杨凡
- 作品数：46 被引量：70H指数：5
- 供职机构：三峡大学更多>>
- 发文基金：宜昌市科技计划项目湖北省卫生厅科研基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程文化科学更多>>
- DNA分子探针及在绿豆核酸酶的肿瘤细胞内miRNA实时定量PCR检测上的应用
- 本发明提供一种DNA分子探针，所述的分子探针为miRNA Let‑7b的DNA分子探针，该NDA分子探针带有茎环结构。本发明将该DNA分子探针用于检测肿瘤细胞内miRNA上，实验结果表明miRNA Let‑7b在人非小细...
- 曹春雨杨凡王发玲王艳林
- 文献传递
- EZH2与肿瘤的研究进展被引量：5
- 2016年
- EZH2作为甲基化转移酶,通过催化组蛋白H3K27三甲基化,介导基因表达沉默。EZH2作为PRC2复合物的核心成分,广泛参与细胞分化、维持干细胞多能性、在肿瘤发生过程中发挥重要作用。EZH2在多种肿瘤细胞中高表达,其表达水平与肿瘤病人的预后具有相关性。作为潜在的抗肿瘤治疗靶点,EZH2的表达调控及其EZH2抑制剂的研发已经得到深入研究。本文综述了近年来有关EZH2与肿瘤防治研究的新进展。
- 曹春雨杨凡王艳林
- 关键词：EZH2肿瘤
- 人IL-6/sIL-6R结合分子模型的建立及在药物筛选中的应用
- 2009年
- 目的:建立人IL-6/sIL-6R结合的分子模型,用于筛选IL-6/sIL-6R的抑制剂。方法:将人IL-6基因克隆至原核表达载体pET28a(+)中表达IL-6蛋白,Western blot及人IL-6检测试剂盒分析鉴定表达蛋白。同法将人sIL-6R在pET15b载体中表达,纯化并用Western blot检测目的蛋白。依据ELISA原理建立IL-6/sIL-6R结合的分子模型,并通过改变IL-6、sIL-6R及IL-6antibody的浓度来优化该模型,用于IL-6/sIL-6R拮抗药物的筛选。结果:人IL-6可在载体PET28a(+)中高效表达,且经Western blot鉴定正确,人IL-6检测试剂盒检测显示具有较高的免疫活性。sIL-6R在PET15b中表达,Western blot鉴定正确。通过对IL-6/sIL-6R结合的分子模型的优化,得到其最佳条件为:IL-6R1μg/well,IL-6500ng/well,IL-6antibody1μg/well。应用该模型筛选发现有些化合物可显著抑制IL-6与其受体的结合。结论:成功构建IL-6/sIL-6R结合的分子模型,为高通量筛选IL-6拮抗剂提供平台。
- 史继静刘朝奇邹坤杨祖伟高明星杨凡
- 关键词：IL-6SIL-6R蛋白表达ELISA药物筛选
- 准确测量实验仪器在流水中垂直深度的多功能装置
- 一种准确测量实验仪器在流水中垂直深度的多功能装置，它包括刻度盘、握把、铅锤、穿绳装置和伸缩尺；所述握把与刻度盘顶部连接，铅锤与刻度盘上表面连接配合，穿绳装置设置在刻度盘上表面，伸缩尺与刻度盘背板连接，伸缩方向垂直于刻度盘...
- 杨凡纪道斌吴雅婷
- 文献传递
- 木瓜对小鼠急性乙醇性肝损伤作用研究
- 目的建立小鼠急性乙醇性肝损伤模型,在组织形态学和分子水平观察木瓜对造模小鼠肝脏炎症及细胞凋亡的影响。方法普通昆明种鼠随机分组,禁食12 h 后,以0．011 mL·g木瓜汁、0．9%氯化钠溶液灌胃组分别作为实验组和对照组...
- 柳发勇刘朝奇杨凡史继静任东明
- 关键词：木瓜小鼠
- 文献传递
- 一种用于垂向打破河湖水温分层的机械装置
- 本实用新型公开一种用于垂向打破河湖水温分层的机械装置，包括电机，所述电机输出端与第一传动杆一端相连，第一传动杆为伸缩杆，第一传动杆另一端连接有齿轮，所述齿轮与两个蜗杆相互配合，蜗杆与第二传动杆相连，第二传动杆与三叶转轮相...
