杨铭
- 作品数：90 被引量：161H指数：7
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 含笑内酯对卵巢上皮性癌细胞的作用及其机制被引量：2
- 2016年
- 目的：探讨含笑内酯对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞的作用及其可能的机制。方法（1）不同浓度（分别为0.25、0.5、1、2.5、5、10、20、50μmol/L）含笑内酯作用卵巢癌细胞系HeyA8、SKOV3细胞及卵巢癌顺铂耐药细胞系A2780/DDP细胞72 h后，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测3种卵巢癌细胞的生长情况，选择抑制作用最为显著的卵巢癌细胞（即HeyA8细胞）用于后续实验。（2）不同浓度（分别为5、10、20μmol/L）含笑内酯作用24 h后，流式细胞仪检测HeyA8细胞的凋亡情况，实时荧光定量PCR技术检测HeyA8细胞中RelA mRNA的表达，蛋白印迹（western blot）法检测HeyA8细胞中核因子κB（NF-κB）信号通路相关蛋白RelA和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9（caspase-9）的表达。结果（1）不同浓度含笑内酯作用72 h后，HeyA8、SKOV3及A2780/DDP细胞的生长均受到明显抑制，且均呈显著的浓度依赖性（P〈0.05）；其50％抑制浓度（IC50）分别为（9.8±2.2）、（12.0±2.1）、（12.8±1.8）μmol/L。选用抑制效果最佳的HeyA8细胞进行后续实验。（2）不同浓度含笑内酯作用24 h后，随着含笑内酯浓度的增高，HeyA8细胞的细胞凋亡比例增高，细胞存活比例下降，细胞中RelA mRNA的表达水平下降，当含笑内酯浓度为20μmol/L时，上述指标分别与其对照（仅加入溶剂者）比较，差异均有统计学意义（P〈0.01）；HeyA8细胞中RelA蛋白的表达强度逐渐减弱，而活化caspase-9蛋白的表达强度逐渐增强。结论含笑内酯对卵巢癌HeyA8、SKOV3及A2780/DDP细胞均有显著的抑制作用，且对HeyA8细胞的抑制作用最明显；其作用机制可能是通过抑制NF-кB信号通路、诱导活化caspase-9蛋白的表达来促进卵巢癌HeyA8细胞的凋亡。
- 齐政李迎辉丁亚辉纪庆杨铭高瀛岱
- 关键词：卵巢肿瘤NF-ΚB
- 人黑色素瘤肺转移模型的建立
- 目的:建立人黑色素瘤的肺转移模型,为人黑色素瘤肺转移的机理和治疗研究奠定基础。方法:通过含10%胎牛血清的IMDM培养基体外培养扩增人黑色素瘤细胞系M21细胞,取对数生长期的细胞,经消化和洗涤后用PBS重悬,调整细胞浓度...
- 张永慈周圆杨铭熊冬生杨纯正
- 关键词：黑色素瘤裸鼠肺转移
- 文献传递
- 基因工程融合蛋白抗CD19(Fab)-LDM的制备及生物学活性研究
- 目的构建及表达抗CD19(Fab)-LDP(LDM辅基蛋白)重组嵌合抗体,制备强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM,进行体外生物活性的研究。方法采用基因克隆技术,构建基因重组质粒pAZYanti-CD19(F...
- 姜琳琳曹善楠范冬梅杨铭熊冬生
- 关键词：CD19力达霉素B淋巴瘤基因工程抗体
- 人4-1BBL胞外区的克隆及应用
- 常规化疗和放疗选择性差，肿瘤细胞不能被完全清除。残存的肿瘤细胞，即微小的残留灶，造成治疗失败或者肿瘤复发，成为免疫治疗的靶标。已经有许多表达在恶性细胞上的肿瘤相关抗原被证实。其中CD20主要表达在前B细胞和成熟B细胞及9...
