李伟
- 作品数：20 被引量：75H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项引进国际先进农业科技计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 检测猪圆环病毒2型抗体SPA胶体金免疫层析方法的建立
- 本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，并将其标记SPA，将金标SPA包被至玻璃纤维膜上，将PCV-2 Cap蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上，建立了一种检测PCV-2抗体的胶体金免疫层析方法...
- 范晓娟李刚史利军张锦秀李伟
- 关键词：猪圆环病毒病毒感染免疫学检验抗体测定
- 文献传递
- 一种小反刍兽疫病毒的RT-LAMP试剂盒
- 本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种检测小反刍兽疫病毒的RT-LAMP试剂盒，所述试剂盒包含有四条LAMP引物的LAMP反应液构成的检测体系。该试剂盒可快速、灵敏地检测小反刍兽疫病毒，其操作简单、成本低廉，反应结果易于...
- 李刚李伟赫尔曼·昂格尔
- 文献传递
- 小反刍兽疫病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与初步应用被引量：4
- 2009年
- 本研究利用原核表达的小反刍兽疫病毒核衣壳(N)蛋白作为标准抗原蛋白,建立PPRV抗体检测方法,同时对建立的检测方法的相关条件进行了优化。通过优化确定抗原的最佳包被浓度为10 mg/L,血清最佳稀释度为1∶40,二抗的使用浓度为1∶200,血清及二抗的最佳反应条件为37℃孵育60 min,底物的最佳反应时间为37℃15 min。通过批内及批间重复性的评价,变异系数均小于0.1,表明本检测方法具有较高的可重复性。经过临床样品检测证明,建立的检测方法可用于临床PPRV抗体的检测。
- 贾凤芹李刚李伟史利军胡小华
- 关键词：小反刍兽疫病毒N蛋白间接酶联免疫吸附试验
- 小反刍兽疫病毒N基因重组杆状病毒的构建及间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：9
- 2010年
- 本研究旨在建立基于真核表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的诊断小反刍兽疫的间接ELISA方法。利用Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫表达系统,构建含有PPRV N基因的重组供体质粒pFastBacHTA-N,转化E.coliDH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒pBacmid-PPRV-V,转染昆虫细胞Sf21,获得含有PPRV N基因的重组杆状病毒。用重组病毒感染昆虫细胞后,SDS-PAGE鉴定出60ku左右的表达蛋白,Western blot检测该蛋白具有很好的反应原性。以重组Bacmid-PPRV-N蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。临床检测来自西藏疫区的37份山羊血清和来自青海省非疫区的92份山羊血清,与法国蒙彼利埃农学发展研究国际合作中心(CIRAD-EMVT)提供的竞争ELISA试剂盒相比较,特异性为96.2%,敏感性为100%,二者的符合率达到96.9%。结果表明本研究建立的间接ELISA方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断。
- 李伟李刚吴晓东邱文英张坤Hermann Unger
- 关键词：小反刍兽疫病毒杆状病毒昆虫细胞间接ELISA
- 小反刍兽疫病毒RT-LAMP快速检测方法的建立
- 为建立小反刍兽疫病毒(PPRV)一步法反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法，实现PPRV的早期快速诊断。针对PPRV-N基因保守区域设计4条引物，在Bst大片段聚合酶的作用下，可以实现DNA的梯状等温扩增。优化...
- 李伟李刚范晓娟张坤贾风琴史利军Hermann Unger
- 关键词：小反刍兽疫核酸检测
- 文献传递
- 小反刍兽疫病毒RT-LAMP快速检测方法的建立
- 为建立小反刍兽疫病毒（PPRV）一步法反转录环介导等温扩增（RT-LAMP）检测方法,实现PPRV的早期快速诊断。针对PPRV-N基因保守区域设计4条引物,在Bst大片段聚合酶的作用下,可以实现DNA的梯状等温扩增。优化...
- 李伟李刚范晓娟张坤贾风琴史利军Hermann Unger
- 关键词：小反刍兽疫病毒RT-LAMP核酸检测
- 文献传递
- 小反刍兽疫病毒H基因的原核表达与鉴定被引量：1
- 2009年
- 根据GenBank中已发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria75/1株的H基因序列,设计上下游引物并添加BamHⅠ酶切位点,以含有小反刍兽疫病毒H基因的Topo-PPRVH质粒为模板进行PCR扩增,扩增产物克隆于pEASY-T载体中,用BamHⅠ单酶切后将目的片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中,核酸序列分析证明,成功构建了PPRVH原核表达质粒pET-32a-H。将pET-32a-H重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达,经SDS-PAGE电泳,可见H蛋白获得了高效表达,融合蛋白的分子量约为87ku,表达产物以包涵体的形式存在,其表达量达到菌体总蛋白的38%,占包涵体蛋白的80%以上。Western blot鉴定表明,所表达的重组蛋白能被抗组氨酸单抗、抗PPRV标准阳性羊血清及抗PPRV疫苗的羊血清所识别,具有良好的免疫原性。
- 李伟李刚邱文英贾凤芹曾妮吴素丽
- 关键词：小反刍兽疫病毒H基因原核表达
- 检测猪圆环病毒2型抗体SPA胶体金免疫层析方法的建立
- 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并将其标记SPA,将金标SPA包被至玻璃纤维膜上,将PCV-2 Cap蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤堆素膜的检测线与质控线上,建立了一种检测PCV-2抗体的胶体金免疫层析方法。检测...
- 范晓娟李刚史利军张锦秀李伟
- 关键词：猪圆环病毒2型胶体金免疫层析抗体检测葡萄球菌蛋白A
- 文献传递
- 犬细小病毒VP2基因的原核表达及纯化被引量：2
- 2009年
- 参照GenBank中犬细小病毒VP2基因序列设计了一对添加EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,对CPV VP2基因进行PCR扩增,克隆至pGM-T载体,获得重组质粒pGM-T-VP2,将重组质粒亚克隆到表达载体pET-32a上,获得表达重组子pET-32a-VP2,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定后,序列分析确定该重组子YM株VP2基因ORF正确,转化至E.coli Rosetta(DE3)中,获得了基因工程菌株E.coli Rosetta(CVP2),并对重组菌进行了诱导表达,鉴定及纯化。结果表明纯化样品中含有87kDa目的蛋白,Western blot检测发现该蛋白与犬细小病毒多克隆抗体发生反应,出现特异条带。E.coli Rosetta(CVP2)以包涵体形式表达出了CPV-YM株VP2,从而为进一步制备检测抗体效价的胶体金检测试剂盒的开发研究打下了良好的基础。
- 张坤马丽娟李刚黄伟李伟贾凤琴
- 关键词：犬细小病毒原核表达纯化
- 猪病毒性免疫抑制病的危害及防控
- 近年来随着中国养猪业的发展,猪病已成为规模化养猪生产中所面临的一大难题,其重要原因在于猪群普遍存在免疫抑制性疾病。免疫抑制是指由于免疫功能系统受到损害而导致动物机体暂时性或永久性免疫应答功能不全以及对疾病的高度易感。猪病...
- 李刚史利军贾凤芹吴翠娟邱文英曾妮李伟
- 文献传递
