史继静
- 作品数：40 被引量：140H指数：6
- 供职机构：解放军第三0二医院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金湖北省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 紫苏对IL-6/IL-6R拮抗作用研究
- 目的通过分子和细胞筛选模型研究紫苏对 IL-6的拮抗作用。方法利用 EHSA 法建立 IL-6/IL-6R 结合的体外药物筛选模型,将紫苏稀释为不同梯度浓度,观察其抑制 IL-6/IL-6R 结合的作用及量效关系。应用肝...
- 史继静刘朝奇高明星柳发勇杨凡
- 关键词：紫苏
- 文献传递
- 直接抗病毒药物对慢性HCV感染者机体免疫学应答的影响
- 背景：机体抗病毒免疫功能的恢复是慢性丙型肝炎(CHC,chronic hepatitis C)治疗的关键。直接抗病毒药物(direct antiviral agents,DAAs)的出现为HCV 感染的治疗带来革命性进展...
- 史继静
- 关键词：慢性丙型肝炎细胞毒性T淋巴细胞
- HIV-1 p15（Gag）基因的克隆、蛋白表达及抗体制备被引量：1
- 2007年
- 目的：构建HIV-1p15（Gag）原核表达载体，诱导蛋白表达及制备多克隆抗体。方法：用PCR的方法扩增编码p15（Gag）基因序列，将其克隆到原核表达载体pET28a（＋）中，利用大肠杆菌表达系统表达HIV-1p15蛋白，分别用His抗体和HIV阳性血清做westernblot鉴定目的蛋白的免疫原性。纯化目的蛋白免疫家兔，制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验（ELISA），细胞免疫组织化学法检测抗体滴度及其特异性。结果：原核表达载体pET28a（＋）-p15（Gag）成功构建，可在大肠杆菌BL2。（DE3）中用IPTG诱导表达，得到相对分子质量约20KD的p15（Gag）蛋白，经westernblot鉴定正确。纯化蛋白免疫家兔，制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论：得到纯化的HIV-1p15蛋白，制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15（Gag），为进一步研究HIV-1奠定了实验基础。
- 柳发勇刘朝奇史继静杨凡余枫华杨春秀韩莉任东明韩钰
- 关键词：HIV-1原核表达免疫原性多克隆抗体
- 人IL-6基因的克隆及其在原核生物中表达及条件的优化被引量：6
- 2010年
- 构建人白细胞介素6(IL-6)的原核表达载体并优化其表达条件,为IL-6的高效表达提供试验依据。以人T细胞cDNA为模板通过PCR方法扩增IL-6基因,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,酶切及测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,产物用Western blotting及人IL-6检测试剂盒分析鉴定。在保持菌种不改变的前提下,分别改变IPTG的浓度、培养时间、卡那霉素浓度、培养温度等来优化IL-6表达条件。结果显示,原核表达载体pET28 a(+)-IL-6成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约22 kD的IL-6蛋白,经Western blotting鉴定正确,经人IL-6试剂盒检测显示具有较高的免疫活性。在IPTG浓度400μmol/mL,卡那霉素浓度50μg/mL,40℃培养6 h的条件下,目的蛋白表达量最高,可占总蛋白表达量的40%。成功构建人IL-6原核表达载体且获高效表达,为研究IL-6生物学活性及产品开发提供了试验基础。
- 史继静刘朝奇杨凡杨祖伟
- 关键词：IL-6原核表达
- 紫苏对乙醇性肝损伤小鼠肝脏的保护研究
- 目的观察紫苏对乙醇性肝损伤小鼠肝脏炎症及凋亡相关基因的表达影响,研究其对肝脏的保护机制。方法小鼠禁食12 h 后,紫苏组按0．011 mL·g体积质量比灌胃给药,盐水组给予等体积0．9%氯化钠溶液,另设空白对照组。30 ...
