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杨秋林

作品数：58 被引量：232H指数：9
供职机构：南华大学医学院更多>>
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合作作者

文献类型

  • 57篇期刊文章
  • 1篇科技成果

领域

  • 56篇医药卫生
  • 1篇农业科学
  • 1篇文化科学

主题

  • 22篇吸虫
  • 21篇血吸虫
  • 21篇日本血吸虫
  • 14篇弓形虫
  • 12篇基因
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机构

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作者

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  • 15篇刘传爱
  • 13篇伍和平
  • 13篇王可耕
  • 13篇梁瑜
  • 13篇许丽芳
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  • 5篇杨胜
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  • 4篇万艳平
  • 4篇黄家芳
  • 4篇周支香

传媒

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  • 4篇实用预防医学
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  • 3篇中国寄生虫病...
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  • 2篇中国人兽共患...
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  • 1篇中华传染病杂...
  • 1篇病毒学报

年份

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  • 3篇2011
  • 2篇2010
  • 3篇2009
  • 8篇2008
  • 6篇2007
  • 6篇2006
  • 6篇2005
  • 15篇2004
  • 3篇2003
  • 1篇2002
共 58 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
应用环介导等温扩增技术检测弓形虫被引量：25
2008年
目的用环介导等温扩增(LAMP)技术检测弓形虫。方法用酚-氯仿法提取弓形虫速殖子基因组DNA,设计两对扩增弓形虫B1基因的LAMP引物。以间日疟原虫、恶性疟原虫、卡氏肺孢子虫、日本血吸虫及小鼠白细胞作对照,进行LAMP反应,产物经SYBRGreenI显色及电泳后观察结果,绿色判为阳性,棕色判为阴性。将弓形虫速殖子经倍比稀释为(2～3)×106个/ml至(2～3)×10-1个/ml等8个浓度,进行LAMP反应,验证该方法的敏感性。结果LAMP反应结果显示,弓形虫速殖子检测管经显色后呈绿色,对照组均呈棕色。弓形虫的LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,对照组均无扩增产物。LAMP技术可检测到的弓形虫速殖子最低浓度为2～3个/ml。结论LAMP技术在弓形虫检测中显示出较好的特异性与敏感性。
杨秋林张如胜伍和平张愉快王可耕
关键词：弓形虫环介导等温扩增技术
四种纯化弓形虫速殖子方法对虫体RNA影响的比较被引量：7
2006年
目的比较纯化弓形虫速殖子的四种方法对虫体RNA的影响。方法以2.0×105个速殖子腹腔接种于昆明小鼠,72h后收集小鼠腹腔液,以胰蛋白酶消化法、微孔滤膜过滤法、G3滤斗和CF-11纤维素柱法纯化弓形虫速殖子,用AGPC法抽提总RNA,用甲醛变性胶电泳检测总RNA。结果胰蛋白酶消化法虫体回收率最大,但时间长,易造成RNA降解;微孔滤膜过滤法回收率低;G3滤斗纯度不高;CF-11纤维素柱法快速简单、纯度高,对RNA无影响。结论微孔滤膜过滤法、CF-11纤维素柱法对虫体RNA的影响小,较适用于cDNA文库构建时虫体的分离纯化。
杨秋林许丽芳伍和平
关键词：弓形虫病
SjESG-2A锤头状核酶表达载体构建及其抗日本血吸虫虫卵发育研究
2008年
