刘芹防
- 作品数：40 被引量：92H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 2014~2016年江苏地区H9N2亚型禽流感病毒遗传进化及其分子特征的分析被引量：3
- 2018年
- H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)在我国广泛流行,给养禽业造成了巨大的经济损失,还对公共卫生安全存在潜在威胁. 2014～2016年, H9N2亚型禽流感病毒在江苏地区的活禽市场的鸡中的阳性率为8.39%～13.74%.选取10株H9N2分离株进行全基因组测序及遗传进化分析.结果表明, H9N2分离株的HA基因与早期的江苏分离株位于同一小分支上,且同源性较高,但NA基因与早期江苏病毒株的同源性较低,核苷酸同源性为91.4%～93.9%,氨基酸同源性为91.2%～93.8%.这些病毒株的基因型依然为B69,为目前的优势基因型.所有H9N2病毒分离株的HA蛋白的226位点为L.固相受体结合实验结果显示, H9N2分离株具有人源α2,6唾液酸受体的结合特性.
- 陈新武段旭彤王彦哲季雅宁石晓娜李雪松杨健美刘芹防陈鸿军滕巧泱李泽君
- 关键词：禽流感病毒H9N2进化分析
- 蝙蝠流感病毒与H9N2亚型禽流感病毒M蛋白的免疫原性比较研究
- H17N10和H18N11两种新亚型的A型流感病毒的基因组序列在野生蝙蝠体内被报道之后,蝙蝠可能成为流感病毒新的贮存宿主而受到关注,蝙蝠流感病毒虽然与其他亚型流感病毒存在一定差异,但也具有IAVs变异能力强,易发生重组的...
- 黄敏刘宸瑞滕巧泱刘芹防李雪松陈鸿军李泽君杨健美
- 文献传递
- H1N1亚型猪流感病毒HA1基因原核表达及鉴定被引量：1
- 2015年
- 本研究利用RT-PCR技术扩增禽源H1N1亚型猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)的HA1基因片段,将其连接至p Cold-TF载体上,菌液鉴定为阳性的克隆经测序验证正确后,提取质粒转化至高表达的表达宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导并大量表达目的蛋白。表达产物经过纯化及SDS-PAGE电泳分析,表明重组蛋白以可溶性形式在上清中大量表达,大小约90 k Da,且在15℃、0.8 mmol/L IPTG条件下诱导24 h表达效果最好。通过Ni柱纯化后,经Western blot分析表明重组表达的蛋白能与禽源H1N1亚型SIV阳性血清发生特异性反应,具有较好的反应原性。
- 阮宝阳王林宫晓倩汪秀会刘晓敏汪琪单同领李泽君刘芹防陈鸿军滕巧泱童光志于海
- 关键词：HA1基因原核表达可溶性抗原性
- LC3蛋白敲除A549细胞系的构建及其对流感病毒复制的影响
- 2022年
- 微管相关蛋白1轻链3(LC3)是一种在流感病毒感染过程中被病毒M2蛋白招募至细胞膜处聚集的宿主细胞自噬相关蛋白。为了解其在流感病毒感染过程中行使的功能,利用CRISPR/Cas9技术构建LC3蛋白缺失细胞系,用以观察病毒生长复制的差异。设计sgRNA并插入至核心载体LentiCRISPRv2中,与辅助质粒共同转染293T细胞行慢病毒的包装。包装完成后用以感染A549细胞并进行嘌呤霉素压力筛选,对存活细胞的LC3蛋白含量进行检测,结果显示具有嘌呤抗性的细胞中未检测到LC3蛋白条带,LC3敲除细胞系构建成功。运用核染色法对比敲除细胞和正常细胞的细胞活性,发现缺失LC3蛋白细胞活性小幅度下降。流感病毒感染两种细胞绘制生长曲线,缺少LC3蛋白的条件下病毒复制水平下降。本研究构建的LC3蛋白缺失细胞系能够为将来研究LC3蛋白在细胞自噬与病毒感染过程中发挥功能,以及分子机制的研究提供了良好的细胞模型。
