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杨秋峰: 作品数：11 被引量：23H指数：3; 供职机构：上海市农业科学院更多>>; 发文基金：上海市科委重大科技攻关项目江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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猪流感病毒多表位抗原表达载体构建与表达: 根据猪流感病毒血凝素蛋白基因(HA)、神经氨酸蛋白基因(NA)核苷酸序列,用软件分析筛选针对HA、NA蛋白氨基酸序列的主要表位多肽4个,将4个片段以接头串联成模拟蛋白,核苷酸为290bp,体外扩增该模拟蛋白基因,插入到原...; 刘惠莉邢继兰杨秋峰潘洁饶柏忠; 关键词：猪流感病毒原核表达; 文献传递

多重RT-PCR检测猪流感病毒及血清亚型被引量：9: 2008年; 根据GenBank登录的猪流感病毒各血清亚型NP基因,H1、H3亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因核苷酸序列,经DNAstar软件类比选择保守区设计引物,sPCR筛选出引物对,用于扩增猪流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亚型、神经氨酸酶N1/N2亚型基因片段。根据NP、H1N1、H3N2亚型引物扩增片段大小和反应条件的差异,将各引物配比组合,形成引物组合,建立多重RT-PCR体系。经对不同亚型模板的扩增、检验,建立的2个多重RT-PCR体系可用于猪流感病毒及H1/H3血凝素亚型、N1/N2神经氨酸酶亚型的快速鉴别、诊断。特异性试验检测多重RT-PCR不能扩增其他猪病毒核酸,核酸的最低检测量达0.2ng。采集临床具有呼吸道症状的猪肺、鼻腔棉试子等85份,与鸡胚分离及血凝/血凝抑制试验比较,阴性样品检测符合率达100%。; 刘惠莉周宗清邢继兰潘洁杨秋峰饶柏忠; 关键词：猪流感病毒

嗜热四膜虫——具有发展潜力的功能基因组学研究模型被引量：3: 2006年; 在真核生物的分子生物学和遗传学研究方面,纤毛类原生动物嗜热四膜虫(Tetrahymenathermophila)已经被证明是一种有价值的生物学模型。通过对它的研究,人们发现并且掌握了核酶的分子机制、RNA的自我拼接、端粒的结构和功能、DNA序列重组等机理。这种原生动物的基因组功能分别由两个细胞核执行,即二倍体的小核与生殖过程有关,而多倍体的大核决定细胞的基因转录,并为转化基因的表达提供了强有力的手段。; 杨秋峰刘永杰; 关键词：嗜热四膜虫功能基因组学

四膜虫基因打靶载体的构建及其在虫体内的转化被引量：1: 2007年; 【目的】构建一个适于嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)的基因打靶载体,并分析转化四膜虫的特性。【方法】以嗜热四膜虫组蛋白H4-I基因作为启动子,利用H4-I基因的5′和3′侧翼区作为同源臂,并且保留H4-I基因编码区的起始密码子ATG和终止密码子TGA,中间嵌入巴龙霉素抗性标记基因neo,从而构建一个基因打靶载体。将该载体电击转化到嗜热四膜虫接合株体内,使其同源重组到四膜虫H4-I基因上。通过巴龙霉素抗性筛选、PCR扩增目的基因对抗性虫株进行鉴定。光学和电子显微镜观察抗性虫株形态变化。【结果】成功构建了一个适于嗜热四膜虫的基因打靶载体,将其电击转化到四膜虫体内,抗性虫株的生长速度明显高于普通四膜虫,显微镜观察抗性虫株形态变小,大约是正常形态的1/20～1/30,抗性虫株表面光滑,未见纤毛。【结论】利用基因打靶载体将neo基因定向整合到四膜虫H4-Ⅰ基因内部,为今后在嗜热四膜虫体内表达外源蛋白奠定了基础。; 杨秋峰蒋蔚刘永杰陆承平; 关键词：嗜热四膜虫 NEO 同源重组

四膜虫基因打靶载体的构建及其在虫体内的定向整合和基因表达: 纤毛类原生动物嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)是一种有价值的分子生物学和遗传学研究模型。通过对它的研究，人们发现并且掌握了核酶的分子机制、RNA的自我拼接、端粒的结构和功能、DNA序列重组等机...; 杨秋峰; 关键词：嗜热四膜虫基因表达; 文献传递

猪流感监测、诊断技术研究: 刘惠莉童光志潘洁赵艳敏张春玲邢继兰周艳君饶柏忠王英崔尚金杨秋峰仇华吉田志军; 采用重组表达蛋白为抗原，建立监测猪流感病毒血清抗体的间接ELISA方法，用于猪流感病毒感染的血清学检测。针对猪流感病毒不同血清亚型，筛选到型保守序列，建立针对不同血清亚型保守区的扩增体系，组建多重RT-PCR体系，可同时...; 关键词：; 关键词：猪流感病毒

一种检测猪流感病毒及血清亚型的引物集及其试剂盒: 本发明公开了一种引物集，它包括流感病毒通用型NP基因的引物对和SIV亚型的引物对。所述的引物集可制得一种RT－PCR检测试剂盒，所述的试剂盒可用于猪流感病毒(SIV)H1/H3、N1/N2血清亚型的鉴别，而且可检测到样品...; 刘惠莉邢继兰周宗清杨秋峰潘洁饶柏忠; 文献传递

猪流感病毒抗原表位基因表达载体构建与免疫原性分析被引量：7: 2008年; 根据猪流感病毒血凝素蛋白基因(Heamuglutinine,HA)的核苷酸序列,设计、筛选HA蛋白氨基酸序列的主要表位多肽4个,将4个片段以柔性连接串联成模拟蛋白,核苷酸约为300 bp,体外扩增该模拟蛋白基因,插入到原核表达载体pET30a(+)中,转染宿主菌诱导表达,结果获得分子量为20 kD的表达蛋白,该蛋白可与抗His-tag抗体、抗猪流感病毒H1N1、H3N2亚型高免血清发生免疫学反应。纯化后免疫小鼠,ELISA及血凝抑制(Heamuglutinine inhibitor,HI)试验检测,小鼠产生针对多肽抗原的血清抗体,同时还可检测到H1N1、H3N2亚型SIV血凝抗体。流氏细胞仪检测免疫组外周血淋巴细胞高于对照组,说明该模拟蛋白具有与H1N1、H3N2亚型猪流感病毒相似的免疫原性及反应原性,为H1N1、H3N2血清亚型猪流感病毒疫苗研制提供了新手段。; 刘惠莉邢继兰潘洁杨秋峰赵艳敏; 关键词：猪流感病毒抗原表位新型疫苗

牛肠毒素性产气荚膜梭菌的分离及鉴定被引量：2: 2005年; 对黑龙江省3个地区牛场疫牛进行临床诊断,剖检结果为小肠出血性肠炎和心内外膜严重出血等症状,进行了细菌的分离培养、涂片镜检、生化试验和动物感染试验。结果表明:分离菌株均为革兰氏阳性粗短杆菌,严格厌氧,在血平板上具有双溶血环,能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和暴酵牛乳,肠毒素检测试验阳性,厌气肉肝汤培养物0.2mL小白鼠尾静脉注射,2～10h可使其致死。试验结果表明3个分离株均为产气荚膜梭菌。; 邵红王铁林王久星王玉海李冬野杨秋峰王术德朱战波