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甘草鲨烯合酶1基因多态性及其与β-香树脂醇合成酶共表达对β-香树脂醇积累的影响研究(英文)被引量：7: 2014年; 甘草是我国最常用的大宗药材之一。甘草中最主要的活性成分为甘草酸,其生物合成途径受到很多酶的调节。鲨烯合酶(squalene synthase,SQS)及β-香树脂醇合成酶(β-amyrin synthase,β-AS)是其中的两种关键酶。为了揭示鲨烯合酶基因多态性及其与β-香树脂醇合成酶共表达对MVA代谢途径的影响,本文构建了7种载体,分别含有3种不同的SQS1基因和β-AS基因,将其在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中表达,通过TLC及GC-MS检测代谢产物β-香树脂醇的含量。结果显示SQS1基因与β-AS基因共表达有助于代谢产物β-香树脂醇的积累,在3种不同的SQS1基因中,以SQS12为最好。本文为进一步研究功能基因对甘草酸代谢途径的影响以及提高甘草酸的含量奠定了理论基础。; 刘颖陈宏昊文浩高雅王礼强刘春生; 关键词：甘草鲨烯合酶共表达基因多态性甘草酸

甘草鲨烯合酶基因多态性对其编码酶催化效率影响的研究被引量：7: 2012年; 目的:分析甘草鲨烯合酶(squalene synthase,SQS)基因多态性及其对编码酶催化效率的影响,为揭示优质甘草形成的分子机制奠定基础。方法:提取甘草总RNA;PCR扩增其SQS基因编码序列;测序后分析SQS序列的多态性;将具有明显差异的4个甘草SQS序列(SQS1C,SQS1F,SQS2A,SQS2B)连入表达载体pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21;IPTG诱导蛋白表达,纯化后用于体外酶促反应;GC-MS鉴定产物并比较相对含量。结果:甘草SQS1基因存在单核苷酸多态性(single nuclearpolymorphisms,SNPs)、插入与缺失多态性(InDel)、选择性剪接(AS)多态性;SQS2基因只存在SNPs。氨基酸序列分析显示,SQS1非保守替换占53.94%,结构域中有2个位点突变;SQS2非保守替换占60%,结构域中有1个位点突变。在4种编码酶的体外酶促反应中,利用GC-MS均能检测到产物生成;SQS1F编码酶积累鲨烯的能力高于其他序列。结论:甘草SQS基因具有丰富的多态性,其编码酶催化效率差异显著,这可能是优质甘草形成的分子基础。; 刘颖张宁王学勇刘春生陈宏昊文浩; 关键词：甘草基因多态性选择性剪接鲨烯

甘草3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因多态性对其编码酶催化效率的影响被引量：6: 2012年; 目的:利用GC-MS方法分析甘草不同3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)基因型表达蛋白的催化效率,为揭示甘草HMGR多态性在优质甘草药材形成中的作用奠定基础。方法:以从甘草中克隆的4种HMGR基因突变型构建表达载体,转化Escherichia coli BL21,进行诱导表达、检测、纯化及体外酶促反应,采用TLC及GC-MS对反应产物进行定性及定量分析。结果:L/V型突变(-HSL,-HSV)催化活性近似,GA插入型突变(GALLV,GALSV)催化活性近似,但插入型突变的催化活性显著高于前者,是前者的2倍左右。结论:甘草功能基因HMGR基因多态性可能是甘草优质药材形成的分子基础。; 刘颖许巧仙王学勇刘春生陈宏昊; 关键词：甘草基因多态性 MVA

甘草3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因多态性与甘草酸含量的相关性分析被引量：7: 2012年; 目的:揭示甘草3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)基因的多态性,并阐述HMGR基因多态性与甘草酸含量的相关性。方法:以甘草酸含量差异显著的甘草个体为材料,通过RT-PCR法扩增其HMGR基因编码区;与载体pMD19-T连接后克隆测序;通过多重比对进行HMGR基因多态性分析,及与甘草酸含量之间的关联分析。结果:HMGR基因编码区多态性包括整码突变、碱基置换突变、拷贝数多态性及等位基因杂合;HMGR编码氨基酸序列中存在以下4种类型变异,即-HSL,-HSV,GALLV,GALSV,其中-HSV型为甘草中普遍存在类型,-HSL型为甘草酸低含量甘草的特有类型,GALSV型为甘草酸高含量甘草特有类型。结论:甘草HMGR基因编码区具有丰富的多态性,和甘草酸含量之间具有相关性。; 刘颖许巧仙王学勇刘春生陈宏昊; 关键词：甘草基因多态性逆转录生物信息学

