孔毅荣
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 复合干扰素在毕赤酵母中的分泌表达、纯化及活性分析被引量：6
- 2004年
- 目的 在毕赤酵母中高效分泌表达复合干扰素。方法 根据毕赤酵母密码子偏性合成了复合干扰素基因 ,克隆至分泌型酵母表达载体pMEX9K ,线性化后转化毕赤酵母GS115 ,筛选高表达菌株。诱导后的培养上清经过离子交换 ,疏水层析 ,凝胶过滤三步层析纯化 ,用细胞病变抑制法测定其活性 ,并结合lowry法蛋白定量计算其比活性。结果 SDS PAGE分析显示 ,重组蛋白以可溶性分子的形式存在于上清液中 ,经纯化后纯度达到 96 % ,其N端氨基酸序列与理论值一致 ,比活与干复津相当。结论 复合干扰素在毕赤酵母中获得高效分泌表达 。
- 于长明齐连权来大志张晓鹏孔毅荣于婷付玲陈薇
- 关键词：毕赤酵母基因表达
- LFn融合蛋白表达载体的构建及转导融合蛋白进入细胞的研究
- 2006年
- LFn包括炭疽致死因子(LF)的1—254位氨基酸残基,它可以在PA存在时将融合在其C端的外源蛋白/多肽带入细胞.将LFn的编码序列分别导入pas22和pET21a表达载体中,构建了LFn融合蛋白表达载体pas22-LFn和pET21-LFn.将绿色荧光蛋白(EGFP)基因插入LFn融合蛋白表达载体中,并在其C端融合6个His序列,表达及纯化了LFn-EGFP融合蛋白.细胞实验表明,表达的LFn-EGFP在PA存在时可以有效地进入细胞.这为今后研究PA和LFn在理论和应用研究中作为“运用工具”的使用打下了基础.
- 孔毅荣付玲郭强于婷于长明陈薇
- 关键词：炭疽杆菌保护性抗原融合蛋白增强型绿色荧光蛋白
- LFn-MAGE3融合蛋白表达及生物学功能初步研究被引量：3
- 2006年
- 目的:表达融合蛋白LFn-MAGE3,探讨无毒炭疽毒素用于治疗肿瘤的可能性。方法:将LFn的编码序列导入PET21a表达载体中,构建LFn融合表达载体PET21a-LFn。将全长MAGE-3基因插LFn融合表达载体中,构建了PET21a-LFn-MAGE3融合蛋白表达载体。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达LFn-MAGE3融合蛋白。表达产物用QsepharoseFF离子交换柱和PheHP疏水柱进行纯化。LF毒性抑制实验和细胞免疫荧光实验检测融合蛋白的生物学活性。结果:融合蛋白LFn-MAGE3在大肠杆菌BL21a获得胞内可溶性表达,经纯化后,获得一定纯度的LFn-MAGE3融合蛋白。细胞免疫荧光实验显示LFn-MAGE3能在PA(炭疽保护性抗原)协同下高效进入巨噬细胞。结论:表达纯化获得的LFn-MAGE3融合蛋白能在PA协助高效进入细胞,可以用于下一步的肿瘤免疫治疗的动物实验中。
- 孔毅荣付玲郭强于婷于长明陈薇
- 关键词：炭疽毒素肿瘤免疫治疗
- 用Touch-Up PCR克隆中国仓鼠存活蛋白基因及其序列分析被引量：1
- 2007年
- 目的:通过Touch-UpPCR(上升PCR)的方法从中国仓鼠卵巢细胞中克隆存活蛋白基因,并对其进行序列分析。方法:分别从293、H22、CHO-S细胞中提取总RNA并反转录得cDNA,然后用Touch-UpPCR克隆存活蛋白基因。结果:获得了存活蛋白基因,全长423bp,序列测定及同源性分析表明其与GenBank中报道的人以及小鼠的存活蛋白基因高度同源,同源性分别为84.8%和88.2%;氨基酸序列分析表明它们的蛋白产物具有功能相同的BIR结构域。结论:从中国仓鼠卵巢细胞中首次克隆到存活蛋白基因。
- 郭俊伟赵兴卉于颖群孔毅荣易绍琼张晓鹏陈薇
- 关键词：存活蛋白
- 炎性体研究进展被引量：8
- 2007年
- 半胱天冬酶-1(caspase-1)活化导致白细胞介素(IL)-1β和IL-18等炎症细胞因子的切割和分泌,在机体天然免疫中起着重要作用。而caspase-1活化受到胞内多蛋白复合物——炎性体的调控。通过分析缺少炎性体组分的基因敲除小鼠,已经鉴定了多种感受不同外界信号刺激的炎性体。本文对目前已经鉴定的炎性体的组成、激活、调控及其生物学作用等方面研究进展作一综述。
- 郭强孔毅荣付玲徐俊杰陈薇
- 关键词：炎症白细胞介素-1Β
- 各种RNA干扰库的构建及比较被引量：1
- 2008年
- 不同种类的RNA干扰库已经被用于基因功能的研究之中,根据其构建方式和分子形式的不同,可将RNA干扰库分为4种类型,即化学合成的小干扰RNA(siRNA)库、化学合成的小发夹RNA(shRNA)表达库、酶切法构建的siRNA库和酶切法构建的shRNA表达库。简要介绍上述RNA干扰库的构建方法及其特点和局限。
- 郭强孔毅荣徐俊杰陈薇
- 关键词：小干扰RNA小发夹RNA
- 炭疽毒素抑制剂研究
- 炭疽是由炭疽芽孢杆菌引起的一种人畜共患的烈性传染病,它具有病程发展快,致死率高的特点。在炭疽芽孢感染的早期,没有明显特点的症状,较难作出诊断。一旦症状迅速发展,即使使用抗生素,通常病人也会死亡,这是由于在机体中已经出现了...
- 孔毅荣
- 关键词：炭疽炭疽毒素抑制剂
- 文献传递
- 炭疽致死因子结构域(LFn)与炭疽水肿因子结构域(EFn)的融合蛋白及其应用
- 本发明公开了一种炭疽致死因子结构域(LFn)与炭疽水肿因子结构域(EFn)的融合蛋白，编码融合蛋白的DNA序列和融合蛋白的氨基酸残基序列，含有所述编码序列的细菌细胞；本发明的融合蛋白包括炭疽致死因子的保护性抗原结合结构域...
- 陈薇郭强孔毅荣徐俊杰董大勇赵剑
- 文献传递
