孙海晨
- 作品数：96 被引量：341H指数：10
- 供职机构：首都医科大学宣武医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学环境科学与工程更多>>
- 成人甲状旁腺细胞的培养和鉴定被引量：4
- 2017年
- 目的探索成人甲状旁腺细胞培养方法的可行性。方法采用胶原酶消化成人甲状旁腺组织,进行原代和传代细胞培养,隔日观察细胞的形态变化。取传代一代细胞,一部分通过电子显微镜观察细胞形态并检测培养液中甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)含量,另一部分采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法检测甲状旁腺细胞特异性标志物的RNA:钙敏感性受体(calcium-sensing receptor,CaSR)、PTH和神经胶质细胞缺失转录因子(glial cells missing-2,GCM-2)。结果电子显微镜下观察传代至第7 d的细胞,发现细胞质丰富,含有丰富的线粒体、内质网和高尔基体,细胞质和细胞间可见分泌囊泡;细胞培养液上清中可检测出PTH;甲状旁腺细胞特异性标志物CaSR、PTH及GCM2呈阳性。结论经胶原酶消化法消化成人甲状旁腺细胞并培养,所得甲状旁腺细胞具有良好的形态和分泌功能,并保持甲状旁腺细胞的特异表型,可作为永久性甲状旁腺功能低下时同种异体细胞移植的来源。
- 赵越王晓辉刘爽孙海晨罗斌
- 关键词：甲状旁腺细胞细胞培养聚合酶链反应
- COX-2 mRNA在重症急性胰腺炎内分泌功能变化中的作用
- 2005年
- 目的:研究重症急性胰腺炎大鼠胰腺内分泌功能的变化,探讨胰腺内分泌功能损伤中COX-2mRNA的作用。方法:使用3.5%牛磺胆酸钠制作大鼠重症急性胰腺炎动物模型,对胰腺病理损伤评分;检测脂肪酶,血糖水平;分离胰岛细胞,进行葡萄糖刺激胰岛素分泌试验;应用逆转录聚合酶链反应技术,检测胰岛细胞COX-2mRNA的表达情况。结果:重症急性胰腺炎大鼠造模后1h,病理学评分、血糖、血清脂肪酶升高。胰岛葡萄糖刺激胰岛素分泌试验显示,胰岛素分泌量较正常对照组明显减少,差异有显著意义;逆转录聚合酶链反应提示重症急性胰腺炎组胰岛的COX-2mRNA表达增强,差异有显著意义。结论:3.5%牛磺胆酸钠诱导的重症急性胰腺炎对胰腺内分泌有较大影响。胰岛COX-2mRNA表达明显增强,在重症急性胰腺炎对胰腺内分泌功能影响中发挥作用。
- 刘东斌孙家邦李非张淑文孙海晨崔叶青刘爽刘大川
- 关键词：胰腺炎急性病
- 游离亚油酸对胰腺腺泡细胞的影响及其机制的探讨被引量：9
- 2006年
- 目的探讨游离亚油酸对胰腺腺泡细胞的影响及其可能的机制。方法分离胰腺腺泡细胞,分别与0.1、0.5、1.0mmol/L亚油酸共同孵育30、60、90min,测定细胞的LDH释放率,DNA片段梯度分析腺泡细胞凋亡,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Westernblot检测腺泡细胞PKC的膜转位,激光共聚焦测定细胞内钙的变化。结果腺泡细胞与亚油酸共同孵育后,台盼蓝染色显示存在细胞损伤,LDH释放率与亚油酸呈时间和剂量依赖关系。细胞总DNA凝胶电泳结果显示1.0mmol/L亚油酸可出现DNA梯状条带,证明存在细胞凋亡。同时,腺泡细胞凋亡率及PKC的膜转位率,均与亚油酸呈剂量和时间依赖关系。另外,钙离子是参与细胞损伤和PKC激活的因子之一,采用激光共聚焦方法检测腺泡细胞内钙浓度,发现其升高与亚油酸呈浓度依赖性。结论亚油酸对胰腺腺泡细胞损伤存在剂量和时间依赖关系。游离亚油酸刺激腺泡细胞内钙升高和活化PKC诱导细胞凋亡可能是高脂血症性胰腺炎的发病机制之一。
- 王亚军孙家邦李非孙海晨
- 关键词：胰腺腺泡细胞细胞凋亡蛋白激酶C细胞内钙离子
- 模拟微重力培养肝细胞的形态特点被引量：9
- 2003年
- 目的 模拟微重力方法培养大鼠原代肝细胞 ,初步分析其形态学特点及其意义。方法 改良Seglen原位胶原酶灌注法获得大鼠肝脏单细胞悬液 ,2 .2× 10 5个 /ml加微载体Cytodex 3(4 g/L)接种 ,采用旋转细胞培养系统 (RCCS)进行模拟微重力培养。第 0、6、2 4、72、12 0、168小时取样 ,相差、体视显微镜观察活细胞形态 ,第 2 4小时标本苏木素 伊红 (HE)染色观察组织学形态 ,电镜观察超微结构。结果 模拟微重力培养中肝细胞 2 4h内贴附微载体并出现三维结构 ,2 4～ 72h发展为独特的肝细胞 微载体聚球体。电镜下可见细胞膜的 3种不同形态 ,其分布与功能相一致。结论 模拟微重力培养方法能使肝细胞形成分化的三维类组织结构 。
- 张钰鹏李非孙家邦孙海晨崔叶青
- 关键词：肝细胞原代肝细胞形态学细胞培养
- 沉默胰腺癌上调因子对胰腺癌细胞株吉西他滨敏感性的影响被引量：1
- 2017年
