袁野
- 作品数：21 被引量：83H指数：6
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- 血红素加氧酶-1在脑缺血/再灌注损伤中的作用研究被引量：7
- 2008年
- 目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)表达和活性变化在脑缺血/再灌注(I/R)致脑损伤中的作用。方法♂小鼠随机分为4组,每组30只。以40g.L-1水合氯醛400mg.kg-1ip麻醉,从颈总静脉抽取并回输约40%总血量加双侧颈总动脉夹闭20min,建立脑I/R损伤模型。3组小鼠于建模前16h分别予以脑室内注射150μmol.L-1氯化正铁血红素(Hemin)、150μmol.L-1锌原卟啉Ⅸ(ZnPPIX)或人工脑脊液(ACSF)3μl/只。假手术组仅麻醉并分离暴露双侧颈总动脉和右侧颈总静脉20min。采用Westernblot法检测海马HO-1蛋白表达;分光光度计法检测海马HO活性和脑黄嘌呤氧化酶(XO)活性及丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量;TUNEL法检测海马细胞凋亡。结果Hemin组海马HO-1表达明显增强,HO活性升高,脑XO活性、MDA和ROS含量降低,海马神经元凋亡减少(vsACSF,P<0.05);ZnPPIX组海马HO-1表达无变化(vsACSF,P>0.05),HO活性降低,脑XO活性升高伴脑MDA、ROS含量增加及海马神经元凋亡增多(vsACSF,P<0.05)。结论HO-1表达升高对脑I/R致脑损伤具有保护作用,其作用机制与抗脂质过氧化和清除自由基有关。
- 袁野郭建增杨俊卿周岐新
- 关键词：血红素加氧酶-1脑损伤
- 含人过氧化物酶体增殖物激活受体δ基因高效真核表达载体的构建及其意义
- 2007年
- 目的构建高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体δ(hPPARδ)的真核表达载体,为hPPARδ受体功能和基于hPPARδ受体靶点的药物筛选提供分子研究平台。方法采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),从HepG2细胞总RNA克隆hPPARδ全长基因,与经BamHI、SalI相同双酶切的pIRES2-EGFP载体连接,构建重组质粒phPPARδ-IRES2-EGFP,经酶切及基因测序鉴定重组质粒中hPPARδ基因的完整性和忠实性;荧光显微镜观察重组质粒转染的293细胞GFP报告基因表达强度,并对转染细胞hPPARδ的表达进行荧光定量PCR和免疫细胞化学检测。结果经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的293细胞中获得hPPAR6的高效表达。结论成功构建phPPARδ-IRES2-EGFP重组质粒。
- 章涛杨贵忠袁野万敬员杨俊卿蒋建新周岐新
- 关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体Δ基因克隆真核表达逆转录-聚合酶链反应
- 脑缺血/再灌注致小鼠神经元退行性变进程中自由基水平和SOD2表达相关被引量：1
- 2011年
- 目的探讨脑缺血/再灌注(I/R)致神经元退行性变所涉及的自由基和SOD2表达的时程变化及其相互关系。方法抽取并回输约40%总血量加双侧颈总动脉夹闭20 min建立I/R损伤模型。组织学检测神经元损伤;Mor-ris水迷宫检测学习记忆能力;分光光度计法检测SOD2活性和丙二醛(MDA)含量;Western blot检测SOD2蛋白表达。结果与假手术组相比,I/R组小鼠学习记忆能力显著降低,海马MDA含量进行性显著升高(P<0.05);I/R术后5、15、30和60 d海马SOD2活性(14.69±2.49 U/mg.pro,14.15±2.41 U/mg.pro,15.07±2.67 U/mg.pro,15.55±2.64 U/mg.pro)和蛋白表达(9.20±1.23,5.40±1.03,4.90±0.92,5.60±0.59)均显著低于假手术组(P<0.05);海马出现进行性神经元核固缩加重和神经元丢失。结论 I/R致小鼠神经元退行性变与SOD2蛋白表达和活性保持低水平状态而氧化应激进行性增强有关。
- 袁野杨俊卿周岐新
- 关键词：神经元退行性变自由基
- 单胺氧化酶B在神经元退行性变模型中的意义研究被引量：3
- 2006年
