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王林: 作品数：16 被引量：25H指数：3; 供职机构：河北医科大学第四医院更多>>; 发文基金：河北省科技厅科技攻关项目河北省卫生厅医学科学研究重点课题国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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Gli抑制剂GANT61对食管鳞癌细胞生长抑制作用的研究被引量：1: 2016年; 目的 Hedgehog信号通路的异常活化与多种肿瘤的发生、发展关系密切,Gli是该通路的重要组成部分。本研究分析Gli抑制剂GANT61对人食管鳞癌细胞OE21和KYSE-30生长抑制作用,并探讨其抗肿瘤作用机制。方法采用不同浓度GANT61处理OE21和KYSE-30细胞,MTS法检测细胞活力;实时荧光定量PCR检测GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对Gli1和Gli2mRNA的影响;蛋白质印迹法观察GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对Gli1、Gli2和Cyclin D1蛋白表达的影响。Transwell侵袭实验观察GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对侵袭能力的影响。结果GANT61对OE21和KYSE-30细胞有明显的生长抑制作用并且呈剂量依赖性,MTS显示GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞72h的IC50值分别为4.7和8.2μmol/L。GANT61可显著下调OE21细胞Gli1(z=-1.98,P=0.04)和Gli2(z=-1.99,P=0.04)mRNA以及Gli1、Gli2和Cyclin D1蛋白表达。GANT61可显著下调KYSE-30细胞Gli1(z=-3,58,P<0.001)和Gli2(z=-2.282,P=0.004)mRNA以及Gli1、Gli2和Cyclin D1蛋白表达。Transwell侵袭实验显示,OE21细胞GANT61组穿膜细胞数为53±6.78,较DMSO组的140±11.02减少,t=12.888,P<0.001;KYSE-30细胞GANT61组穿膜细胞数为58.2±7.59,较DMSO组的133.4±9.37减少,t=11.452,P<0.001。结论 GANT61可以通过下调Gli1和Gli2的表达显著抑制OE21和KYSE-30细胞的细胞生长和侵袭能力,Gli可能成为抑制食管鳞癌细胞增殖和转移的新的分子靶点。; 王雷王林杜华贞米源王娜杜媛鲲; 关键词：食管鳞癌 HEDGEHOG信号通路 GLI

siRNA下调Gli基因影响食管腺癌OE33细胞生长转移的实验研究被引量：1: 2018年; 目的研究Gli表达下调对食管腺癌OE33细胞生长转移的影响,并探讨其相关的分子机制。方法将Gli1、Gli2 si RNA和空白对照si RNA转染OE33细胞48 h,实时荧光定量聚合酶链反应检测OE33细胞Gli1和Gli2 m RNA表达水平;采用Western blot检测OE33细胞中Gli1、Gli2、Cyclin D1、p27、E-cadherin及N-cadherin蛋白的表达水平;流式细胞术检测OE33细胞增殖和细胞周期分布;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果采用Gli1和Gli2 si RNA抑制Gli1和Gli2 m RNA及蛋白表达后,可下调Cyclin D1和N-cadherin蛋白表达,增加E-cadherin和p27蛋白表达,同时抑制细胞增殖,将细胞周期阻滞在G_0/G_1期并降低细胞的侵袭能力,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Gli在食管腺癌的生长转移中具有重要作用,敲掉Gli1和Gli2基因表达可抑制食管腺癌细胞周期分布和上皮-间质转化能力,这可能与Cyclin D1、p27、E-cadherin及N-cadherin蛋白变化相关。; 王雷杜媛鲲刘庆熠米源廖海江王林; 关键词：RNA干扰食管腺癌 GLI 上皮-间质转化

