张慧慧
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：武汉大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用改良体细胞基因敲入技术内源标记跨膜丝氨酸蛋白酶RHBDD1的研究
- 2011年
- 目的应用改良的体细胞基因敲入技术将标签序列靶向敲入目的基因。方法设计引物并构建RHBDD1的打靶载体,经过腺相关病毒包装、感染、新霉素筛选和鉴定等步骤获得含有新霉素抗性的阳性单克隆细胞株,最后通过cre病毒感染和筛选获得RHBDD1内源敲入FLAG和SBP双标签的HCT116结直肠癌细胞株。结果经过包装病毒感染与筛选验证后得到6个打靶阳性克隆;进一步经cre病毒感染与筛选后得到2株去除新霉素抗性标记的阳性细胞克隆;通过Western blotting实验证明RHBDD1-FLAG-SBP融合蛋白的表达。结论通过改良的体细胞基因敲入技术成功构建跨膜丝氨酸蛋白酶RHBDD1内源敲入FLAG和SBP双标签的HCT116结直肠癌细胞株。
- 宋伟李尚泽张慧慧缪时英王琳芳张晓东杜润蕾
- 关键词：基因敲入同源重组
- 人大肠癌细胞系HCT116中Sirt 1基因敲除细胞株的构建
- 2012年
- 目的利用AAV介导的体细胞基因敲除技术,在人大肠癌细胞系HCT116中对靶基因Sirt 1进行敲除,达到基因沉默的目的。方法构建Sirt1打靶载体,通过病毒包装、感染、药物筛选、PCR鉴定、Western blotting鉴定等步骤获得Sirt 1基因敲除的细胞株。结果经过筛选和鉴定后获得两个Sirt1-/-阳性克隆,成功构建HCT116 Sirt1-/-细胞系。结论通过体细胞敲除技术,我们成功地获得Sirt1敲除肠癌细胞株。
- 贾一帆张慧慧王卫星杜润蕾
- 关键词：同源重组SIRT
- 敲除TSPAN1抑制人结肠癌细胞的生长和侵袭被引量：3
- 2016年
- 目的 TSPAN1能够影响人结直肠癌细胞的增殖、扩散和侵袭。方法用腺病毒同源重组的方法建立TSPAN1缺失的人结直肠癌HCT116细胞系,CCK-8、克隆形成、划痕和Transwell实验分别检测缺失TSPAN1的细胞生长速率、成瘤、迁移和侵袭能力。裸鼠成瘤实验检测TSPAN1对肿瘤扩散的影响。双荧光素酶实验验证TSPAN1对雌激素受体和TGF-β受体活性的影响。结果缺失TSPAN1的HCT116细胞的生长速率、成瘤、迁移和侵袭能力显著降低。在裸鼠中分别注射野生型和缺失TSPAN1的HCT116细胞,后者肿瘤扩散变慢,并且裸鼠的成活率提高。过表达TSPAN1能够激活雌激素受体和TGF-β受体。结论 TSPAN1可能通过雌激素受体和TGF-β受体通路来调节细胞增殖和侵袭过程,并且为治疗结直肠癌提供了潜在的新靶标。
- 邢娜娜张慧慧谢佳琪张泽延杜润蕾张晓东
- 关键词：结直肠癌迁移