- 目的观察沉默胰腺癌上调因子（PAUF）对胰腺癌BxPC-3细胞吉西他滨敏感性的影响。方法BxPC-3细胞中PAUF基因呈高表达，分别应用PAUF-shCtrl、PAUF-shPAUF转染BxPC-3细胞得到PAUF高低表达不同的对照组和实验组。应用实时聚合酶链式反应（RT-PCR）及蛋白印迹（Western blot）检测进行沉默后验证。MTF比色法检测两株细胞在不同浓度吉西他滨（0、3．1、6．25、12．5、25、50、100、200nmol／L）作用下对细胞增殖抑制率的影响。流式细胞术检测不同浓度吉西他滨（0、75、100nmol／L）作用下对细胞凋亡率的影响。结果BxPC-3shCtrl细胞及亲本细胞PAUF mRNA的相对表达量为1．00±0．06、0．83±0．07，均显著高于BxPC-3shPAUF细胞的0．25±0．02（均P〈0．05）。BxPC-3shCtrl细胞及亲本细胞PAUF蛋白相对表达量为0．89±0．07、0．95±0．04，显著高于BxPC-3shPAUF细胞的0．31±0．03（均P〈0．05）。吉西他滨对BxPC-3shCtrl细胞的半数抑制浓度IC50为（22．88±2．43）nmol／L，显著高于BxPC-3shPAUF细胞的（1．06±0．02）nmol／L（P〈0．05）；BxPC-3shPAUF细胞的凋亡随着吉西他滨浓度的增加速度明显大于BxPC-3shCtrl细胞。结论PAUF沉默后明显增加胰腺癌BxPC-3细胞对吉西他滨的敏感性。
- 高崇崇徐小兰李非刘爽崔叶青孙海晨武玉多
- 关键词：胰腺癌细胞株吉西他滨药物敏感性
- Caveolin-1蛋白对乳腺癌耐药细胞株Hs578T/Dox生长凋亡的影响被引量：3
- 2009年
- 背景与目的:作为信号转导枢纽的Caveolae与恶性肿瘤发生和耐药密切相关,Caveolin-1为其标志蛋白。本研究探讨Caveolin-1对肿瘤耐药细胞体外生长凋亡的影响及其作用机制。方法:选用乳腺癌Hs578T阿霉素耐药细胞株Hs578T/Dox,通过基因转染技术培育Caveolin-1蛋白过表达细胞株Hs578T/Dox-cav-1作为实验组,空载体转染细胞株Hs578T/Dox-vector作为对照组,Western blot检测细胞Caveolin-1蛋白表达。研究细胞生长凋亡变化:MTT检测细胞生长曲线,流式细胞技术细胞周期分析,检测软琼脂集落形成能力。细胞培养48h,流式细胞技术检测细胞自然凋亡指数;加入凋亡诱导剂-星形孢菌素细胞培养8h,检测星形孢菌素诱导细胞凋亡指数。结果:Hs578T/Dox-cav-1较Hs578T/Dox-vector的Caveolin-1蛋白稳定过表达。Hs578T/Dox-cav-1与Hs578T/Dox-vector细胞生长曲线比较,生长明显增快(P<0.01),软琼脂培养集落形成体积增大、数目增加[(983.6±75.0)vs(700.8±78.9),P<0.01]。细胞周期分析,Hs578T/Dox-cav-1细胞S期和G2/M期细胞比率增大,增殖指数升高[(76.6±4.0)%vs.(58.0±4.1)%]。细胞自然凋亡指数[(5.7±0.5)%vs.(11.3±0.8)%]和星形孢菌素诱导凋亡指数[(13.8±1.2)%vs.(21.4±1.89)%]下降。结论:高表达Caveolin-1蛋白使乳腺癌阿霉素耐药细胞Hs578T/Dox具有更强的生长能力和抗凋亡能力。
- 郑亚民李非齐保聚王晓辉孙海晨刘爽
- 关键词：CAVEOLIN-1乳腺肿瘤凋亡
- 重症急性胰腺炎对血清胰岛素和胰高血糖素影响的实验研究被引量：7
- 2005年
- 目的研究重症急性胰腺炎对血清胰岛素和胰高血糖素的影响。方法应用3.5%牛磺胆酸钠逆行注入大鼠胰胆管,制作大鼠重症急性胰腺炎6h、24h、48h、72h动物模型,对胰腺病理损伤评分;免疫组化方法观察胰腺Bcl-2表达情况;放射免疫分析法测定血清胰岛素、胰高血糖素水平。结果重症急性胰腺炎大鼠造模后,随时间延长胰腺损伤加重,以24h为最;重症急性胰腺炎组大鼠血清胰岛素水平与实验对照组、正常对照组在24h、48h、72h相比明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。重症急性胰腺炎大鼠血清胰高血糖素水平制模后6h、24h、48h、72h与实验对照组、正常对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论重症急性胰腺炎对胰腺内分泌有较大影响,在重症急性胰腺炎早期内分泌功能损伤的同时,机体可能存在一定的保护机制,Bcl-2可能参与了保护作用。
- 刘东斌孙家邦李非张淑文孙海晨崔叶青刘爽刘大川
- 关键词：重症急性胰腺炎胰高血糖素血清胰岛素水平免疫组化方法牛磺胆酸钠胰腺内分泌
- PSP/reg与PAPI基因在实验性急性胰腺炎中的表达及意义
- ＜正＞急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）是临床常见的急腹症之一,其发病机理至今仍不十分清楚。近些年来,一组分子量为16KDa 的蛋白,包括胰腺炎相关蛋白（pancreatitis associate...