Gli表达下调对人胃腺癌AZ521细胞生长、转移的影响及机制被引量：4: 2016年; 目的探讨锌指蛋白(Gli)表达下调对人胃腺癌AZ521细胞生长、转移的影响,并探讨其分子机制。方法将培养好的人胃腺癌AZ521细胞随机分为实验组和空白对照组,分别用Gli1&Gli2 siRNA、对照siRNA进行转染。转染48 h收集细胞,用RT-PCR技术检测细胞内Gli1、Gli2 mRNA表达;Western blotting法检测细胞内Gli1、Gli2、细胞周期蛋白E(Cyclin E)、p21、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果转染48 h,与空白对照组比较,实验组Gli1、Gli2 mRNA和蛋白表达下调,Cyclin E、Vimentin和MMP-9蛋白表达下调,E-cadherin、p21蛋白表达上调,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,侵袭能力降低(P均<0.05)。结论同时下调Gli1、Gli2基因表达可阻滞胃腺癌AZ521细胞周期、降低细胞侵袭能力,其机制可能与二者调节Cyclin E、p21、E-cadherin、Vimentin和MMP-9的表达有关。; 米源杜媛鲲刘庆熠廖海江王林王雷; 关键词：锌指蛋白基因细胞侵袭

抗原致敏IL-27基因修饰的树突细胞活化的细胞毒性T淋巴细胞对食管癌裸鼠移植瘤生长的影响被引量：7: 2014年; 目的研究白细胞介素27(IL-27)基因转染树突细胞(DC)体内诱导免疫杀伤食管癌细胞的效能及其机制。方法采用基因转染的方法建立表达IL-27基因的树突细胞(DCIL-27),构建人食管癌裸鼠移植瘤模型,皮下注射食管癌细胞抗原致敏、IL-27基因修饰的DC(DCIL-27+Ag)活化的特异细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。30只裸鼠分为PBS组、Tnaive组、DC+Tnaive组、DCIL-27+Tnaive组和DCIL-27+Ag+Tnaive组,每组6只。观察荷瘤裸鼠的肿瘤体积、瘤重和抑瘤率,流式细胞术检测移植瘤细胞的细胞周期、凋亡率及凋亡相关蛋白Fas和caspase-3的表达。结果 RT-PCR结果显示,DCIL-27细胞中有IL-27 p28和EBI3亚基基因表达,提示转染成功。DCIL-27+Ag+Tnaive组裸鼠移植瘤的体积和重量明显下降,抑瘤率为58.28%,明显大于其他各组(P<0.01)。流式细胞术分析显示,DCIL-27+Ag+Tnaive组裸鼠肿瘤组织内细胞增殖指数为23.92±1.60,显著低于其他各组,细胞凋亡率为32.78%±0.83%,明显高于其他各组(P<0.01)。DCIL-27+Ag+Tnaive组Fas和caspase-3蛋白表达水平均明显高于其他各组(P<0.01)。结论食管癌细胞抗原致敏、IL-27基因修饰DC可活化特异性CTL,且在荷瘤小鼠体内对食管癌细胞具有明显的细胞毒作用,其机制可能是通过Fas/FasL途径抑制食管癌细胞的体内增殖并促进其凋亡。; 王雷刘丽华刘庆熠王林刘亮单保恩; 关键词：白细胞介素类逆转录病毒科

