赵翠青 作品数:37 被引量:90 H指数:5 供职机构: 温州大学 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 北京市自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 哲学宗教 更多>>
成纤维细胞生长因子21介导TLR/MyD88通路减缓布鲁菌诱导巨噬细胞分泌细胞因子 2017年 为探讨成纤维细胞生长因子21(FGF21)对布鲁菌感染的抗炎作用,本试验检测患布鲁菌病羊外周血中FGF21的含量;体外试验使用FGF21与布鲁菌共培养后检测细菌存活率;分析FGF21对Raw264.7细胞毒性,并以FGF21预处理Raw264.7细胞后,使用布鲁菌侵染细胞,观察细胞因子的释放以及TLR/MyD88信号通路的变化。结果显示,患布鲁菌病羊外周血中FGF21的含量显著升高,FGF21并不影响布鲁菌的存活率且对Raw264.7细胞没有毒性;FGF21预处理后可以抑制布鲁菌侵染诱导的IL-6、TNF-α、MCP1和LDH的释放,并且FGF21可提高IL-10的含量;同时FGF21可降低布鲁菌侵染引起的TLR/MyD88表达的升高。结果表明,患布鲁菌病羊外周血中FGF21的含量显著升高,FGF21通过TLR/MyD88通路缓解布鲁菌侵染诱导的炎性细胞因子的释放。 刘立明 庄昕雨 赵海洋 李霄 赵翠青 金宁一关键词:布鲁菌 成纤维细胞生长因子21 RAW264.7细胞 细胞因子 Apoptin对肝癌细胞的体内、外抑制效应 2009年 目的:探讨Apoptin对人肝癌细胞株HepG-2及C57BL/6小鼠H22移植瘤的抑制作用。方法:应用脂质体转染法将重组质粒pVAX1-Apoptin转染HepG-2细胞,应用Western blotting检测Apoptin蛋白在转染后HepG-2细胞中的表达,应用MTT检测Apoptin对HepG-2细胞生长的抑制作用,通过AO/EB染色法检测pVAX1-Apoptin致肿瘤细胞凋亡作用。建立C57BL/6小鼠H22荷瘤模型,瘤内注射pVAX1-Apoptin,观察pVAX1-Apoptin对体内肿瘤的抑制作用。结果:Apoptin基因可在HepG-2细胞中有效表达,pVAX1-Apoptin能够诱导HepG-2细胞凋亡,并显著地抑制其生长,48h抑制率为69.28%。pVAX1-Apoptin瘤内注射能够有效抑制移植肿瘤的生长,抑制率为46.71%;治疗后39d小鼠生存率为40%,显著高于对照组(P<0.05)。结论:Apoptin转染可抑制HepG-2细胞的生长,重组质粒pVAX1-Apoptin瘤内注射对移植肿瘤有显著的抑制作用。 刘立明 金宁一 李霄 田明尧 杨恩成 刘妍 赵翠青 张金双 钱爱东关键词:肝肿瘤 APOPTIN HEPG-2 增殖 凋亡 猪圆环病毒3型与猪圆环病毒2型二重PCR检测方法的建立 被引量:7 2019年 为建立同时检测PCV3和PCV2的二重PCR方法,分别以PCV3和PCV2基因组的保守区域设计2对特异性引物,片段大小分别为649,295 bp。将反应条件进行优化,构建PCV3和PCV2的二重PCR检测方法。检测结果表明该方法能特异性扩增PCV3和PCV2,且无法扩增其他猪常见病毒;PCV3和PCV2的最低检出限分别为508,412 copies/μL。临床样品检测结果显示,PCV3和PCV2阳性率分别为2.1%(3/145),62.1%(90/145),PCR产物经测序证实为PCV3。本研究建立的二重PCR方法具有速度快、特异性强和灵敏度等优点,可以用于PCV3和PCV2的检测和流行病学调查。 孙文超 汪伟 赵翠青 赵海洋 刘立明 孟娟 王茂鹏 王茂鹏 曹亮 曹亮 夏秀秀 孙迪菲 宋璟子 郑敏 郑敏 金宁一关键词:PCV2 用于检测A型流感病毒的基因芯片、其制备方法及应用 本发明涉及一种A型流感病毒分型的基因芯片、其制备方法,检测方法和检测试剂盒,其中基因芯片包括固相载体和固定在该载体上的寡核苷酸探针,该寡核苷酸探针含有从一种或多种A型流感病毒的HA、NA和/或M基因选取的DNA片段。本发... 金宁一 田明尧 鲁会军 李昌 李霄 金扩世 南文龙 谭磊 张金双 赵翠青 孙珊珊 颜雯双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗的构建及其免疫原性检测 被引量:1 2010年 目的:构建双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗,并检测其免疫原性。方法:构建共表达流感病毒H5亚型血凝素(HA)和H7亚型HA的DNA疫苗,采用间接免疫荧光法(IFA)检测目的蛋白在幼仓鼠肾细胞(BHKcell)中的表达。分为pVAX1-H5-H7、pVAX1-H5、pVAX1-H7和pVAX1空质粒对照组4组(每组15只)进行小鼠免疫实验,并应用ELISA法检测小鼠血清抗体,流式细胞术检测小鼠脾T淋巴细胞亚群数量。结果:所构建的双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗在BHK细胞中的表达产物可激发荧光抗体产生绿色免疫荧光,且对照pVAX1空载体转染BHK细胞无免疫荧光产生。使用双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗免疫小鼠后,小鼠产生了针对H5和H7抗原的血清特异性抗体,流式细胞术检测免疫组小鼠脾T淋巴细胞亚群CD4+和CD8+的数量显著高于对照组(P<0.05)。