刘秋英
- 作品数：9 被引量：9H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肝癌早期预警和筛查试剂
- 本发明要解决的技术问题是提供一种检测离体样本中抑癌基因启动区启动区CpG岛甲基化情况的试剂。本发明解决该技术问题的技术方案是提供了一种肝癌早期预警和筛查试剂盒。该试剂盒包括有能检测人胚肝血影蛋白基因启动区CpG岛甲基化状...
- 覃扬黄文庆魏玲沈文燕李冉刘秋英李波
- 文献传递
- 转录因子CTCF对人肝癌干细胞及细胞增殖的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨CCCTC结合因子(CTCF)蛋白对人肝癌细胞(HepG2)的肿瘤干细胞的影响以及对HepG2和CNE1(鼻咽癌细胞系)细胞生存能力的影响。方法构建pEGFP-N1/CTCF、CTCFshRNA和GFPshRNA质粒,转染至HepG2和CNE1细胞后,以RT-PCR及Western blot检测CTCF mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞术检测转染CTCF-shRNA质粒后48h的HepG2细胞中携带表面抗原CD90肿瘤干细胞的比例,以转染GFP-shRNA的HepG2细胞和野生型HepG2细胞为对照。采用MTT方法分别检测转染CTCF过表达重组质粒及CTCF-shRNA质粒后24、48、72hHepG2和CNE1细胞的生存能力。结果 pEGFP-N1/CTCF转染后增加HepG2和CNE1细胞中CTCF mRNA和蛋白的表达(与pEGFP-N1相比,P<0.05),CTCF-shRNA转染则降低表达(与GFP-shRNA相比,P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,CD90+细胞的检出率在转染CTCF-shRNA质粒细胞〔(1.733 0±0.417 7)%〕高于野生型HepG2细胞〔(0.575 0±0.062 9)%〕及转染对照GFP-shRNA质粒细胞〔(0.350 0±0.086 6)%〕(P<0.05);MTT实验结果显示CTCF的表达改变对HepG2和CNE1细胞的生存能力的影响不明显(P>0.05)。结论 CTCF可抑制人肝癌干细胞生成,对HepG2和CNE1细胞生长无明显影响。
- 刘秋英谢晓砚魏玲刘俊沈文燕李冉俞小琴覃扬
- 关键词：CTCF细胞增殖
- 肝癌早期预警和筛查试剂
- 本发明要解决的技术问题是提供一种检测离体样本中抑癌基因启动区启动区CpG岛甲基化情况的试剂。本发明解决该技术问题的技术方案是提供了一种肝癌早期预警和筛查试剂盒。该试剂盒包括有能检测人胚肝血影蛋白基因启动区CpG岛甲基化状...
- 覃扬黄文庆魏玲沈文燕李冉刘秋英
- 用于肝癌早期预警和筛查的试剂盒
- 本发明属于分子生物学(肿瘤筛查)领域，具体涉及一种可用于肝癌早期预警和筛查的技术。本发明属于分子生物学(肿瘤筛查)领域，具体涉及一种用于肝癌早期预警和筛查的技术。本发明要解决的技术问题是为肝癌早期预测提供一种新选择。本发...