- 姜文国熊冬生邵晓枫王金宏范冬梅杨铭纪庆许元富杨纯正
- 关键词：抗肿瘤免疫T细胞靶向治疗
- 微型双功能抗体介导人T细胞杀伤耐药实体瘤细胞被引量：4
- 2005年
- 目的探讨抗P-糖蛋白(P-gp)/抗CD3微型双功能抗体介导人T细胞杀伤耐药实体瘤细胞的作用。方法采用抗E-tag亲和层析柱分离纯化抗P-gp/抗CD3微型双功能抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;采用51Cr释放实验,测定抗P-gp/抗CD3微型双功能抗体介导的人T细胞体外靶向杀伤活性;采用多药耐药(MDR)细胞系KB/MDR、敏感KB细胞裸鼠移植瘤模型,测定该微型双功能抗体介导的体内靶向杀伤活性。结果纯化的抗P-gp/抗CD3微型双功能抗体,在相对分子质量28 000和26 000处各有1条蛋白带。在抗P-gp/抗CD3微型双功能抗体存在的情况下,激活的T淋巴细胞能够裂解KB/MDR细胞,且随着效靶比的增高而增高。抗P-gp/抗CD3微型双功能抗体联合人T淋巴细胞能有效抑制KB/MDR细胞裸鼠移植瘤的生长,而对敏感KB细胞移植瘤的生长无抑制作用。结论抗P-gp/抗CD3微型双功能抗体在体内`外均能介导人T淋巴细胞杀伤表达P-gp抗原的KB/MDR细胞,是有望用于耐药实体瘤临床治疗的双特异性抗体。
- 高瀛岱熊冬生杨铭许元富邵晓枫彭晖范冬梅杨纯正
- 关键词：CD3P-糖蛋白双特异性抗体
- NBS法标记抗CD20F(ab’)_2条件的研究被引量：1
- 2004年
- 目的 :探讨NBS法标记抗CD2 0F(ab’) 2 的最优条件。方法 :其它条件固定时 ,依次改变反应时间、NBS用量、反应温度、反应体积 ,进行标记后将反应混合物经PD - 1 0柱淋洗 ,收集蛋白峰 ,测定放射性计数 ,计算标记率和免疫活性分数。结果 :反应时间在 2min之前 ,标记率随时间延长而提高 ,2min后出现平台 ,3min达最大值 ,活性在 3min之前变化不大 ,之后明显降低 ;NBS/F(ab’) 2 在 1 6时标记率最高 ,1 4之后活性急剧下降 ;温度对标记率和活性的影响不明显 ;小体积反应有利于提高标记率。结论 :反应时间为 3min ,NBS/F(ab’) 2 为1 6 。
- 许元生熊冬生范冬梅杨铭刘汉芝王金宏王彩云纪庆杨纯正
- 双功能抗体抗CD3／抗CD19介导T细胞对靶细胞的杀伤作用被引量：3
- 2011年
- 背景与目的:双功能抗体有2个抗原结合臂,一方面具有肿瘤相关抗原,另一方面具有和免疫效应细胞表面分子标记结合的能力,并能有效地使效应细胞靶向杀灭肿瘤细胞的作用。本实验探讨抗CD3/抗CD19双功能抗体介导T细胞杀伤靶细胞的作用。方法:利用非放射性荧光染料Calcein-AM进行抗体介导的体外特异性杀伤活性检测,Ficoll-Hypaque法分离外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL),流式细胞术从中分选T淋巴细胞及CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞作为效应细胞。首先以Raji细胞为靶细胞,按不同效靶比,不同抗体浓度分组,以PBS、抗CD3scFv+、抗CD3scFv抗体及非相关抗体抗CD3/抗PGP为对照,另设CD19-K562细胞为非相关靶细胞组,比较双功能抗体介导特异性体外杀伤活性。取上述杀伤实验效靶比25∶1,抗体浓度500 ng/mL各组,ELISA法比较激活的T细胞分泌IL-2的量,Real-time PCR法检测T细胞因子IL-3、IFN-γ、TNF-α激活后的表达变化。结果:体外介导T细胞杀伤靶细胞Raji的效果比对照组明显增强(P<0.05),激活T细胞分泌IL-2、IL-3、IFN-γ及TNF-α的表达均明显高于对照组。结论:双功能抗体抗CD3/抗CD19在体外介导T细胞对靶细胞具有较强的杀伤作用。
- 范冬梅李崴杨铭赵英新许元富陈礼平王敏
- 关键词：双功能抗体CD3CD19
- 血液肿瘤耐药机制及克服耐药研究被引量：1
- 2005年
- 肿瘤细胞对多种化疗药物产生交叉耐药性,称多药耐药(multidrug resistance,MDR)是造成肿瘤化疗失败的主要原因.有关资料统计,肿瘤年病死率中,属内在性多药耐药(intrinsic MDR)的肿瘤,包括消化器官的胃癌,肠癌,肝癌等,呼吸系统的肺癌,泌尿系统的肾癌以及大脑和中枢神经系统肿瘤约占61%,属获得性多药耐药(acquired MDR)的肿瘤,包括皮肤癌,乳腺癌,生殖器癌,内分泌肿瘤,白血病和淋巴瘤,约占33%.这就是说90%以上肿瘤患者死因都与耐药有关.另一方面,肿瘤新药的出现也常常伴随着耐药的出现,如紫杉醇和Gleevec(STI-571),这就使问题更加严重.因此逆转MDR成为肿瘤治疗亟待解决的问题.
- 杨纯正熊冬生许元富齐静高赢岱谭耀红邵晓枫杨铭范冬梅薛艳萍刘汉芝
- 关键词：耐药研究耐药机制血液肿瘤获得性多药耐药交叉耐药性年病死率
- DNA甲基化在成人ITP发病机制中的作用研究
- 目的:从表观遗传学角度探讨成人 ITP 的发病机制,为 ITP 的防治提供新的理论依据。方法:应用 SYBR Green 实时定量 PCR 方法检测48 名 ITP 患者与36名正常对照的外周血单个核细胞 DNA 甲基转...
- 陶洁杨铭陈钟黄颖赵钦军许剑辉任贺任倩杨仁池
- 文献传递
- 抗Pgp/抗CD3微型双功能抗体裸鼠体内分布研究被引量：5
- 2004年
- 杨铭高瀛岱熊冬生刘汉芝邵晓枫许元富彭晖杨纯正
- 关键词：双功能抗体免疫效应细胞CD3裸鼠
