李围
- 作品数：9 被引量：10H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- SIK2参与TGFβ信号通路的调节
- 2013年
- SIK2是调节糖脂代谢最重要的激酶之一.前期研究表明SIK2的同源家族成员SIK1可调控TGFβ信号通路的活性,但SIK2对TGFβ信号通路的调控作用尚无报导.本研究中我们检测了TGFβ通路对SIK2的调节作用以及SIK2对该通路活性的调控.结果表明,TGFβ刺激可诱导SIK2的mRNA表达上调;转染结合报告酶活性分析显示,SIK2可反式激活含TGFβ信号通路反应元件(CAGA)的人工启动子驱动的Luc报告基因的表达;在有TGFβ存在时甚至增强其表达;Western印迹分析表明TGFβ1诱导下敲低SIK2使p21蛋白表达水平下降.本研究结果显示SIK2可被TGFβ诱导表达,是一个新的TGFβ信号通路正调控因子.
- 王磊李围李围于淼詹轶群李长燕葛常辉
- Tpr-Met转化的Ba/F3稳定株的构建被引量：1
- 2012年
- 目的:建立一种可用于高通量筛选c-Met抑制剂的细胞模型。方法:采用电转染将Tpr-Met表达载体导入Ba/F3细胞中并筛选出能够稳定表达Tpr-Met的细胞株。而后对这种稳定株的白细胞介素3(IL-3)非依赖性增殖、Tpr-Met的表达及下游通路的活化、c-Met抑制剂SU11274对细胞增殖和信号通路的抑制作用进行全面评价。通过酶标仪检测细胞MTS吸光度值判断细胞的增殖水平,通过Western blot法检测Tpr-Met的表达及下游通路的活化、c-Met抑制剂SU11274对细胞信号通路的抑制作用。结果:获得稳定表达Tpr-Met的Ba/F3细胞株,该细胞株呈现IL-3非依赖性生长;能够表达持续活化的Tpr-Met;下游信号通路中关键分子Erk的磷酸化水平显著提升;c-Met特异性抑制剂SU11274通过抑制Tpr-Met磷酸化抑制下游信号通路的活化并抑制稳定株细胞增殖。结论:成功构建了Tpr-Met转化的Ba/F3细胞株。
- 术凌飞李围詹轶群许望翔杨晓明李长燕
- 关键词：BA信号通路
- AKT1磷酸化转录因子HTF4 Ser559位点并调控其活性(英文)
- 2013年
- AKT(即也称蛋白激酶B,PKB)通过磷酸化其下游底物发挥多种生理功能.我们利用串联亲和纯化联合质谱技术发现一个新的由HEB基因编码的AKT候选相互作用蛋白HTF4(helix-loop-helix transcription factors 4,也称transcription factor 12,TCF12).通过免疫共沉淀、GST-pull down、共定位实验验证了HTF4与AKT之间的相互作用;采用体内体外实验表明,AKT1磷酸化HTF4的Ser559位点依赖于PI3K途径.突变Ser559位点不改变HTF4的细胞核定位,但降低了HTF4转录活性.这些结果证明HTF4是AKT新的磷酸化底物.进一步研究发现,HTF4表达增强明显抑制了HepG2细胞的迁移,Ser559位点突变进一步增强了HTF4对HepG2细胞迁移的抑制能力.AKT磷酸化HTF4的具体功能有待更加深入的研究.
- 王磊于淼于淼詹轶群李长燕葛常辉杨晓明
- 关键词：AKT1肝癌细胞磷酸化
- Akt1与凋亡诱导因子AIF相互作用的研究被引量：4
- 2008年
- 目的确定Akt1与凋亡诱导因子AIF是否存在相互作用及其可能的作用方式。方法从成人肝cDNA文库中扩增获得Akt1和AIF基因,构建融合Flag标签的Akt1(pFlag-Akt1)和融合Myc标签的AIF(pMyc-AIF)真核表达重组质粒,转染细胞后通过免疫共沉淀反应,检测二者在体内的结合情况;构建融合GST标签的AIF原核表达重组质粒,诱导表达并纯化后获得融合蛋白GST-AIF,通过GST-pulldown实验检测GST-AIF与融合Flag标签的Akt1蛋白在体外的结合情况;构建融合GFP标签的AIF的真核表达重组质粒,转染细胞,观察在凋亡信号刺激下AIF的转位情况,及Akt1的活化对该过程的影响。结果Akt1可与AIF在细胞内、外结合,且活化的Akt1对AIF在凋亡信号刺激下的核转位具有抑制作用。结论活化的Akt1可能通过抑制AIF在凋亡信号刺激下的核转位过程而发挥其抗凋亡活性。
- 李围杨晓明
- 关键词：蛋白激酶B凋亡诱导因子
- Akt1蛋白质复合体的纯化鉴定及其相互作用蛋白质的功能研究
- 系统研究特定信号转导通路网络及其动态变化过程是全面揭示该网络调控和作用机制的关键，也是目前组学研究的热点之一。胰岛素信号转导通路网络相对简单，具有调节胞内物质代谢和细胞生长的重要功能，通过研究其中重要分子在信号转导过程中...