食管鳞癌组织中Shh和Gli1的表达及其临床意义被引量：1: 2015年; 目的探讨Hedgehog（Hh）信号通路中Shh和Gli1与食管鳞状细胞癌的关系。方法应用免疫组积化学sP法检测食管鳞癌组织（n=64）和正常食管黏膜组织（n=24）中Shh和Gli1蛋白的表达情况。结果食管鳞癌组织中Shh和Gli1的阳性表达率均显著高于正常食管黏膜组织[67．19％（43／64）与4．17％（1／24），60．94％（39／64）与4．17％（1／24）]，差异均有统计学意义（χ2值分别为27．729、22．689，P均〈0．01）。Shh蛋白的表达在食管鳞癌细胞的不同分化组、不同临床分期组间及有无淋巴结转移组差异均有统计学意义（χ2值分别为3．873、11．349和6．429，P〈0．05或P〈0．01）；Gli1表达率在食管鳞癌细胞的不同分化组、不同临床分期组间及有无淋巴结转移组差异均有统计学意义（χ2值分别为12．598、9．741和26．341，P均〈0．01）；食管鳞癌组织中Shh与Gli1表达呈显著正相关（r=0．259，P〈0．05）。结论Hh信号通路在食管鳞癌组织中异常活化，Shh、Gli1表达与食管鳞癌发生发展及侵袭转移有关，可能成为新的治疗食管鳞癌的靶点。; 张晚鱼王林米源王雷; 关键词：食管鳞癌 HEDGEHOG信号通路

食管鳞癌组织中PI3K和caspase-3的表达及其临床意义: 2014年; 目的研究PI3K和caspase-3在食管鳞癌组织(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及其与食管肿瘤发生、发展与转移的关系。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶链结(SP)法检测24例正常食管黏膜、94例食管鳞癌组织中PI3K和caspase-3的表达情况,并分析其与临床病理特征之间的关系。结果PI3K在食管鳞癌中的表达高于正常食管黏膜(P<0.01);PI3K蛋白在高-中分化鳞癌中表达低于低分化鳞癌,随着浸润深度和临床分期的增加,其表达阳性率增高,在淋巴结转移阳性组的表达高于阴性组(92.0%vs 47.7%,P<0.01);而caspase-3阳性表达与PI3K相反,高-中分化鳞癌中表达高于低分化鳞癌,随着浸润深度和临床分期的增加,其表达阳性率降低,在淋巴结转移阳性组的表达低于阴性组(38.0%vs 68.2%,P<0.01);PI3K与caspase-3表达有关联(r=-0.230,P<0.05)。结论 PI3K高表达和caspase-3低表达与食管鳞癌发生发展及侵袭转移存在协同作用,是反映食管鳞癌生物学行为的重要指标。; 崔刚王雷冯巧荣李超张晚鱼孔国平王林; 关键词：食管鳞癌半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶磷酸肌醇 CASPASE-3

Gli抑制剂GANT61对肺癌细胞生长的抑制作用被引量：3: 2016年; 目的研究GANT61对人肺癌细胞H1703和A549生长抑制作用,并探讨其作用机制。方法培养H1703和A549细胞,加入不同浓度GANT61 72 h后MTS法检测药物对细胞生长的抑制率;Western blot法观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对Gli1和Gli2蛋白表达的影响。Transwell侵袭实验观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对侵袭能力的影响。结果 MTS显示GANT61作用于H1703和A549的IC50值分别是8.6μmol/L和8.2μmol/L,GANT61对H1703和A549细胞有明显的生长抑制作用并且呈剂量依赖性。Western blot显示GANT61可显著下调H1703和A549细胞Gli1和Gli2蛋白的表达。Transwell侵袭实验显示GANT61处理组H1703和A549细胞的侵袭能力均明显下降。结论GANT61可以明显抑制H1703和A549的细胞活力和侵袭能力,这表明Hedgehog通路的Gli1和Gli2在肺癌的发生和发展中起着重要作用,Gli有望成为新的抗肿瘤靶点。; 王雷王林米源; 关键词：肺癌 HEDGEHOG信号通路

