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猪环曲病毒检测方法的建立及四川省分子流行病学调查: 猪环曲病毒(Porcine Torovirus，PToV)为一种单股正链的RNA病毒，是套式病毒目(Nidovirales)，冠状病毒科(Coronaviridae)，凸隆病毒属成员之一。1992年，首次在南非报道的猪腹...; 周璐; 关键词：逆转录聚合酶链反应检测分子流行病学基因序列; 文献传递

猪巨细胞病毒gB基因优势抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立被引量：1: 2013年; 扩增了猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因的优势抗原表位区,将构建成功的gB基因优势抗原表位区原核表达重组质粒(pET32a-gB)转化入表达菌Rosetta(DE3)中进行表达,以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了一种检测PCMV抗体的间接ELISA方法,并对该间接ELISA检测方法进行了优化。结果显示,最佳抗原包被浓度为1.9μg/mL,最佳血清稀释度为1∶160,二抗最佳稀释度为1∶10 000;当样品D450nm≥0.26时判为阳性,当样品D450nm<0.215时判为阴性,介于两者之间时判为可疑。用该间接ELISA方法对138份PCMV阴性血清与240份PCMV阳性血清进行检测的结果显示,它的特异性为97.83%,敏感性为97.9%,变异系数均小于10%。用该ELISA方法和Western-blot对184份临床样品进行检测,结果二者的符合率为92.4%。结果表明,该间接ELISA方法简便快捷,具有良好的特异性、敏感性及重复性,适用于对PCMV抗体的大规模检测。; 刘骁廖珊朱玲周远成周璐; 关键词：原核表达间接ELISA

一种猪环曲病毒RT-PCR检测试剂盒及其检测方法: 本发明公开了一种猪环曲病毒RT-PCR检测试剂盒及其检测方法，试剂盒组成包括：阳性对照模板：对猪环曲病毒的阳性样品抽提RNA，逆转录后获得的cDNA，共20ul，每次1ul；阴性对照样品：SPF猪粪便样品和PBS按SPF...; 朱玲徐志文周璐; 文献传递

猪环曲病毒N基因的克隆及生物信息学分析被引量：1: 2015年; 为研究猪环曲病毒(PToV)N蛋白的生物信息学特征,运用RT-PCR技术扩增猪环曲病毒N基因,测序并对其进行生物信息学分析。结果成功获得了492bp的PToV N基因(GenBank登录号为KM036209)。经生物信息学分析,此序列编码163个氨基酸,理论等电点(pI)为12.14,理论分子质量为18 695.5u,不稳定系数为77.47;不同密码子对同一氨基酸选择上呈现一定的偏嗜性;最大疏水指数为1.589,最小疏水指数为-3.533;无信号肽和跨膜区;抗原表位主要位于N末端和C末端。预测其可能包含4个N-糖基化作用位点,2个蛋白激酶C磷酸化作用位点、1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化作用位点、1个N-豆蔻酰化位点。进化树分析结果显示,KM036209与韩国株和上海株亲缘关系很接近,与荷兰及西班牙株不属于同一分支。; 周桐枫周璐周远成刘小琬徐志文朱玲郭万柱; 关键词：N基因克隆生物信息学分析

猪环曲病毒套式RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：3: 2014年; 根据GenBank中猪环曲病毒N基因设计合成2对特异性扩增引物,成功建立了猪环曲病毒的套式RT-PCR快速检测方法。为验证本方法的特异性,以猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、A群猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪嵴病毒、沙门菌及大肠杆菌作为阴性对照,结果显示只有在猪环曲病毒的核酸作为模板时才能扩增出预期的258bp和198bp 2条片段。敏感性试验显示,该方法能检测到的最低核酸含量为1pg。结果表明,建立的RT-PCR方法特异性强、灵敏度高,可用于猪环曲病毒的临床检测和流行病学调查。利用本方法对采集自四川省部分地区的50份临床样品进行检测,猪环曲病毒阳性率为30%。; 王赟周璐周远成蔡雨函朱玲徐志文郭万柱; 关键词：套式RT-PCR

猪环曲病毒RT-PCR检测方法的建立及其应用被引量：8: 2012年; 为建立猪环曲病毒快速检测方法,根据GenBank中猪环曲病毒S基因设计合成1对特异性扩增引物,建立了检测猪环曲病毒的RT-PCR方法。以伪狂犬病病毒、猪嵴病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、A群猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪链球菌和大肠杆菌进行特异性试验;结果显示,仅猪环曲病毒阳性模板扩增得到451bp的目的基因,测序结果与GenBank中猪环曲病毒S基因序列(GenBank登录号:AJ575372.1)的同源性为93%。敏感性试验显示,该方法能检测到的最低核酸含量为10pg。利用该方法对采集自四川省部分地区的43份临床样品进行检测;结果,临床样品中猪环曲病毒阳性率为25.6%。结果表明,建立的RT-PCR方法特异性强、灵敏度高,可用于猪环曲病毒的临床检测和流行病学调查。; 周璐李淞徐薇薇周远成赵睿蔡雨函吴江江朱玲徐志文郭万柱; 关键词：RT-PCR

喀斯特景区低碳旅游评价体系研究——以宜宾兴文石海洞乡为例: “低碳”成为应对全球气候变暖的重要武器，取得了全世界的认可。在低碳经济大背景下，新型旅游消费模式应运而生。该模式旨在最大限度的减少和控制其碳排放量。低碳理念的出现，使其与旅游景区的结合成为了当今发展的一种趋势，创建低碳型...; 周璐; 关键词：旅游业景区建设

猪环曲病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：4: 2013年; 根据GenBank中猪环曲病毒（porcine torovirus,PToV）N基因的保守序列,设计合成1对针对PToV的特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅡ检测PToV的实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法能很好地将PToV与猪伪狂犬病病毒、猪嵴病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、A群猪轮状病毒、猪瘟病毒、沙门菌和大肠杆菌区分开来,特异性强。检测PToV的N基因在8.65×101~8.65×108拷贝/μL范围内有很好的线性关系,其扩增相关系数为0.998 9,扩增产物的熔解曲线分析只有1个单特异峰。所建立的实时荧光定量RT-PCR方法组内变异系数为0.29%~1.30%,组间变异系数为0.45%~1.80%,重复性较好。利用该方法对采集自四川部分地区的43份临床样品进行检测,实时荧光定量RTPCR检出13份阳性样品,与常规PCR检测方法的阳性符合率为100%。结果表明建立的实时荧光定量RT-PCR方法特异性较强、灵敏度高,可用于该病的临床检测和流行病学调查。; 周璐周远成魏浩澈付梦瑾刘骁季洪伟朱玲徐志文郭万柱; 关键词：SYBR 实时荧光定量RT-PCR

2011年四川省部分规模化猪场猪瘟抗体水平监测被引量：2: 2012年; 为掌握四川省规模养猪场猪瘟的免疫状况，为有目的、有重点地开展相应免疫提出合理的建议，笔者对四川省生猪生产相对集中地区的15个规模化猪场的1108份血清进行了猪瘟抗体水平检测。; 李淞朱玲吴江江周璐; 关键词：规模化猪场猪瘟抗体抗体水平免疫状况规模养猪场

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周璐