- 覃扬黄元魏玲孙爱民李波孙成均梁伟波刘秋英俞小琴何靖炀
- 文献传递
- 转录因子CTCF与表观遗传及疾病的关系被引量：1
- 2012年
- CTCF是普遍存在于真核生物中的多功能转录因子，通过其11锌指结构可与多种基因和蛋白质结合而广泛参与基因的表达调控，表现出各种生物学功能。CTCF参与染色质重塑和基因印迹等表观遗传调控并且起关键作用。CTCF参与的调控若发生异常将引起生长发育或神经功能异常等疾病。作者就近年来CTCF与表观遗传、疾病之间的关系作一介绍。
- 刘秋英覃扬
- 关键词：基因调控表观遗传
- 不同固定方法对细胞免疫荧光染色结果的影响被引量：7
- 2013年
- 目的比较不同的固定方法对细胞内胞浆蛋白Vigilin和核蛋白CTCF的免疫荧光染色结果的影响。方法在免疫染色前,分别采用四种方法对HepG2细胞进行固定及通透:①纯甲醇-20℃处理8min后,再用80%丙酮-20℃处理1min。②甲醇:丙酮的1∶1混合溶剂-20℃处理10min。③在方案2的基础上,再用0.1%Triton-X-100冰上通透10min。④4%多聚甲醛室温固定10min后,用0.1%Triton-X-100冰上通透10min。结果采用方案①、②、③、④得到的胞浆蛋白vigilin在细胞内的大致分布无明显差异,但用方案④处理后,染色效果更为清晰而能更好地观察到细胞的细微结构;另外,采用方案①和方案②处理细胞后,对核蛋白CTCF进行免疫染色,可见CTCF分布于胞浆;方案③中,在纯甲醇固定后,若用0.1%Triton-X-100通透,则CTCF显示主要分布于细胞核内,胞质内亦有阳性染色;方案④的通透条件下,CTCF特异性分布于细胞核,胞质内几乎无阳性染色。结论不同的固定及通透方法对免疫染色的结果影响很大,应针对抗原特点,采用适宜的固定方法,以得到正确的实验结果。
- 李冉杨文理覃扬魏玲沈文燕刘秋英俞小琴
- 关键词：免疫荧光核蛋白
- 人VIGILIN基因分段克隆及表达
- 2015年
- 目的探讨人高密度脂蛋白结合蛋白(HDLBP)-VIGILIN蛋白与其他蛋白质相互作用的机制。方法根据VIGILIN基因全长编码区的结构域,将VIGILIN基因全长编码区分为N端、KH1-7、KH8-12、KH13-14、C端5段,以pDsred2-N1/VIGILIN为模板分别扩增5个片段及全长cDNA后克隆至pGEX 5X3原核表达载体,测序,然后将鉴定后的重组质粒转化到表达宿主菌E.coli BL21中进行诱导表达GST-VIGILIN融合蛋白,并用SDSPAGE电泳及Western blot检测蛋白表达结果。结果成功扩增了人VIGILIN基因编码区分段片段,并且构建到原核表达载体中,经酶切、测序鉴定证实序列完全正确,重组载体构建成功,并且在pGEX原核表达系统中诱导表达GST-VIGILIN融合蛋白,经SDS-PAGE电泳及Western blot检测初步证实表达成功。结论本实验首次根据VIGILIN蛋白不同的结构域成功构建了GST-VIGILIN分段克隆原核表达载体,并且对融合蛋白表达条件进行了优化,成功表达了GST融合蛋白。
- 俞小琴魏玲刘秋英黄元赵荣策覃扬
- 关键词：结构域原核表达系统
- pCS-CG-DsRed2-vigilin重组载体的构建及vigilin重组慢病毒包装
- 2014年
- 目的构建pCS-CG-DsRed2-vigilin慢病毒重组载体,以及包装pCS-CG-DsRed2-vigilin重组慢病毒。方法用NheⅠ、NotⅠ将目的片段红色荧光蛋白基因DsRed2从pDsRed2-N1中切下,连入pcDNA3.1(-)上,再用Kpn1从pcDNA3.1(-)-DsRed2中切下DsRed2片段插入pCS-CG-vigilin中。用相应的内切酶鉴定,阳性克隆送测序鉴定。采用三质粒系统包装慢病毒并分别感染HEK293T和HepG2细胞。结果电泳显示,构建的pCS-CG-DsRed2-vigilin用KpnⅠ和SacⅡ分别单酶切切下800bp和600bp的插入片段,阳性克隆质粒测序结果与pDsRed2-N1中DsRed2序列一致;HEK293T和HepG2细胞感染后均能观察到较强的红色荧光。结论带有红色荧光基因的pCS-CG-DsRed2-vigilin重组载体构建成功;成功包装出带红色荧光标签的vigilin重组慢病毒,且该病毒具有较高的感染效率。
- 沈文燕李冉覃扬杨文理刘秋英魏玲俞小琴
- 关键词：重组慢病毒
- 用于肝癌早期预警和筛查的试剂盒
- 本发明属于分子生物学(肿瘤筛查)领域，具体涉及一种可用于肝癌早期预警和筛查的技术。本发明属于分子生物学(肿瘤筛查)领域，具体涉及一种用于肝癌早期预警和筛查的技术。本发明要解决的技术问题是为肝癌早期预测提供一种新选择。本发...
- 覃扬黄元魏玲孙爱民李波孙成均梁伟波刘秋英俞小琴何靖炀
- 文献传递