- 目的:研究不同神经元退行性变动物模型中单胺氧化酶B(MAO B)活性变化,并探讨其意义。方法:NIH雄性小鼠,分别建立脑缺血再灌注、铝过负荷及一氧化碳中毒神经元退行性变模型。采用Morris水迷宫和跳台实验进行学习记忆能力测试,HE切片染色光镜下观察海马病理变化和以市售标准试剂盒测定脑匀浆MAO B活性。结果:各模型组小鼠较相应对照组学习记忆能力显著降低,海马切片可见神经元核固缩和细胞丢失等退行性改变。脑缺血再灌注模型组MAO B活性与对照组相比无显著变化,但铝中毒和一氧化碳中毒模型小鼠MAO B活性较对照组显著升高。结论:MAO B活性异常升高在各种神经元退行性变动物模型中不具有普遍性意义。脑缺血再灌注模型可能适用于痴呆研究,而一氧化碳中毒和铝过负荷模型可能适用于痴呆和锥体外系疾病研究。
- 袁野熊缨杨俊卿何百成周岐新
- 关键词：神经元退行性变动物模型单胺氧化酶B
- RNAi抑制CYP3A4基因表达的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨质粒表达型短发夹RNA(shRNA)对CHL-3A4转基因细胞的细胞色素P4503A4(CYP3A4)基因表达的影响。方法构建3条shRNA真核表达载体(CYP3A4Ⅰ、CYP3A4Ⅱ、CYP3A4Ⅲ),脂质体转染CHL-3A4转基因细胞。转染48h后,RT-PCR和Westernblotting分别观察3条shRNA对CYP3A4mRNA和蛋白表达的影响;噻唑蓝观察shRNA抑制环磷酰胺对CHL-3A4转基因细胞毒性作用。结果CYP3A4Ⅲ表达载体的shRNA分别能抑制CHL-3A4细胞的CYP3A4mRNA表达(75%)及蛋白表达(80%),抑制环磷酰胺对CHL-3A4细胞(75%)细胞毒作用。结论RNA干扰能显著抑制CYP3A4基因的表达,RNA干扰技术为肝细胞色素P450的研究提供了新的实验室方法。
- 杨贵忠余华荣袁野周岐新刘颖菊
- 关键词：RNA干扰细胞色素P450基因表达环磷酰胺
- 人PPARαLBD在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定被引量：2
- 2006年
- 过氧化物酶体增殖物活化受体α(peroxisomeprolifterator-activatedreceptorα,PPARα)属于Ⅱ型核受体,通过其配体结合区(ligandbindingdomain,LBD)结合特定的激动剂对参与机体代谢的关键酶、受体等的表达起调节作用。从人肝组织提取总RNA,RT-PCR扩增出PPARαLBD的cDNA,将其克隆入表达载体pMAL-p2X麦芽糖结合蛋白(maltosebindingprotein,MBP)编码基因malE序列的下游,重组质粒转化E·coliTB1,进行了高效的可溶性融合蛋白表达。产物经多糖亲和树脂(amylose-resin)纯化后,获得了电泳纯的MBP-PPARαLBD。MBP-PPARαLBD用Xa因子酶切,经Amylose-resin亲和层析、DE-52阴离子交换层析纯化回收,获得了电泳纯的PPARαLBD。为进一步比较MBP-PPARαLBD和PPARαLBD的功能,筛选PPARα配体奠定了基础。
- 李苌清袁野杨贵忠章涛周岐新
- 人PPARδ受体cDNA全长序列的克隆及测序
- 2007年
- 目的:对人过氧化物酶体增殖物激活受体δ(hPPARδ)全长cDNA序列进行克隆并测序,为构建含hPPAR δ基因真核表达载体及其受体功能研究奠定基础。方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从HepG2细胞总RNA克隆hPPARδ全长cDNA序列,胶回收目的条带后与pMD19-T载体连接并转化DH5α感受态菌,用BamHI、SalI双酶切及基因测序筛选、鉴定阳性克隆pMD19-hPPARδ-T载体中hPPARa基因的完整性和忠实性。结果:经酶切和测序证实pMD19-hPPARδ-T载体中插入的hPPARδ基因序列与GeneBank中提交的序列(AY919140)一致。结论:成功克隆了hPPARδ基因,构建了pMD19-hPPARδ-T中间载体,为含hPPARδ基因真核表达载体的构建和受体功能研究打下了良好的基础。
- 章涛袁野李苌清杨俊卿周元国周岐新
- 关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体ΔCDNA克隆T载体测序
- 线粒体铁蛋白通过抑制神经元铁死亡减轻新生大鼠生发基质出血后脑损伤的机制研究
- 第一部分：新生大鼠生发基质出血后内源性FTMT、NDRG1、YAP、ACSL4和TFR的表达和铁沉积水平 目的：探讨新生大鼠生发基质出血（Germinalmatrixhemorrhage，GMH）后内源性线粒体铁蛋白（...
