范晓娟
- 作品数：16 被引量：60H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 一种检测犬细小病毒的LAMP试剂盒
- 本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种检测犬细小病毒的LAMP试剂盒，所述试剂盒包含有六条LAMP引物，与LAMP反应液一起构成检测体系。该试剂盒可快速、灵敏地检测目前流行的各种犬细小病毒毒株，其操作简单、成本低廉，反应...
- 李刚张坤范晓娟
- 文献传递
- 检测猪圆环病毒2型抗体SPA胶体金免疫层析方法的建立
- 本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，并将其标记SPA，将金标SPA包被至玻璃纤维膜上，将PCV-2 Cap蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上，建立了一种检测PCV-2抗体的胶体金免疫层析方法...
- 范晓娟李刚史利军张锦秀李伟
- 关键词：猪圆环病毒病毒感染免疫学检验抗体测定
- 文献传递
- 检测猪圆环病毒2型抗体SPA胶体金免疫层析方法的建立
- 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并将其标记SPA,将金标SPA包被至玻璃纤维膜上,将PCV-2 Cap蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤堆素膜的检测线与质控线上,建立了一种检测PCV-2抗体的胶体金免疫层析方法。检测...
- 范晓娟李刚史利军张锦秀李伟
- 关键词：猪圆环病毒2型胶体金免疫层析抗体检测葡萄球菌蛋白A
- 文献传递
- 一种用于检测犬、猫的狂犬病毒抗体的胶体金试纸卡及其制备方法和应用
- 本发明涉及一种用于检测犬、猫狂犬病病毒抗体的胶体金试纸卡，通过在硝酸纤维素膜上同时包被狂犬病病毒相关抗原、金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)抗体两个条带，并采用胶体金标记SPA，得到了一种通用型检测试纸卡，应用免疫层析原理检...
- 李刚范晓娟张坤
- 快速检测小反刍兽疫病毒RT-LAMP方法的建立被引量：25
- 2009年
- 本研究采用一步法反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)建立了一种快速、灵敏、高度特异的检测小反刍兽疫病毒(PPRV)的方法。针对PPRV-N基因保守区域设计4条引物,在Bst大片段聚合酶的作用下,可以实现DNA的梯状等温扩增。优化RT-LAMP的反应体系,并检验其灵敏性、特异性。一步法RT-LAMP检测方法从核酸抽提到检测结果出现仅需70 min,该方法具有良好的特异性,与同属的犬瘟热病毒无交叉反应,灵敏度是RT-PCR的1 000倍,是巢式RT-PCR的100倍。结果证明,RT-LAMP方法可快速、灵敏、特异、经济地检测PPRV,在基层和实验室都具有良好的应用前景。
- 李伟李刚范晓娟张坤贾风琴史利军Hermann Unger
- 关键词：小反刍兽疫病毒核酸检测
- 检测猪圆环病毒2型抗体SPA胶体金免疫层析方法的建立
- 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并将其标记SPA,将金标SPA包被至玻璃纤维膜上,将PCV-2 Cap蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了一种检测PCV-2抗体的胶体金免疫层析方法。检测...
- 范晓娟李刚史利军张锦秀李伟
- 关键词：猪圆环病毒2型胶体金免疫层析法葡萄球菌蛋白A抗体检测
- 文献传递
- 狂犬病病毒糖蛋白在Bac-to-bac杆状病毒系统中的表达及应用被引量：2
- 2011年
- 为表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G),本研究通过RT-PCR方法克隆RVFluryLEP病毒株G基因,将其克隆至质粒pFastBacHTα中,重组质粒pFastBac-RV-G转化DH10Bac感受态细胞,经同源重组获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-RV-G,将其转染昆虫细胞sf21获得含有G基因的重组杆状病毒。采用SDS-PAGE和westernblot对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析,以重组G蛋白作为包被抗原的ELISA检测36份犬血清样品。结果表明,在Bac-to-bac杆状病毒系统中表达的RVG蛋白能与his-tag单克隆抗体及RV阳性血清发生特异性反应,其相对分子量为60ku;与以RV为包被抗原的商品化ELISA试剂盒相比,以重组RVG蛋白为抗原建立的间接ELISA的敏感性、特异性和符合率分别为80%、81.8%和80.6%,表明杆状病毒系统表达的RVG蛋白是检测RV抗体的理想抗原蛋白,作为一种亚单位疫苗具有潜在的应用前景。
- 范晓娟李刚李伟曾妮宫苗苗
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒表达系统
- 一种用于检测犬、猫的狂犬病毒抗体的胶体金试纸卡及其制备方法和应用
- 本发明涉及一种用于检测犬、猫狂犬病病毒抗体的胶体金试纸卡，通过在硝酸纤维素膜上同时包被狂犬病病毒相关抗原、金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)抗体两个条带，并采用胶体金标记SPA，得到了一种通用型检测试纸卡，应用免疫层析原理检...
- 李刚范晓娟张坤
- 文献传递
- 犬和猫狂犬病病毒抗体SPA-ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2010年
- 采用RT-PCR方法扩增狂犬病病毒(RV)FluryLEP毒株N基因,将该片段克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,测序验证后将阳性重组质粒转化至宿主菌E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,RVN蛋白以包涵体形式表达,大小约为70ku,且该重组N蛋白具有良好的反应原性。用纯化的重组N蛋白作为诊断抗原建立了检测犬、猫RV抗体的间接ELISA方法,通过优化反应条件,确定抗原的最佳包被浓度为6μg/mL,血清最佳稀释度为1:200,SPA-HRP的最佳稀释度为1:2000。用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化ELISA试剂盒分别对30份临床血清样品进行检测,结果两者的符合率为96.67%。表明基于重组N蛋白的间接ELISA方法可用于检测犬、猫RV抗体水平。
- 范晓娟曾妮李刚
- 关键词：狂犬病病毒N蛋白原核表达酶联免疫吸附试验SPA
- 胶体金免疫层析检测犬、猫抗狂犬病病毒IgG抗体的研究被引量：5
- 2010年
- 目的建立检测犬、猫抗狂犬病病毒(RV)IgG抗体的胶体金免疫层析方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金用以标记SPA,同时将重组RVN蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,制备一种检测犬、猫抗RVIgG抗体的胶体金检测卡,进行了特异性和灵敏度试验,并与ELISA同时检测临床样品、统计结果。结果 GICA试纸条检测灵敏度为0.5IU/mL,与犬瘟热病毒、犬细小病毒等阳性血清无交叉反应,并与ELISA相比,两者的符合率为94.6%。结论成功建立了检测犬、猫抗RVIgG抗体的通用型胶体金免疫层析方法 ,该方法灵敏度高,特异性强,检测速度快,操作简便,可广泛应用于基层。
- 范晓娟李刚邱文英赵刚
- 关键词：狂犬病N蛋白胶体金免疫层析IGG抗体SPA