- 梁阔李非张淑文崔叶青刘爽孙海晨
- 关键词：胰腺炎胰腺炎相关蛋白
- 文献传递
- 鹅脱氧胆酸损害肝细胞机制初探
- 2000年
- 目的 利用原代培养肝细胞 ,研究鹅脱氧胆酸损害肝细胞机制。方法 SD大鼠肝细胞原代短期培养 ,分别加入不同浓度的甘氨鹅脱氧胆酸 (glycochenodeoxycholate ,GCDC)后 ,流式细胞术检测凋亡细胞和坏死肝细胞的比例 ;抽提DNA电泳 ;涂片后生物素 dUTP标记凋亡细胞。胆总管结扎SD大鼠肝组织免疫组织化学染色检测Bcl 2基因表达。肝细胞与 10 0 μmol/LGCDC和不同浓度的果糖培养后 ,同法流式细胞术检测凋亡细胞的比率。结果 加入GCDC后肝细胞的凋亡率随着GCDC的浓度增加和作用时间的延长而增加 (2 9%到 6 2 % ,P <0 0 1) ;坏死细胞率和凋亡细胞率之间无相关性 (r=0 45 71,P >0 0 5 )。胆总管结扎后早期 (3、7d)Bcl 2表达阴性 ,结扎 14d后Bcl 2表达阳性。相同条件下 ,10 0 μmol/L的GCDC作用胆总管结扎组肝细胞的凋亡率较正常对照组肝细胞低(P <0 0 5 )。随着果糖浓度的提高 ,肝细胞的凋亡率逐渐降低 (5 0± 4) %到 (2 8± 4) %。果糖浓度与肝细胞凋亡率密切相关 (r=0 9772 ,P <0 0 1)。结论 GCDC诱发肝细胞凋亡。机体通过表达Bcl 2基因拮抗GCDC诱导的凋亡。果糖对GCDC诱发肝细胞凋亡有保护作用。
- 李铎孙家邦孙海晨李非刘福晋刘爽
- 关键词：肝细胞鹅脱氧胆酸细胞凋亡
- 早期和延迟腹腔镜胆囊切除术治疗轻度胆源性胰腺炎随机对照研究荟萃分析被引量：1
- 2021年
- 目的探讨腹腔镜胆囊切除术治疗轻度胆源性胰腺炎的手术干预时机。方法检索Pubmed、MEDLINE、Embase、Cochrane Library、CBMdisc、万方数据库,收集2000年1月至2021年1月间公开发表的关于早期和延迟胆囊切除术治疗轻度胆源性胰腺炎随机对照研究(RCT)的中英文文献。主要研究指标为胆囊结石相关并发症复发所致的再入院率,次要研究指标包括术中和术后并发症发生率、腹腔镜中转开腹率、胆绞痛发生率、手术困难程度、死亡率、手术时间和住院时间等。上述指标均采用RevMan 5.2软件进行分析。结果最终纳入5项RCT共629例患者,其中318例行早期腹腔镜胆囊切除术(早期组),311例行延迟腹腔镜胆囊切除术(延迟组)。与延迟组相比,早期组患者因胆囊结石相关并发症复发所致的再入院率显著减少(OR=0.15,95%CI:0.08~0.28,P<0.001)。然而,在术中并发症发生率(OR=0.57,95%CI:0.17~1.84,P=0.34)、术后并发症(OR=0.77,95%CI:0.38~1.55,P=0.46)发生率、腹腔镜中转开腹率(OR=1.57,95%CI:0.69~3.54,P=0.28)方面,两组患者差异无统计学意义。结论轻度胆源性胰腺炎早期行腹腔镜胆囊切除术是一种安全、有效的治疗方式,其可以在不增加术中和术后并发症发生率的情况下,显著降低胆囊结石相关并发症复发所致的再入院率。
- 郑智丁乙轩郭玉霖刘爽孙海晨曹锋李非
- 关键词：胆源性胰腺炎胆囊切除术手术时机