- 李围
- 关键词：胰岛素信号转导通路AKT1蛋白质复合体串联亲和纯化质谱
- 文献传递
- 激酶调控PKB/Akt活性的机制被引量：5
- 2007年
- PKB/Akt是胞内信号转导通路网络的中心分子。活化的PKB参与多种生物学效应的调控过程,调控PKB活性作用机制的研究一直是信号转导通路领域的难点。新近的研究结果确定了若干新的调控PKB活性的激酶,从多方面解释了PKB活化和作用的分子机制。其中mTORC2、ATM和DNA-PK均通过磷酸化PKB的Ser473位点以依赖于PI3K的方式全面活化PKB;此外,其它以不依赖PI3K的方式调控PKB活性的激酶包括,RET/PTC通过磷酸化PKB的Tyr315位点、JNK通过磷酸化PKB的Thr450位点以及CK2通过磷酸化PKB的Ser129位点活化PKB,Brk通过磷酸化PKB的Tyr474位点以及GRK2均可通过磷酸化PKB抑制其活性。
- 李围杨晓明
- 关键词：蛋白激酶B信号转导
- NLK通过Smad4负调控TGFβ信号通路
- 2014年
- 目的探讨NLK对转化生长因子β(TGFβ)信号通路的影响及其分子机制。方法采用蛋白质稳定性实验检测NLK对Smad4蛋白质降解的影响;体内泛素化实验检测过表达NLK对Smad4泛素化修饰的影响;荧光素酶报告基因实验检测NLK对TGFβ信号通路报告基因载体CAGA-luc和3TP-luc的影响;实时定量PCR技术检测NLK对TGFβ信号通路靶基因p21和PAI-1的影响。结果在HEK293T细胞内,过表达NLK促进Smad4的降解和泛素化修饰;在HEK293T细胞内过表达NLK抑制细胞因子TGFβ对CAGA-luc和3TP-luc的激活作用;在HepG2细胞内过表达NLK抑制TGFβ信号通路靶基因p21和PAI-1的表达。结论 NLK促进Smad4的泛素化修饰和降解,进而抑制TGFβ信号通路。
- 张力民詹轶群李围杨晓明
- 关键词：信号通路
- HNF1α与14-3-3ξ相互作用的分子机制及其生物学意义研究
- HNF1α是维系肝脏正常表型与生理功能的重要转录因子,在发挥转录调控功能的过程中,需要募集多种辅助因子协同作用,采用免疫共沉淀级联质谱策略(Co-IP-MS)对HNF1α的相互作用分子进行研究,获得了18个可信度较高的H...
- 于淼李长燕詹轶群许望翔李围王治东葛常辉杨晓明
- 关键词：转录调控蛋白质相互作用
- 文献传递
- NLK以激酶非依赖的方式抑制Smad4的转录活性
- 2014年
- 目的验证Nemo样激酶(NLK)与Smad4之间的相互作用并探讨NLK对Smad4功能的影响。方法应用免疫共沉淀和谷胱甘肽硫基转移酶(GST)沉降技术检测NLK与Smad4之间相互作用,GST沉降技术确定Smad4与NLK相互作用的结构域,荧光素酶报告基因实验检测NLK及NLK激酶活性突变体-NLK(KM)对Smad4转录活性的影响,体内磷酸化实验检测NLK对Smad4磷酸化的影响。结果免疫共沉淀和GST沉降的结果显示,NLK与Smad4在体内和体外存在相互作用。GST沉降的结果显示Smad4通过MH2结构域与NLK结合。荧光素酶报告基因实验的结果显示,NLK和NLK(KM)均可抑制Smad4的转录活性,且抑制程度相同。体内磷酸化的结果显示,NLK不能磷酸化Smad4。结论 NLK与Smad4相互作用,以激酶非依赖的方式抑制Smad4的转录活性,NLK抑制Smad4的分子机制有待进一步探讨。
- 张力民李围杨晓明
- 关键词：蛋白激酶SMAD4转录活性