- 杨凡刘朝奇柳发勇史继静任东明
- 关键词：紫苏护肝作用
- 文献传递
- 破膜剂对流式细胞术检测Th1/Th2/Th17细胞频率的影响被引量：4
- 2016年
- 目的探讨不同破膜剂对流式细胞术检测Th1/Th2/Th17细胞频率的影响。方法以健康人外周血为研究对象,使用多参数流式细胞仪分析,比较3种不同破膜剂(常规改进的破膜剂、eBioscience公司破膜剂、BD公司破膜剂)对CD4^+T淋巴细胞内干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)和白介素-17(IL-17)检测结果的影响。结果在相同条件下,eBioscience公司破膜剂检测到的IL-4^+CD4^+T细胞频率显著高于其它2组(P<0.05);改进的破膜剂组(GJ)IL-17^+CD4^+T细胞频率明显高于其它组(P<0.05);但IFN-γ^+CD4^+T细胞的频率在3组间无统计学差异(P>0.05)。结论 3种破膜剂破膜后均可检测到IFN-γ^+CD4^+(Th1)、IL-4^+CD4^+(Th2)、IL-17^+CD4^+(Th17)T细胞,但不同破膜剂对不同类型Th细胞的检出频率有影响,因此操作过程中应根据不同的需求选择合适的破膜剂。
- 周春保史继静王立峰李元元张学秀袁今虹张纪元徐若男金磊施明王福生
- 关键词：流式细胞术细胞因子
- 人IL-6/sIL-6R结合分子模型的建立及在药物筛选中的应用
- 2009年
- 目的:建立人IL-6/sIL-6R结合的分子模型,用于筛选IL-6/sIL-6R的抑制剂。方法:将人IL-6基因克隆至原核表达载体pET28a(+)中表达IL-6蛋白,Western blot及人IL-6检测试剂盒分析鉴定表达蛋白。同法将人sIL-6R在pET15b载体中表达,纯化并用Western blot检测目的蛋白。依据ELISA原理建立IL-6/sIL-6R结合的分子模型,并通过改变IL-6、sIL-6R及IL-6antibody的浓度来优化该模型,用于IL-6/sIL-6R拮抗药物的筛选。结果:人IL-6可在载体PET28a(+)中高效表达,且经Western blot鉴定正确,人IL-6检测试剂盒检测显示具有较高的免疫活性。sIL-6R在PET15b中表达,Western blot鉴定正确。通过对IL-6/sIL-6R结合的分子模型的优化,得到其最佳条件为:IL-6R1μg/well,IL-6500ng/well,IL-6antibody1μg/well。应用该模型筛选发现有些化合物可显著抑制IL-6与其受体的结合。结论:成功构建IL-6/sIL-6R结合的分子模型,为高通量筛选IL-6拮抗剂提供平台。
- 史继静刘朝奇邹坤杨祖伟高明星杨凡
- 关键词：IL-6SIL-6R蛋白表达ELISA药物筛选
- 人PD-L1胞外区基因的克隆、原核表达及抗体制备
- 2010年
- 目的克隆人PD-L1胞外区基因并进行原核表达及相应蛋白的抗体制备,为进一步研究PD-1/PD-L1通路及针对该通路进行疾病治疗和药物筛选奠定基础。方法用PCR方法扩增编码人PD-L1胞外区的基因序列,克隆到原核表达载体pET28a(+)中并进行表达,用His抗体为一抗进行Western blotting鉴定并验证结合活性。用纯化的hPD-L1胞外区蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)和流式法检测抗体滴度及其特异性。结果原核表达质粒pET28a(+)-hPD-L1成功构建,并可在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导高效表达,得到的hPD-L1胞外区蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确。用纯化蛋白免疫日本大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强的免疫结合活性,抗体滴度可达105。结论鉴定和纯化了原核表达的hPD-L1蛋白,制备的相应多克隆抗体能够检测真核细胞表达的hPD-L1蛋白,为进一步研究PD-1/PD-L1生物学活性奠定了实验基础。
- 李斌刘朝奇王见之史继静覃晓琳吕佰瑞王梦瑶韩琴
- 关键词：基因表达抗体
- 人PD1胞外段基因的克隆、蛋白表达及抗体制备被引量：3
- 2010年
- 目的:研究人PD1的生物学活性,制备人PD1胞外段区域及其特异性抗体。方法:用PCR方法扩增编码人PD1胞外段的基因序列(hPD1ecr),将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达蛋白用SDS-PAGE和Western blot鉴定。纯化目的蛋白免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA),流式细胞术检测抗体滴度及其特异性。结果:原核表达载体pET28a(+)-PD1ecr成功构建,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到的PD1胞外区蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定正确。用纯化蛋白免疫日本大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论:得到纯化的人PD1胞外蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下人PD1蛋白,为进一步研究PD1功能奠定了实验基础。
- 史继静刘朝奇李斌覃晓玲任东明
- 关键词：原核表达免疫原性多克隆抗体
- 木瓜对小鼠急性乙醇性肝损伤作用研究
- 目的建立小鼠急性乙醇性肝损伤模型,在组织形态学和分子水平观察木瓜对造模小鼠肝脏炎症及细胞凋亡的影响。方法普通昆明种鼠随机分组,禁食12 h 后,以0．011 mL·g木瓜汁、0．9%氯化钠溶液灌胃组分别作为实验组和对照组...
- 柳发勇刘朝奇杨凡史继静任东明
- 关键词：木瓜小鼠
- 文献传递