目的设计并合成日本血吸虫中国大陆株卵壳蛋白基因2A(eggshell protein gene 2A,ESG-2A)的特异性锤头状核酶并构建真核表达载体。探讨其在BALB/c小鼠体内的抗日本血吸虫虫卵发育作用。方法运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ),将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,采用双酶切、琼脂糖凝胶电泳及DNA序列测定方法鉴定阳性克隆。以日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠,建立动物模型。大量抽提阳性重组子,分别在小鼠感染时、感染后2w、感染后4w,将其经后腿胫前肌免疫BALB/c小鼠,共3次。小鼠感染6w后计数成虫负荷及肝组织虫卵数。ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞培养上清IFN-γ和IL-4的水平。结果经酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA3.1(+)的XbaI和EcoR I酶切位点之间,命名为pcRz-ESG-2A。在核酶组,IFN-γ的水平呈上升趋势,IL-4的水平呈先上升后下降;在空载体组和生理盐水组,IFN-γ的水平呈上升趋势,IL-4的水平也呈上升趋势。核酶组免疫BALB/c小鼠能诱生减虫率25.64%和减卵率44.21%。结论成功合成SjESG-2A特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体。核酶在已感染日本血吸虫尾蚴的BALB/c小鼠体内具有抗日本血吸虫虫卵发育的作用。
胡永轩周月兰肖建华杨秋林黄家芳
关键词：锤头状核酶
日本血吸虫7个基因全长cDNA的获取和分析
2004年
目的　从日本血吸虫成虫cDNA文库中分离、鉴定和分析全长cDNA序列 ,为日本血吸虫病的防治提供候选疫苗和药物靶点。方法　从构建日本血吸虫成虫cDNA文库中挑取重组阳性克隆进行 5’测序获取表达序列标签 (ExpressedSe quenceTag ,EST) ,在此基础上进行引物延伸法 (primerextension)测序 ,直至获取全长cDNA序列 ,将获取的基因登录Gen Bank ,并进行生物信息学分析。结果　获得 7个日本血吸虫全长cDNA序列 (GenBank登录号分别为AY336 4 93～AY336 4 99) ,其中 6个为日本血吸虫新基因 :类转录因子BTF3(similartotranscriptionfactorBTF3)、延长因子 1-α(elongationfactor 1-alpha ,EF1-α)、富含谷氨酰胺四联重复肽 (smallglutamine-richtetratricopeptide ,TRP)、鸟氨酸氨基转移酶 (ornithineaminotransferase,OA)、内皮差异相关因子 1(endothelialdifferentiation -relatedfactor 1,EDF - 1)和类基因转录增强因子 (similartotestisenhancedgenetranscriptprotein ,TEGT) ;另 1个是精氨酸酶 (arginase)基因 ,比原发现的基因序列长 4 5 6bp。生物信息学分析发现类基因转录增强因子为跨膜蛋白 ,具有 6个跨膜区 ;各基因与人、鼠、蟾和曼氏血吸虫等物种的基因有 37%～ 85 %的同源性 ;
曾桥肖建华万志刚张愉快廖力刘传爱杨秋林
关键词：日本血吸虫CDNA文库基因生物信息学
弓形虫昆山分离株P30蛋白的纯化、复性和鉴定被引量：3
2008年
目的表达并纯化弓形虫昆山分离株膜蛋白P30。方法将构建的pET28b-P30重组质粒转入大肠埃希菌BL21,挑重组菌于LB培养基中增菌,IPTG诱导其表达,然后纯化包涵体,用尿素溶解包涵体,Ni2+螯合柱纯化产物,以透析法复性蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果大肠埃希菌表达的P30蛋白以包涵体的形式存在,P30蛋白经Ni2+螯合柱纯化后纯度大于95%。经Western blot鉴定,复性蛋白能被弓形虫感染的鼠血清识别。结论得到了纯度高的膜蛋白P30。
周月兰蔡亮王际平肖建华杨秋林
关键词：P30纯化复性
Sjcb2 DNA疫苗的构建及其在HeLa细胞中的表达被引量：5
2006年
构建日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶基因核酸疫苗,PCR、双酶切和DNA序列鉴定后,运用电穿孔技术将重组体pcDNA3.1(+)/Sjcb2转染Hela细胞,免疫细胞化学检测其能在HeLa细胞浆内表达,为抗日本血吸虫核酸疫苗的研制打基础。
