陈昭烈
- 作品数：145 被引量：368H指数：8
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>
- 用微量细胞病变抑制法观察三种天然人干扰素的协同抗病毒作用被引量：2
- 1994年
- 用微量细胞病变抑制法观察天然α，β，γ干扰素（ｎｈｕＩＦＮ－α，β，γ）在体外诱导ＨＥｐ－２细胞的抗病毒协同作用。ｎＨｕＩＦＮ－γ和ｎＨｕＩＦＮ－α或ｎＨｕＩＦＮ－β共同作用于ＨＥｐ－２细胞表现为抗病毒协同增强效应；ｎＨｕＩＦＮ－α和ｎＨｕＩＦＮ－β共同作用于ＨＥｐ－２细胞只表现为抗病毒协同相加效应。实验结果表明：ｎＨｕＩＦＮ－γ和ｎＨｕＩＦＮ－α或ｎＨｕＩＦＮ－β的抗病毒协同增强作用，与不同干扰素（ＩＦＮ）处理ＨＥｐ－２的顺序及ＩＦＮ的浓度比例有关；ｎＨｕＩＦＮ－γ与ｎＨｕＩＦＮ－α的抗病毒协同增强作用是细胞接受ＩＦＮ作用后早期即发生的现象。
- 陈昭烈吴本传郭智霞肖成祖
- 关键词：干扰素
- 用悬浮搅拌培养体系体外大量扩增人脐血造血干/祖细胞被引量：1
- 2002年
- 目的 :建立一种简便、有效的脐血造血干 /祖细胞体外大量扩增培养体系。方法 :淋巴细胞分离液分离的脐血单个核细胞在SCF ,IL - 3,IL - 6三种细胞因子的作用下 ,于悬浮搅拌培养体系中培养 ,分析其总细胞数、CFU -GM、CD34+ 细胞的扩增倍数。结果 :脐血单个核细胞在悬浮搅拌培养体系中培养 12天后 ,其总细胞数、CFU -GM、CD34+ 细胞的扩增倍数分别为 6 .31± 1.5 2 ,2 0 .6 3± 1.5 4和 7.11± 1.12。结论 :悬浮搅拌培养体系是脐血造血干 /祖细胞体外大量扩增的有效培养体系。
- 熊福银陈昭烈刘红胥照平刘兴茂
- 关键词：体外大量扩增
- 重组人尿激酶原在CHO细胞中的高效表达及其纯化
- 2012年
- 用鸡β-globin的MAR序列和人看家基因延伸因子1α(hEF-1α)的调控序列以及旱獭RNA稳定与输出序列,构建了重组人尿激酶原(recombinant human pro-urokinase,rhPro-UK)的高效表达载体,在CHO细胞中获得了rhPro-UK的高效稳定表达,rhPro-UK的表达水平达到1 299 IU(以百万细胞1 d的表达量计)。采用阳离子交换层析、疏水层析和凝胶排阻层析的三步工艺纯化表达rhPro-UK的CHO细胞培养上清液,rhPro-UK的纯度达到98%、回收率为60%～70%。
- 李世崇叶玲玲刘红张正光高丽华胡显文陈昭烈
- 关键词：CHO细胞重组人尿激酶原纯化
- 基因修饰的胚胎干细胞作为种子细胞构建血管化心肌组织
- 胚胎干细胞(embryonic stem cells．ESC)具有多能性,可在体外无限增殖,又能分化为心肌细胞,是目前用于构建工程化心肌组织最有前途的细胞来源之一.ESC应用于临床的最大障碍之一就是其致瘤性.如何有效地获...
- 何文俊李世崇刘红叶玲玲刘兴茂王启伟吴本传陈昭烈
- 关键词：基因修饰胚胎干细胞
- 抗CD3/抗CD20双特异性单链抗体的表达、鉴定及活性分析被引量：3
- 2005年
- 设计并合成多个 6 0bp左右的DNA小片段 ,经重叠延伸PCR扩增获得 16 4 0bp的抗CD3 抗CD2 0双特异性单链抗体完整基因片段 ,将其克隆入真核定点表达载体pcDNA5 FRT中 ,脂质体法转染Flp_InTM CHO细胞 ,获得稳定表达细胞株 ,目的蛋白在上清中的表达量约为 30 0 μg L。采用Ni_NTA柱对其进行了纯化 ,经SDS_PAGE蛋白电泳及Western_blot分析结果表明 ,含组氨酸标签的目的蛋白的分子量约为 70kD ,与预期结果一致。活细胞间接免疫荧光实验和玫瑰花环实验证明抗CD3 抗CD2 0双特异性单链抗体具有与Ramous(CD2 0 +)及Jurkat(CD3+)细胞特异性结合的活性。光学显微镜下可以观察到抗CD3 抗CD2 0双特异性单链抗体可以有效介导人外周血淋巴细胞裂解B淋巴瘤细胞Ramous。以上工作为进一步了解抗CD3 抗CD2 0双特异性单链抗体的体内体外生物学活性奠定了基础。
- 于蕊李世崇吴本传刘红叶玲玲陈昭烈
- 关键词：双特异性单链抗体坚定活性分析
- 蛋白质不稳定性及其分析技术被引量：7
- 2003年
- 蛋白质不稳定性包括两种形式:化学不稳定性和物理不稳定性,这两种不稳定性可采取不同的分析 技术。了解蛋白质不稳定性及其分析技术在生物工程药物的质量控制中有十分重要的作用。
- 李世崇陈昭烈
- 关键词：蛋白质分析技术
- 活化素A和视黄酸诱导骨髓间充质干细胞体外分化为胰岛素分泌细胞(英文)被引量：2
- 2006年