- 陆晨阳包旦奇马天馨牛世奇张婷任超超李雪松杨健美滕巧泱李泽君刘芹防
- 关键词：流感病毒
- 猪细小病毒BQ株灭活疫苗免疫剂量及免疫持续期的初步研究被引量：2
- 2010年
- 为确定猪细小病毒(PPV)BQ株灭活疫苗(PPV-BQ)的免疫剂量及免疫持续期,本研究与市场上销售的2种PPV灭活疫苗A和B进行了比较。试验分6组,每组免疫3头PPV抗体阴性猪,1组～3组分别免疫BQ株灭活疫苗1mL、2mL、4mL,4组～5组按照说明书免疫A、B两种PPV灭活疫苗,6组为阴性对照组(免疫油佐剂)。两周后进行二免,定期检测血清抗体水平。结果表明,注射疫苗组均产生了PPV抗体,都能持续到免疫后24周。免疫不同剂量PPV-BQ各组间抗体水平差异不显著(p>0.05),PPV-BQ与PPV-A抗体水平差异不显著(p>0.05),与PPV-B抗体水平差异极显著(p<0.01),显著优于PPV-B。PPV-BQ1mL免疫剂量即可达到或超过同类产品的免疫效果,是较为理想的PPV灭活疫苗。
- 张振梅张超范崔尚金刘芹防祝超姚贵哲
- 关键词：猪细小病毒灭活疫苗免疫剂量免疫期
- H3N2禽流感病毒反向遗传操作平台的建立
- 2022年
- 近几年,禽流感病毒(AIV)跨越禽-犬屏障产生新型H3N2犬流感病毒,后者在亚洲多国的犬中广泛流行,造成潜在的公共卫生安全威胁。尽管如此,H3N2 AIV如何跨宿主传播至犬的分子机制尚不清楚。为此,本研究利用早期筛选到的一株不感染犬和鼠,但感染禽的H3N2禽流感病毒A/Duck/Shanghai/01/2009(H3N2)(简称为SH01),通过RT-PCR技术扩增了病毒的8个全基因片段,并分别克隆至PLLB双向表达载体上。将构建成功的8个质粒纯化后共转染293T细胞,转染48 h后加入TPCK胰酶作用2 h,将上清液和细胞一同接种9~11日龄SPF鸡胚,检测其血凝效价。经测序分析,确定获救病毒的8个基因片段序列与亲本毒株的序列完全一致,表明该病毒拯救成功。H3N2禽流感病毒反向遗传操作平台的成功建立为探索该病毒跨宿主传播犬的分子机制提供了工具。
- 石晓娜闫婉婉陈新武潘学李雪松刘芹防杨健美李泽君滕巧泱
- 关键词：H3N2禽流感病毒
- 一株欧洲类禽H1N1猪流感病毒的分离鉴定与反向遗传系统的建立被引量：5
- 2019年
- 猪流感是猪常见的呼吸道传染病,临床以高热、呼吸困难、咳嗽和衰竭、迅速康复或死亡为特征。猪流感不仅给养猪业造成巨大损失,也严重威胁着人类健康。本研究从发病猪场中分离到1株H1N1亚型猪流感病毒,序列分析结果显示,分离毒株属于欧洲类禽猪流感H1N1亚型病毒。将分离毒株分别接种到MDCK与ST细胞,观察病毒的生长特性,结果显示分离的猪流感病毒在ST细胞中复制能力较强。采用RT-PCR技术分别扩增8个基因片段,克隆到流感病毒反向遗传系统,成功拯救出猪流感病毒毒株,测序结果显示拯救的猪流感病毒与亲本毒序列一致。本研究成功分离的猪流感病毒,以及建立的反向遗传技术为研究欧洲类禽猪流感病毒跨种传播的机制以及研发新型猪流感疫苗株奠定了基础。