- 袁野
- 关键词：脑损伤铁蛋白
- 血红素加氧酶-1在铝过负荷致神经元退行性变中的作用被引量：2
- 2008年
- 目的：探讨血红素加氧酶-1（HO-1）在铝过负荷致神经元退行性变中变化和意义．方法：雄性NIH小鼠75只，体质量24～26g，随机分为对照组，氯化铝低剂量组（3．75mCd）和高剂量组（7．50mg／d），每组25只．各组分别采取脑室内注射人工脑脊液、1．25g/L氯化铝溶液或2．50g/L氯化铝溶液3μL／只，1次／d，连续5d，建立神经元退行性变模型；以血红素加氧酶（HO）活性和HO-1蛋白表达与丙二醛水平，金属离子含量及海马病理形态学变化关系评价HO-1在铝过负荷致神经元退行性变中的作用．结果：与对照组相比，各氯化铝组均可见海马CA1区细胞层变薄伴明显核固缩．HO-1蛋白：氯化铝低剂量组0．24±0．01，高剂量组0．33±0．01；铁离子含量：低剂量组（31．34±2．85）mg／g，高剂量组（54．01±2．31）mg／g，均较对照组HO-1蛋白0．10±0．01，铁离子含量（22．54±4．48）mg／g显著升高，差异具有统计学意义（P〈0．05）．氯化铝高、低剂量组HO活性，丙二醛和铝粒子含量亦均较对照组显著升高，差异具有统计学意义（P〈0．05）．结论：HO-1表达上调导致血红素来源铁升高与铝过负荷致神经元退行性变的发生有关．
- 袁野郭建增杨俊卿周岐新
- 关键词：血红素加氧酶-1铝过负荷神经元退行性变
- 抗菌药或糖皮质激素处理对脓毒症大鼠的治疗作用与血浆TNF-α和IL-6水平的关系研究被引量：2
- 2006年
- 采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒症大鼠模型,观察抗菌药庆大霉素、阿莫西林和甲硝唑联合应用或地塞米松单用对脓毒症大鼠的治疗作用与血浆细胞因子TNF-α、IL-6水平变化的关系。结果显示抗菌药联合应用明显抑制脓毒症大鼠白细胞总数和中性粒细胞数增加,而地塞米松单用显著抑制白细胞总数增加和提高中性粒细胞数;两种处理均明显阻遏脓毒症大鼠血浆TNF-α和IL-6水平升高。抗菌药处理还显著降低脓毒症大鼠死亡率。本研究结果提示,虽然血浆TNF-α和IL-6水平是预测脓毒症转归的较可靠指标,但IL-6过度降低可能预示病情加重;肠源性脓毒症采用庆大霉素、阿莫西林和甲硝唑联合治疗具有最佳的治疗效果,能阻遏脓毒症大鼠血浆TNF-α和IL-6水平的持续升高,明显降低死亡率;用大剂量糖皮质激素治疗脓毒症的弊可能大于利。
- 熊缨袁野徐蜀远余丽梅周岐新
- 关键词：脓毒症抗菌药