结论:成功构建的双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗可以诱导小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答。 白靓 金宁一 成岩 石毅 鲁会军 田明尧 南文龙 赵翠青 张金双 关铭关键词:流感病毒A型 体液免疫 细胞免疫 猪肠道α冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:4 2019年 为建立猪肠道α冠状病毒(SeACoV)荧光定量检测方法,本研究采用RT-PCR方法扩增SeACoV N基因保守区序列,将其克隆至p EASY-Blunt载体,构建重组质粒p EASY-Blunt-PA-N作为标准阳性质粒,以其为模板建立SeACoV的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验验证。结果显示,建立的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法 Ct值与标准品模板在9.47×101拷贝/μL~9.47×107拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.996,斜率为-3.91。本实验建立的方法对PEDV、TGEV、PDCo V、PRRSV等猪常见腹泻病样品检测无扩增,表明特异性良好;敏感性试验结果显示,该方法检测下限可达到9.47×101拷贝/μL;重复性试验结果显示,组内变异系数在0.82%~1.01%,组间变异系数在1.20%~1.69%,重复性较好。采用本研究建立的方法对广西和云南等地70份临床样品进行检测,结果显示除阳性对照外,临床样品均为阴性,表明该病毒尚未传播至广东以外的省份。本实验首次建立了SeACoV N基因SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,为SeACoV快速检测和病毒感染预防提供技术手段。 赵冠宇 黄海鑫 张世亨 赵翠青 陆祎婷 夏秀秀 倪铭 李笨 汪伟 曹亮 郑敏 孙文超 鲁会军 金宁一关键词:N基因 荧光定量PCR 广西猪细小病毒6型VP1基因序列进化分析 被引量:3 2019年 为研究广西地区是否存在猪细小病毒6型(PPV6)毒株流行,分析PPV6毒株遗传进化和分子特征,采用PCR技术对广西地区采集的猪组织样品进行PPV6基因片段检测。结果表明,广西地区猪群存在PPV6,感染率为36%(27/75),同时也存在着PPV6与猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染现象,感染率为32%;5株PPV6 VP1基因与中国参考株TJ株、韩国参考株KSU1-AZ-2014株、美国参考株U18-4株、波兰参考株P15-1株核苷酸序列同源性分别为99.3%~99.8%,99.3%~99.8%,98.9%~99.8%,99.3%~99.8%;VP1基因遗传进化分析表明,PPV6包含两个基因亚群,5株PPV6与中国参考株BJ、SC、JS、TJ株及波兰参考株处在G2亚群,而美国U18-4株则单独处于一个G1亚群。本研究为中国PPV6毒株流行病学及其病毒致病性研究提供研究基础。 尹柏双 赵翠青 赵翠青 刘立明 沙万里关键词:VP1基因 遗传进化 C5a对类风湿关节炎小鼠嗜中性粒细胞的募集作用 2018年 通过使用双光子显微镜活体成像技术优化了K/B×N血清诱导的关节炎小鼠模型,并观察了嗜中性粒细胞的募集情况。皮下注射K/B×N血清可以快速诱导大量的嗜中性粒细胞募集到局部炎症关节。通过使用这种方法,发现阻断C5a活性会减少嗜中性粒细胞募集,说明C5a是关节炎期间嗜中性粒细胞募集的关键调节因子。因此,本试验将为补体相关生物制剂治疗类风湿关节炎提供新的靶点。 赵翠青 刘立明 孙文超 王茂鹏 陈征 王宝梅 李霄 鲁会军 金宁一关键词:嗜中性粒细胞 补体C5A 流感复合多表位DNA疫苗及其应用 本发明涉及流感复合多表位基因及利用其构建的DNA疫苗。本发明采用生物信息学方法,结合网络服务器和相关软件,对流感主要保护性抗原相关的HA和NA功能表位进行了预测,共获得了来源于多种亚型的流感CTL表位17条,来源于多个亚... 金宁一 鲁会军 田明尧 李昌 李霄 金扩世 南文龙 谭磊 张金双 赵翠青文献传递 山羊Th1/Th2细胞因子实时荧光定量检测方法的建立 被引量:3 2019年 目的在mRNA水平对山羊Th1/Th2型细胞因子进行定量分析,建立山羊Th1/Th2型细胞因子实时荧光定量检测方法。方法根据GenBank山羊Th1(IL-2和IFN-γ)和Th2(IL-4、IL-6和IL-10)细胞因子基因保守序列设计引物,以标准阳性质粒为模板分别进行荧光定量PCR反应的标准曲线、溶解曲线建立。结果山羊Th1/Th2细胞因子实时荧光定量检测方法Ct值与标准品呈良好的线性关系,R^2均大于0.985,所有稀释度标准品模板出现特异性熔解峰;利用N1蛋白缺失的重组山羊痘病毒(△N1L株)与山羊痘AV41株感染山羊外周血淋巴细胞进行IL-4和IFN-γmRNA表达水平检测,△N1L株与山羊痘AV41株均能能够刺激机体IL-4和IFN-γ细胞因子,但二者差异无统计学意义(t=3.333,P>0.5)。结论本研究建立山羊Th1/Th2细胞因子实时荧光定量检测,为山羊痘基因工程疫苗的研究奠定基础。 孙文超 张世亨 易驰喆 黄海鑫 张红云 汪伟 曹亮 曹亮 闭璟珊 郑敏 韦显凯 韦显凯 苏姣秀 赵翠青 王茂鹏关键词:山羊 TH1/TH2型细胞因子 SYBR REAL-TIME