- 杨凡纪道斌刘心愿
- 文献传递
- 紫苏提取液对小鼠急性酒精中毒的作用及机制被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨紫苏提取液(PLE)对小鼠急性酒精中毒的作用及机制.方法:用食用白酒(56度)灌胃昆明种小鼠,建立急性酒精中毒动物模型.选取小鼠40只,随机分为4组,每组10只,分别为空白对照组、PLE低剂量组(20g/kg)、PLE高剂量组(40g/kg)、模型组.各实验组给予相应的药物30min后,除空白组外其余各组分别灌胃实验用酒0.15mL/10g,空白组灌以等量的生理盐水.分别观察紫苏提取液对小鼠醉酒潜伏时间及肝组织形态的影响.Real-time PCR检测小鼠肝组织中IL-6、iNOS、TNF-α、Bax基因mRNA的表达水平.结果:酒前灌PLE可降低醉酒小鼠数量、延迟小鼠发生醉酒的时间,其中高浓度组小鼠发生醉酒的潜伏时间与对照组相比有显著性差异(47.00±6.04vs11.56±12.11,P<0.05).正常对照组小鼠肝脏小叶、汇管区结构正常,肝细胞无明显变性、坏死,无明显炎细胞浸润.与模型组相比,PLE高剂量组与低剂量组肝细胞变性、坏死,炎细胞浸润均有明显改善.与模型组相比PLE可明显下调IL-6、iNOS、TNF-α mRNA的表达(0.251±0.073,0.455±0.096vs1.58±0.124;0.381±0.043,0.345±0.067vs2.088±0.088;0.584±0.061,0.270±0.027vs2.025±0.056,P<0.05或0.01),同时Bax mRNA的表达亦下降但无统计学差异.结论:紫苏提取液可显著地延长小鼠的醉酒潜伏时间、拮抗乙醇引起的肝脏损伤,此作用可能与其下调肝组织中IL-6等基因的表达有关.
- 史继静刘朝奇陈晶王锦江李斌张伟王雅琴杨凡
- 关键词：急性酒精中毒基因表达
- HIV-1 Tat蛋白结合Tar的抗艾滋病药物筛选模型的建立研究
- 2007年
- 目的：建立HIV-1 Tat蛋白结合Tar的细胞模型用于抗艾滋病药物体外筛选。方法：构建表达HIV-1 Tat蛋白的真核表达质粒（pCDNA3．1（＋）-Tat）和HIV-1 LTR-luc荧光素酶报告基因，采用脂质体转染法共转染HeLa细胞，荧光仪检测Tat蛋白结合HIV-1LTR促进荧光素酶在HeLa细胞内的表达情况。结果：成功构建pCDNA3．1（＋）-Tat和HIV-1 LTR-luc质粒，将质粒共转染HeLa细胞，荧光仪检测到荧光素酶的活性，建立了HIV-1 Tat蛋白结合Tar的细胞模型。以DRB（5，6-二氯-1-β呋核亚硝脲-苯并咪唑）为阳性对照，进行模型的条件优化。通过反复试验表明：目的基因和报告基因的比例、细胞浓度以及药物作用时间等对模型的稳定性和敏感性有影响。应用优化的细胞模型对文冠果、紫苏等天然产物浸提物进行筛选及结果的分析。结论：建立的HIV-1Tat蛋白结合Tar的细胞模型可用于抗HIV-1的药物筛选。
- 李在留刘朝奇邹坤李凤兰韩钰杨凡王磊黎
- 关键词：药物筛选
- HIV-1病毒Nef基因克隆、表达、纯化及其抗体的制备被引量：5
- 2008年
- 目的:运用基因工程方法制备HIV-1 Nef重组蛋白及其抗体。方法:用PCR技术从HIV-1H×B2质粒中扩增HIV-1 Nef基因,将测序鉴定过的HIV-1 Nef基因克隆到原核表达载体pET28a(+)上,应用酶切鉴定、测序、SDS-PAGE及Western blot等方法鉴定基因片段的正确性及表达蛋白的特异性。纯化的重组蛋白免疫兔3次后,ELISA法测定兔多克隆抗体滴度。用其制备的多克隆抗体通过免疫组织化学方法测定表达Nef基因的内皮细胞。结果:成功地构建了Nef基因的原核表达质粒,测序证明HIV-1Nef基因全长为621bp,编码206个氨基酸。在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白为包涵体的形式。HIV-1 Nef蛋白N端融合6×His标签便于纯化及鉴定。获得的高纯度HIV-1 Nef融合蛋白,免疫动物后,可产生特异的高滴度抗体(ELISA滴度达1∶10000)。将转染Nef基因的内皮细胞,应用免疫组化的方法证明其抗体有高度的特异性。结论:构建了高表达HIV-1 Nef蛋白的原核表达系统,制备的Nef重组蛋白免疫动物,获得了特异、高效价的抗体,为研究Nef基因的生物学活性提供了实验材料和依据。
- 杨凡刘朝奇柳发勇张伟王磊黎
- 关键词：HIV-1NEF抗体病毒
- HIV-1 gp160多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的免疫原性分析被引量：1
- 2008年
- 目的：HIV感染引起的AIDS已经成为严重影响人类健康和社会发展的全球性疾病。酶联免疫吸附试验和免疫印迹检验组合则被认为是HIV检测的“金标准”。因此本实验构建gp160的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV抗体测定提供特异、价廉的抗原。方法：选定HIV-1 gp160基因中三个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这三个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Western Blot测定融合蛋白的抗原特异性。结果：构建的HIV-1 gp160多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长969bp。在大肠杆菌BL21（DE3）中高效表达的重组蛋白分子量为37kDa,以包涵体的形式存在。结论：应用western blot测定10例正常人和12例HIV/AIDS病人血浆显示HIV-1 gp160多表位融合蛋白具有良好的抗原特异性。成功构建了高表达HIV-1 gp160多表位蛋白的原核表达系统,纯化的融合蛋白有较强的抗原特异性。
- 杨凡刘朝奇柳发勇余枫华杨春秀韩莉任东明张伟杨祖伟
- 关键词：HIV-1蛋白表达免疫原性免疫印迹