甘草HMGR基因cDNA的克隆及功能鉴定(英文)被引量：18: 2013年; 甘草为常用中药材,具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛和调和诸药等作用。甘草酸是甘草中的主要活性成分,其生物合成途径受到许多酶的调控,其中3-羟基-3-甲基戊二酰CoA还原酶(3-hydroxy-3-methylglutary CoA reductase,HMGR)催化3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(3-hydroxy-3-methylglutary CoA,HMG-CoA)生成甲羟戊酸(MVA),是该途径中的第一个限速酶。本文克隆了甘草HMGR基因cDNA序列,对其进行序列分析,并与其他物种进行序列比对。构建了原核表达载体,诱导其外源表达及酶促反应,并利用TLC及GC-MS对产物进行检测。结果表明本文克隆得到的HMGR序列能很好的完成特定的酶促反应任务。由于HMGR基因在甘草酸生物合成途径中的重要作用,因此本实验的研究结果对于在分子水平上揭示高品质甘草的形成机制具有一定的意义。; 刘颖许巧仙席培宇陈宏昊刘春生; 关键词：甘草 HMGR CDNA GC MS

基于β-AS基因的甘草道地性形成机制研究被引量：9: 2013年; 目的:对甘草道地性形成机制进行探索。方法:在GenBank中检索β-香树酯醇合成酶(β-AS)基因,进行序列比对并找出序列保守区,用primer premier 5.0软件设计引物,对3个不同产地甘草材料的β-AS基因进行扩增、测序,用MegAlign软件进行序列分析并构建系统树。在表达差异实验中,对来自3个产地的9份甘草材料进行总RNA提取,逆转录得到cDNA,以甘草18S基因为内参,PCR扩增后进行相对表达量分析。结果:在序列多态性实验中,9个样品的β-AS序列经比对分析共发现108处变异位点,内含子变异位点数高于外显子变异位点数两倍。在表达差异实验中内蒙组、甘肃组和宁夏组的甘草β-AS基因平均相对表达量有显著性差异。结论:不同产地甘草β-AS基因多态性的差异以及表达量的差异,可能是导致甘草道地性形成的原因之一。; 席培宇刘颖陈宏昊刘春生; 关键词：甘草序列多态性道地性

基于β-AS基因SNPs的甘草道地性及甘草酸快速积累机制研究: 甘草是我国常用的大宗药材,药食兼用品种。其为国之药老,有“十方九草”之美誉,被大量用于临床配方,同时,其提取物被广泛地应用于工业、化工等领域,并有大量的出口。甘草酸是甘草药材的重要活性成分,其含量是我国《药典》规定的衡量...; 陈宏昊; 关键词：甘草 SNPS 道地性 PCR-SSCP 甘草酸; 文献传递

基于β-香树脂醇合成酶基因SNP的甘草道地性机制研究被引量：6: 2015年; 本文采用PCR-SSCP和测序组合技术检测了6个产地甘草的β-香树脂醇合成酶(β-AS)基因的SNP,并进行了SNP和产地的相关性分析,探索甘草道地性形成的分子机制。结果显示,甘草β-AS基因第一外显子存在1处SNP,可将甘草划分为94A型、94G型和94A/G型3种基因型,其中94A型在道地产区所占比例要远远高于非道地产区,达到极显著差异(P<0.001)。本文研究证明,甘草β-AS基因94位点的SNP可能是导致甘草道地性形成的机制之一。; 臧艺玫李妍芃乔晶陈宏昊刘春生; 关键词：甘草道地性单核苷酸多态性

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陈宏昊