- 胡晓鲁张婷兰海玲李雪松杨健美滕巧泱陈鸿军李泽君刘芹防关平原
- 关键词：H1N1亚型反向遗传系统
- 鸭源新型鹅细小病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用被引量：6
- 2020年
- 2015年暴发了一种由新型鹅细小病毒(NGPV)引起的鸭喙萎缩-侏儒症(BADS)的疾病,造成了严重的经济损失。本研究根据GenBank中NGPV相对保守的VP3基因序列,设计1对特异性引物和1条TaqMan探针,并对其反应条件进行优化,建立了一种检测NGPV的TaqMan荧光定量PCR方法。敏感性试验结果表明,该方法检测敏感性达到37.2拷贝/μL,比常规PCR灵敏度高100倍,而且该方法对鸭其他主要病原核酸检测均为阴性,具有良好的特异性。批内和批间的检测变异系数均小于等于2.2%。对收集的50份病料进行检测,本研究建立的荧光定量PCR方法NGPV检出率为78%,普通PCR方法为50%,荧光定量PCR方法的敏感性明显高于普通常规PCR方法。研究结果表明该方法具有操作简便、敏感性高和特异性强的特点,可用于NGPV的快速诊断。
- 曹旭阳王宇飞张志飞魏笑笑秦立廷陈佶慧滕巧泱杨健美刘芹防陈鸿军李泽君李景环李雪松
- 关键词：荧光定量PCR
- 两株H1N1亚型猪流感病毒NS1蛋白抑制Ⅰ型IFN功能比较被引量：2
- 2021年
- 本研究分离得到两株猪源H1N1流感病毒,通过进化树分析发现分别是欧亚类禽H1N1猪流感病毒和类鸭源H1N1猪流感病毒,为了研究两株毒株的NS1蛋白对Ⅰ型IFN产生的抑制能力,分别构建了2个毒株的NS1基因的真核表达载体,将NS1真核表达质粒、Ⅰ型IFN报告质粒与干扰素刺激质粒RIG-I共转染293T细胞,利用双荧光素酶报告基因检测Ⅰ型IFN激活水平。结果显示:欧亚类禽H1N1猪流感病毒NS1蛋白对人源细胞干扰素的拮抗作用明显强于类鸭源H1N1猪流感病毒;2种NS1蛋白对RIG-I与TBK-1激活的IFN-I抑制能力存在显著的差别,但是对IRF-3激活的IFN-I抑制能力没有显著差别。本研究结果初步揭示了欧亚类禽与类鸭源H1N1猪流感病毒抑制IFN-I能力的差异,及H1N1禽流感适应猪群的潜在分子机制。
- 张婷陆晨阳任超超包旦奇陈鸿军李雪松杨健美滕巧泱李泽君刘芹防
- 关键词：猪流感病毒NS1蛋白
- 新型抗原亚群H9病毒的血凝素蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 2023年
- H9N2亚型禽流感病毒(AIV)抗原变异迅速,相继于2009年及2013年分别出现新的抗原亚群病毒,对该病毒的防控带来了极大的挑战。目前,关于H9N2禽流感病毒形成不同抗原亚群机制,尚不清楚。流感病毒血凝素蛋白(HA)的单克隆抗体是研究该机制的基础工具。为此,本研究通过血凝抑制(HI)实验筛选到1株新型的抗原亚群H9N2病毒H514。通过杂交瘤细胞融合技术以及间接免疫荧光的方法,筛选到5株抗H514病毒HA蛋白的单抗,均属于Ig G亚型。Western blot结果表明5株单克隆抗体中只有5E9作用的是线性表位,其余4株皆是针对构象表位。进一步地研究发现,这5株单克隆抗体对H514株皆有HI活性,最高达到2~8。这些结果为H9N2亚型禽流感病毒的抗原性分子研究提供了重要材料。
- 闫婉婉李雪松宿鑫石晓娜陈新武魏朋华刘芹防杨健美闫大为张志飞李泽君滕巧泱
- 关键词：H9N2亚型抗原变异单克隆抗体血凝素