胡永轩肖建华黄家芳杨秋林
关键词：日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗真核表达
卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型的建立被引量：3
2010年
目的采用SD大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎(Pneumocystis Carinii pneumonia,PCP)动物模型。方法 20只SD大鼠随机分成实验组和对照组。实验组皮下注射地塞米松2.5 mg/只,每周2次,对照组不给药。8周后,分别取肺组织,印片,Giemsa染色检查卡氏肺孢子虫滋养体和包囊。酚氯仿法提取大鼠肺组织DNA,LAMP法扩增卡氏肺孢子虫DNA。结果诱导后24 d大鼠出现死亡,28 d检获PC,32 d感染阳性率为86%(13/15);LAMP扩增出卡氏肺孢子虫特异DNA。结论成功诱导SD大鼠的PCP模型。
彭丁晋姜华周支香杨秋林
关键词：卡氏肺孢子虫SD大鼠动物模型
弓形虫RH株膜蛋白P30的原核表达与鉴定被引量：3
2006年
目的在E.coli中表达弓形虫RH株膜蛋白P30。方法将P30基因定向克隆到pET28b,构建含目的基因的pET28b-P30重组质粒,转化E.coliBL21(DE3),接种含pET28b-P30的BL21(DE3)单菌落于LB培养基,1∶100稀释后用0.2mmol/L的IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot鉴定诱导表达产物。结果1构建了重组质粒pET28b-P30,2在E.coli中表达了一分子量约为30kDa的融合蛋白,经Westernblot鉴定正确。结论在E.coli中高效表达了弓形虫RH株膜蛋白P30,并以包涵体形式存在。
蔡亮杨秋林伍和平刘传爱王可耕张愉快
关键词：弓形虫表面抗原P30
Sjcb2基因原核表达载体的构建及表达
2006年
目的探讨日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)中国大陆株(Chinese strain)组织蛋白酶B肽链内切酶基因(Cathepsin B endopeptidase)的原核表达载体pWR450-1的构建及表达情况。方法根据Genbank中Cathepsin B en-dopeptidase全序列(Genbank登录号为AY226984)设计特异性引物应用聚合酶链反应技术扩增基因全长,克隆入pUCm-T载体,酶切后亚克隆入原核表达载体pWR450-1并进行表达;利用SDS-PAGE及Western blotting观察日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶表达情况。结果成功构建了Sjcb2/pWR450-1原核表达重组质粒,该重组质粒在大肠杆菌中可经IPTG诱导表达分子量约为86kD的融合蛋白,Western blotting分析表明,该融合蛋白能被兔阳性血清所识别。结论日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶可在原核表达载体pWR450-1中表达,为研究其功能打下了必要的基础。
胡永轩肖建华杨秋林黄家芳
关键词：原核表达
环介导等温扩增技术检测卡氏肺孢子虫的研究被引量：26
2008年
目的环介导等温扩增（LAMP）技术检测卡氏肺孢子虫（Pc）。方法醋酸可的松经皮下注射Wistar大鼠诱导Pc，收集支气管肺泡灌洗液（BALF）提取Pc基因组DNA。设计4条扩增Pc线粒体核糖体大亚基（mtrRNA）基因的LAMP引物，以结核杆菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、弓形虫、大鼠白细胞为对照，进行LAMP反应。LAMP产物经显色、电泳及酶切鉴定。将Pc DNA10倍稀释后同时进行LAMP和PCR，比较其敏感性。结果Pc检测管经显色后呈绿色（阳性），对照组均呈棕色（阴性）。Pc LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带，扩增产物经Tail限制性内切酶酶切鉴定正确，对照组均无扩增产物。LAMP可检测到虫体DNA的最低浓度是1pg／μl，为PCR的10倍。结论检测Pc的LAMP方法敏感、特异及简便。
杨秋林张如胜伍和平王可耕张愉快
关键词：卡氏肺孢子虫环介导等温扩增技术
全选 清除 导出
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