蛋白MaSp1原核表达载体构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：1
- 2014年
- 目的通过基因工程手段实现牵引丝关键组成蛋白MaSp1在大肠杆菌中的异源表达,并对其进行分离纯化,从而建立基因工程蜘蛛丝基因序列串联拼接、载体构建以及原核表达与纯化的关键技术体系。方法利用同尾酶连接法对合成的基因工程蜘蛛丝基因单体序列进行串联拼接,获得多倍串联体克隆重组子,将鉴定正确的多倍串联体克隆重组子与原核表达载体pET28a(+)连接,转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导其表达,表达产物通过SDS-PAGE和Western印迹进行鉴定。在此基础上对工程菌进行高密度发酵,所获蛋白通过硫酸铵分级分离方法进行纯化。结果与结论成功构建了基因工程蜘蛛丝MaSp1多串联体的表达载体,原核表达蛋白的相对分子质量与预期一致,且纯化的目的蛋白纯度达80%以上。上述研究工作为开展基因工程蜘蛛丝蛋白的规模化制备建立了关键技术方法,并为后续基因工程蜘蛛丝的人工纺丝提供必要的前提和工作基础。
- 乔鑫王妍李俊杰段翠密王海滨周瑾杜芝燕王常勇
- 关键词：基因工程原核表达蛋白质纯化
- 基于心脏全器官脱细胞基质的组织工程支架材料制备与生物学评价被引量：1
- 2013年
- 目的探讨一种心脏全器官脱细胞方法,并对制备的心脏脱细胞基质支架进行检测与评价。方法通过联合使用胰蛋白酶、Triton X-100等洗涤剂,对成年SD大鼠离体心脏进行主动脉逆行灌流脱细胞处理。对制备的心脏脱细胞基质支架进行大体观察、甲苯胺蓝灌流染色、HE染色、扫描电镜观察、阿利新蓝染色、细胞外基质组分免疫组织化学染色等观察。结果成功制备心脏全器官脱细胞基质支架材料,其保留了原心脏的大体形态;HE染色、甲苯胺蓝染色及扫描电镜观察显示其保留了较好的脉管结构与超微空间构象;阿利新蓝染色及免疫组织化学染色结果显示,其主要的细胞外基质成分,包括Ⅰ型胶原、糖氨聚糖、纤连蛋白、层粘连蛋白保留良好。结论制备的大鼠心脏脱细胞基质支架保留了心脏原有的结构与细胞外基质成分,有望作为全器官心脏体外再造的良好组织工程支架材料。
- 陈威震段翠密李霞孙红玉牟永潮舒瑶陈成冯兰兰周瑾王常勇
- 关键词：心肌组织工程生物学特征
- 以β-磷酸三钙多孔陶瓷为载体建造组织工程化人工软骨被引量：30
- 2002年
- 目的 通过将软骨细胞接种到三维多孔 β 磷酸三钙 (β TCP)陶瓷支架材料上 ,探讨以β TCP为载体建造组织工程化软骨的可行性。 方法 将 β TCP多孔陶瓷加工成圆片状 ,并将其作为构建人工软骨的细胞支架。在支架材料上接种从兔关节软骨分离的软骨细胞 ,将细胞———陶瓷复合体置于旋转细胞培养系统 (RCCS)内 ,培养 1周后 ,将其移植到裸鼠背部皮下。植入术后 4 ,8,16周取材 ,进行大体观察、组织学及组织化学等观察。结果 复合体体内移植后 ,在裸鼠皮下有新生软骨形成 ,形成的软骨基本保持了支架材料原有形态。结论 β TCP多孔陶瓷是软骨细胞较适宜的贴附基质 ,以其为支架能够在体内建造出具有精确解剖形状的人工软骨。
- 王常勇薄斌赵强郭希民段翠密王永红范明卢建熙
- 关键词：生物陶瓷软骨细胞人工软骨
- 人骨髓间质干细胞体外扩增和向成骨细胞分化的实验研究被引量：23
- 2002年
- 骨髓间质干细胞 (mesenchymalstemcell,MSCs)是一类存在于骨髓中的具有多向分化潜能的干细胞 ,在体外不仅可分化为间质类细胞 ,而且可以分化为非间质细胞。本研究探讨人骨髓间质干细胞的体外分离纯化、培养扩增和向成骨细胞诱导分化的条件。利用密度为 1.0 73g/ml的Percoll分离骨髓的单个核细胞 ,以含 10 %胎牛血清的低糖DMEM培养基培养与扩增MSCs ,细胞纯度可达 95 %左右。取第二代和第三代的MSCs ,以含有不同浓度的抗坏血酸、β 磷酸甘油、地塞米松的诱导培养基向成骨细胞诱导 ,诱导后的细胞呈现典型的成骨细胞样改变 ,免疫组化技术显示其I型胶原染色阳性 ,ALP染色阳性 ,表明MSCs在体外具有向成骨细胞分化的潜力。
- 王永红王常勇郭希民段翠密赵强陈惠华
- 关键词：间质干细胞骨髓成骨细胞分化
- 香菇多糖对抗模拟微重力环境培养的淋巴细胞免疫功能抑制的实验研究被引量：4
- 2012年
- 本研究旨在探索香菇多糖对抗旋转式细胞培养系统(rotary cell culture system,RCCS)模拟微重力环境下淋巴细胞免疫功能降低的作用。体外分离培养小鼠脾淋巴细胞,在正常重力环境和RCCS模拟微重力环境下分别添加10、20和40μg/ml的香菇多糖溶液,培养24、48和72 h取样,用MTT法、ELISA和流式细胞术分别检测香菇多糖对细胞增殖度、细胞因子分泌量和表面标志表达的影响。结果表明,10、20和40μg/ml香菇多糖在处理时间内对小鼠脾淋巴细胞增殖无明显促进作用;不同浓度的香菇多糖均可提高小鼠脾淋巴细胞在模拟微重力环境下IL-2和IFN-γ的分泌量和促进小鼠脾淋巴细胞表面CD4和CD8分子的表达。结论:香菇多糖具有对抗模拟微重力环境造成的淋巴细胞免疫功能降低的作用。
- 郝彤王滟濛李俊杰杜芝燕段翠密王常勇宋锦苹王林杰李莹辉王妍
- 关键词：香菇多糖模拟微重力淋巴细胞