- 背景:胰岛移植是治疗Ⅰ型糖尿病的最有效的方法。然而,供体组织来源的匮乏限制了其应用。近来干细胞研究的进展表明,干细胞疗法可能解决这一问题。目的:采用活化素A和视黄酸诱导骨髓间充质干细胞分化,探讨骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的可能性。设计:随机对照实验。单位:解放军军事医学科学院生物工程研究所。材料:实验于2004-11/2005-06在解放军军事医学科学院生物工程研究所完成。Sprague-Dawley大鼠6只,雄性,体质量150～160g,由解放军军事医学科学院实验动物中心提供。方法:无菌抽取大鼠股骨骨髓,采用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞。传代细胞随机分为4组,高糖组、活化素A和视黄酸组、β-巯基乙醇组和阴性对照组。分别采用含有高糖、活化素A和视黄酸、β-巯基乙醇等刺激因素的条件培养基进行诱导。应用免疫细胞化学和反转录聚合酶链反应等方法对分化细胞表型进行检测。主要观察指标:检测胰岛素和胰高血糖素,以及胰岛素1mRNA的表达。结果:骨髓间充质干细胞经过诱导后,①在高糖诱导组中,有散在的胰岛素和胰高血糖素阳性反应细胞出现。②活化素A和视黄酸组及β-巯基乙醇组有较多的胰岛素和胰高血糖素阳性反应细胞出现,而且这些细胞形成类似胰岛样的结构。③高糖组,活化素A和视黄酸组,β-巯基乙醇组均可见胰岛素1mRNA的表达。④阴性对照组未见有胰岛素和胰高血糖素阳性反应细胞出现以及胰岛素1mRNA的表达。结论:实验建立的一种基于活化素A和视黄酸及其他成熟因子的一种诱导方案,成功将骨髓间充质干细胞诱导分化为胰岛素阳性反应细胞,并且形成类似胰岛样结构,但其诱导效率有待进一步提高。
- 王启伟于瑾刘兴茂李世崇叶玲玲刘红吴本传陈昭烈
- 关键词：干细胞胰岛素细胞分化
- 基于流式细胞术分选的高效表达外源基因细胞的筛选被引量：2
- 2009年
- 目的:以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因,用流式细胞术筛选高表达EGFP的细胞,从而获得外源基因高效表达细胞株。方法:构建在EGFPC端编码区融合新霉素(neomycin)抗性基因的融合基因EGFP-Neomycin,将其插入pcDNA3.1(+)载体,构建EGFP-Neomycin融合基因表达载体pcDNAEN,转染CHO-K1细胞,G418加压筛选和倒置荧光显微镜观察证实所表达的EGFP-Neomycin融合蛋白具有新霉素抗性和激发EGFP荧光双功能;将编码组织型纤溶酶原激活剂(tPA)的cDNA插入pcDNAEN中CMV启动子下游,构建表达tPA的表达载体pcDNAEN/tPA。结果:流式细胞术分析和tPA纤维蛋白溶解活性测定表明,pcDNAEN/tPA转染CHO-K1细胞的EGFP相对荧光强度(RFT)的自然对数值与tPA表达水平呈明显的直线相关关系,相关系数为0.983;比较部分未经流式细胞仪分选的pcDNAEN/tPA转染阳性细胞克隆和RFT分布在100～1000的pcDNAEN/tPA转染阳性细胞克隆的tPA表达水平,经流式细胞术分选获得的细胞克隆的tPA平均表达水平和最高表达水平分别是未经分选获得的细胞克隆的3.9倍和4.1倍。结论:构建的EGFP-Neomycin融合基因具有双功能,建立了利用流式细胞术筛选外源基因高效表达物细胞株的方法。
- 李世崇叶玲玲刘红刘兴茂王启伟吴本传黄培堂陈昭烈
- 关键词：外源基因细胞
- 微载体高密度培养Vero细胞的研究被引量：25
- 1996年
- 微载体是动物细胞高密度培养的有效手段。首先在硅化的方瓶中对Ｃｙｔｏｄｅｘ１、Ｃｙｔｏｄｅｘ３、Ｂｉｏｓｉｌｏｎ、Ｂｅｌｌｃｏ Ｇｌａｓｓ Ｍｉｃｒｏｃａｒｒｉｅｒ、ＣＴ－１、ＣＴ－３、ＭＣ－１、ＣＴ－２８种国产和进口微载体进行了比较和筛选。确定以Ｂｉｏｓｉｌｏｎ作为Ｖｅｒｏ细胞高密度培养的首选微载体。用５００ｍｌ Ｗｈｅａｔｏｎ搅拌瓶探索影响Ｖｅｒｏ细胞高密度培养的条件。
- 王佃亮肖成祖陈昭烈黄子才
- 关键词：动物细胞培养微载体VERO细胞
- 禽类多能干细胞的研究与应用被引量：1
- 2009年
- 禽类多能干细胞是一种未分化的细胞,来源于X期未孵化的胚盘细胞或5.5 d性腺的原始生殖细胞,具有自我更新能力,并能分化为所有类型细胞,包括生殖系。禽类多能干细胞最重要的应用就是在体外对其基因组进行特异性修饰,用来制备转基因禽类。禽类多能干细胞的培养已取得显著进步,随着对其多能性分子基础等研究的深入,禽类多能干细胞也将得到充分运用。综述了禽类多能干细胞的培养方法、生物学特性及其应用进展。
- 何文俊叶玲玲陈昭烈
- 关键词：禽类胚胎干细胞胚胎生殖细胞原始生殖细胞嵌合体
