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红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因eryK的克隆及原核表达: 2008年; 目的:探讨红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因eryK在大肠杆菌中的最佳表达条件。方法:将eryK基因克隆到表达质粒pET-22b(+),使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,并对装液量、接种量、诱导时间、IPTG浓度和FeC l3浓度等表达条件进行优化。结果与结论:SDS-PAGE电泳显示,在相对分子质量44×103处有EryK蛋白条带,其含量占菌体总蛋白的58%以上。证明高GC含量的红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因EryK可以在大肠杆菌BL21(DE3)中高效地表达,为体外研究EryK酶学相关性质以及大规模发酵奠定了基础。; 赵皓黄训端张部昌孔小卫张书祥查向东; 关键词：红色糖多孢菌

一种产红霉素B的糖多孢红霉菌突变体的构建方法: 本发明公开了一种产红霉素B的糖多孢红霉菌突变体的构建方法。利用染色体同源重组技术，将糖多孢红霉菌中羟基化酶基因eryK中101个碱基(GeneBank no.NC_009142，779246－779346)敲除，其对应的...; 张部昌赵皓; 文献传递

糖多孢红霉菌eryK基因的原核表达及基因失活: 红霉素A(erythromycin A，ErA)的生物合成需要经过两次羟基化后修饰,第一次羟基化发生在6-脱氧红霉内酯B(6-deoxyerythronolide B,6-dEB)的C-6位,由羟基化酶EryF催化;第二...; 赵皓; 关键词：糖多孢红霉菌基因失活原核表达酶学性质生物合成; 文献传递

产红霉素C的糖多孢红霉菌A226G^-突变体的构建被引量：4: 2008年; 糖多孢红霉菌eryG基因编码产物为红霉素3"-O-甲基转移酶(EryG),失活eryG基因能阻断红霉素A的生物合成,积累其中间产物红霉素C。以糖多孢红霉菌A226基因组DNA为模版,用重叠PCR方法扩增出eryG基因两侧约1600bp DNA片段(ΔG),其中去除了EryG上S-腺苷甲硫氨酸结合区域对应的290bp DNA片段。将该片段克隆于质粒pWHM3,构建了同源重组质粒pWHMΔG。PEG介导原生质体转化法将pWHMΔG转入糖多孢红霉菌A226中,通过染色体同源重组突变染色体上eryG基因。利用薄层层析、PCR和质谱方法筛选出一株eryG基因突变的糖多孢红霉菌A226G-突变体,此突变体主要积累中间产物红霉素C而不再合成红霉素A。通过eryG基因的功能补偿,糖多孢红霉菌基因工程菌A226G-G+可以恢复红霉素A的合成能力。; 袁华黄训端张部昌刘道琴赵皓孔小卫张书祥; 关键词：糖多孢红霉菌红霉素同源重组

产红霉素B红色糖多孢菌突变体的构建(英文)被引量：1: 2009年; 目的:获得大量红霉素合成中间产物红霉素B,并进一步研究eryK基因的活性位点。方法:通过重叠PCR将eryK基因中包括BC环在内的关键氨基酸序列删除,克隆到同源重组质粒pWHM3上,继而通过染色体同源重组方法将EryK羟基化酶基因失活,构建了缺失C-12羟基化酶活性的红色糖多孢菌突变体。结果与结论:构建了红色糖多孢菌突变菌株AK17,对发酵产物进行TLC和MS分析,结果显示突变体主要合成红霉素B。; 赵皓董翔张部昌袁华黄训端张书祥

红色糖多孢菌表达载体pZW的构建: 2007年; 目的:对红色糖多孢菌染色体整合型表达载体pZMW进行改进,以提高表达载体稳定性和表达外源基因效率。方法:以pSET152和pET-22b(+)为出发质粒,用PCR方法从红色糖多孢菌染色体DNA上扩增红霉素抗性基因启动子PermE作为表达载体启动子,并利用pSET152质粒上链霉菌染色体整合位点(attP)和安普霉素抗性基因,构建了红色糖多孢菌表达载体pZW。结果:与pZMW相比,pZW表达载体只有1个大肠杆菌质粒复制子,质粒减小2 530 bp,同时在链霉菌属细菌和红色糖多孢菌中能够表达硫链丝菌肽抗性基因(thio)和荧光蛋白基因(EGFP)。结论:pZW质粒能够在链霉菌属细菌和红色糖多孢菌中稳定表达外源基因。; 魏魏张部昌袁华赵皓彭惠; 关键词：红色糖多孢菌红霉素

红霉素3"-O-甲基转移酶基因eryG克隆及表达被引量：1: 2008年; 目的:探索红色糖多孢菌红霉素eryG基因在大肠杆菌中的最佳表达条件。方法:以红色糖多孢菌总DNA为模板,PCR扩增出eryG基因序列,克隆到原核表达载体pET-22b(+)上,并使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。从诱导剂IPTG的终浓度和诱导时间两个因素来优化eryG基因的表达条件。结果:eryG基因可以在大肠杆菌中表达,表达产物EryG经SDS-PAGE分析相对分子质量约为33×103。表达条件经优化后,重组蛋白EryG表达量占菌体总蛋白的55%以上。结论:红色糖多孢菌红霉素eryG基因可以在大肠杆菌中高效地表达,为进一步研究EryG的相关酶学性质、分析其对红霉素发酵产物的影响奠定了基础。; 袁华张部昌赵皓孔小卫黄训端查向东张书祥; 关键词：红色糖多孢菌红霉素

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赵皓