沈文燕
- 作品数：5 被引量：8H指数：1
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肝癌早期预警和筛查试剂
- 本发明要解决的技术问题是提供一种检测离体样本中抑癌基因启动区启动区CpG岛甲基化情况的试剂。本发明解决该技术问题的技术方案是提供了一种肝癌早期预警和筛查试剂盒。该试剂盒包括有能检测人胚肝血影蛋白基因启动区CpG岛甲基化状...
- 覃扬黄文庆魏玲沈文燕李冉刘秋英李波
- 文献传递
- 转录因子CTCF对人肝癌干细胞及细胞增殖的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨CCCTC结合因子(CTCF)蛋白对人肝癌细胞(HepG2)的肿瘤干细胞的影响以及对HepG2和CNE1(鼻咽癌细胞系)细胞生存能力的影响。方法构建pEGFP-N1/CTCF、CTCFshRNA和GFPshRNA质粒,转染至HepG2和CNE1细胞后,以RT-PCR及Western blot检测CTCF mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞术检测转染CTCF-shRNA质粒后48h的HepG2细胞中携带表面抗原CD90肿瘤干细胞的比例,以转染GFP-shRNA的HepG2细胞和野生型HepG2细胞为对照。采用MTT方法分别检测转染CTCF过表达重组质粒及CTCF-shRNA质粒后24、48、72hHepG2和CNE1细胞的生存能力。结果 pEGFP-N1/CTCF转染后增加HepG2和CNE1细胞中CTCF mRNA和蛋白的表达(与pEGFP-N1相比,P<0.05),CTCF-shRNA转染则降低表达(与GFP-shRNA相比,P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,CD90+细胞的检出率在转染CTCF-shRNA质粒细胞〔(1.733 0±0.417 7)%〕高于野生型HepG2细胞〔(0.575 0±0.062 9)%〕及转染对照GFP-shRNA质粒细胞〔(0.350 0±0.086 6)%〕(P<0.05);MTT实验结果显示CTCF的表达改变对HepG2和CNE1细胞的生存能力的影响不明显(P>0.05)。结论 CTCF可抑制人肝癌干细胞生成,对HepG2和CNE1细胞生长无明显影响。
- 刘秋英谢晓砚魏玲刘俊沈文燕李冉俞小琴覃扬
- 关键词：CTCF细胞增殖
- 肝癌早期预警和筛查试剂
- 本发明要解决的技术问题是提供一种检测离体样本中抑癌基因启动区启动区CpG岛甲基化情况的试剂。本发明解决该技术问题的技术方案是提供了一种肝癌早期预警和筛查试剂盒。该试剂盒包括有能检测人胚肝血影蛋白基因启动区CpG岛甲基化状...
- 覃扬黄文庆魏玲沈文燕李冉刘秋英
- 不同固定方法对细胞免疫荧光染色结果的影响被引量：7
- 2013年
- 目的比较不同的固定方法对细胞内胞浆蛋白Vigilin和核蛋白CTCF的免疫荧光染色结果的影响。方法在免疫染色前,分别采用四种方法对HepG2细胞进行固定及通透:①纯甲醇-20℃处理8min后,再用80%丙酮-20℃处理1min。②甲醇:丙酮的1∶1混合溶剂-20℃处理10min。③在方案2的基础上,再用0.1%Triton-X-100冰上通透10min。④4%多聚甲醛室温固定10min后,用0.1%Triton-X-100冰上通透10min。结果采用方案①、②、③、④得到的胞浆蛋白vigilin在细胞内的大致分布无明显差异,但用方案④处理后,染色效果更为清晰而能更好地观察到细胞的细微结构;另外,采用方案①和方案②处理细胞后,对核蛋白CTCF进行免疫染色,可见CTCF分布于胞浆;方案③中,在纯甲醇固定后,若用0.1%Triton-X-100通透,则CTCF显示主要分布于细胞核内,胞质内亦有阳性染色;方案④的通透条件下,CTCF特异性分布于细胞核,胞质内几乎无阳性染色。结论不同的固定及通透方法对免疫染色的结果影响很大,应针对抗原特点,采用适宜的固定方法,以得到正确的实验结果。
- 李冉杨文理覃扬魏玲沈文燕刘秋英俞小琴
- 关键词：免疫荧光核蛋白
- pCS-CG-DsRed2-vigilin重组载体的构建及vigilin重组慢病毒包装
- 2014年
- 目的构建pCS-CG-DsRed2-vigilin慢病毒重组载体,以及包装pCS-CG-DsRed2-vigilin重组慢病毒。方法用NheⅠ、NotⅠ将目的片段红色荧光蛋白基因DsRed2从pDsRed2-N1中切下,连入pcDNA3.1(-)上,再用Kpn1从pcDNA3.1(-)-DsRed2中切下DsRed2片段插入pCS-CG-vigilin中。用相应的内切酶鉴定,阳性克隆送测序鉴定。采用三质粒系统包装慢病毒并分别感染HEK293T和HepG2细胞。结果电泳显示,构建的pCS-CG-DsRed2-vigilin用KpnⅠ和SacⅡ分别单酶切切下800bp和600bp的插入片段,阳性克隆质粒测序结果与pDsRed2-N1中DsRed2序列一致;HEK293T和HepG2细胞感染后均能观察到较强的红色荧光。结论带有红色荧光基因的pCS-CG-DsRed2-vigilin重组载体构建成功;成功包装出带红色荧光标签的vigilin重组慢病毒,且该病毒具有较高的感染效率。
- 沈文燕李冉覃扬杨文理刘秋英魏玲俞小琴
- 关键词：重组慢病毒