食管鳞癌组织和淋巴结中血管内皮生长因子C的表达及其意义被引量：1: 2013年; 目的研究血管内皮生长因子c（VEGF-c）在食管鳞癌组织中的表达及其与食管鳞癌细胞侵袭与转移的关系。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶链接法（sP）检测24例正常食管黏膜、94例食管鳞癌和83例淋巴结中VEGF-C的表达情况。结果食管鳞癌组织中VEGF-C的表达率高于正常食管黏膜（78．7％vs4．2％，P〈O．01）；食管癌临床分期0～Ⅱ期中VEGF-C表达率低于Ⅲ～Ⅳ期（68．0％vs90．9％，P〈0．05）；转移淋巴结组织中VEGF—C表达率高于无转移淋巴结组织（80．0％ VS 25．6％，P〈0．01）。结论VEGF-C在食管癌组织和转移淋巴结中高表达，在食管癌的发生、发展过程中具有重要作用，可作为评价食管癌生物学行为的指标。; 张建英李超崔刚王雷王林; 关键词：食管肿瘤血管内皮生长因子C

Gli抑制剂GANT61抑制食管腺癌细胞发生上皮-间质转化被引量：3: 2016年; 目的:研究Gli抑制剂GANT61对人食管腺癌细胞OE19和OE33发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,并探讨其可能的抗肿瘤机制。方法:用GANT61(10μmol/L)和重组sonic hedgehog(Shh)蛋白(0.5mg/mL)(阳性对照组)处理OE19和OE33细胞24 h后,分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测OEl9和OE33细胞中Gli1、Gli2、波形蛋白(vimentin)、N-钙黏连蛋白(N-cadherin,N-cad)和E-钙黏连蛋白(E-cadherin,E-cad)mRNA和蛋白表达的变化,划痕愈合实验观察OE19和OE33细胞迁移能力的变化。结果:实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,GANT61处理OE19和OE33细胞24 h后,可以明显下调细胞中Gli1、Gli2、vimentin和N-cad mRNA和蛋白的表达水平,而上调E-cad mRNA和蛋白的表达水平(P值均<0.01)重组Shh蛋白可以上调Gli1、Gli2、vimentin和N-cad mRNA及蛋白的表达水平,下调E-cad mRNA和蛋白表达(P值均<0.01)。划痕愈合实验结果显示,GANT61可以显著降低OE19和OE33细胞的迁移能力,而重组Shh蛋白则促进肿瘤细胞的迁移能力(P值均<0.01)。结论:GANT61可以通过抑制Hedgehog信号通路中Gli1和Gli2的表达来影响食管腺癌发生EMT,从而导致肿瘤细胞迁移能力的降低。预测Gli可成为有效抑制食管腺癌细胞转移的新的分子靶点。; 王雷王林米源廖海江; 关键词：食管肿瘤 HEDGEHOG信号通路上皮-间质转化

siRNA下调Gli基因表达对食管鳞癌KYSE-30细胞生物学行为的影响被引量：1: 2016年; 目的探讨Gli表达下调对食管鳞癌KYSE-30细胞周期分布和上皮-间质转化能力的影响及其分子机制。方法将Gli1和Gli2 si RNA和空白对照si RNA分别转染KYSE-30细胞48 h,实时荧光定量PCR法检测Gli1、Gli2 m RNA表达水平;Western blot法检测KYSE-30细胞Gli1、Gli2、Cyclin D1、Cyclin D2、p21、波形蛋白(Vimentin)和β-catenin蛋白的表达;流式细胞术检测KYSE-30细胞周期分布;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果与空白对照si RNA组相比,Gli1和Gli2 si RNA可明显抑制KYSE-30细胞Gli1、Gli2 m RNA和蛋白表达,下调Cyclin D1、Cyclin D2、Vimentin和β-catenin蛋白的表达和增加p21蛋白表达,将细胞周期阻滞在G0/G1期并降低细胞的侵袭能力,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 Gli蛋白表达可能在食管鳞癌的发生发展中具有重要作用,下调Gli1和Gli2表达可导致食管鳞癌细胞增殖、细胞周期分布和上皮-间质转化能力的改变,这可能与Cyclin D1、Cyclin D2、p21、Vimentin和β-catenin蛋白变化相关。; 王雷杜媛鲲刘庆熠米源廖海江王娜王林; 关键词：食管鳞癌 GLI 上皮-间质转化

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