刘兴茂
- 作品数：60 被引量：72H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 基于HEK细胞无载体固定化培养技术的重组腺病毒载体高效生产工艺
- 重组腺病毒载体是基因治疗研究和临床应用中将治疗基因有效地介入靶细胞和／或靶组织的最常用病毒载体。重组腺病毒载体的生产通常是通过将其感染人胚肾细胞(humanembryonickidneycells,HEK细胞)、使其在H...
- 刘兴茂刘红吴本传李世崇叶玲玲王启伟倪小平陈昭烈
- 文献传递
- 腺病毒E1B-19K基因过表达对HEK293细胞生长和代谢的影响
- 2012年
- 细胞凋亡是动物细胞大规模培养中影响活细胞密度和目的产品质量的重要因素,过表达抗凋亡基因是目前常用的提高工程细胞凋亡抗性的一种策略。拟在HEK293细胞中过表达腺病毒E1B-19K基因,挑取了不同E1B-19K表达水平的单克隆细胞,考察在不同培养条件下细胞的凋亡水平和代谢情况。E1B-19K的过表达可显著增强细胞在低葡萄糖、低血清和无谷氨酰胺3种培养条件下的抗凋亡能力,使凋亡细胞比例降低60%～80%;E1B-19K的过表达可使批次培养HEK293细胞的衰退期延迟2天,而对细胞的葡萄糖、乳酸和谷氨酰胺等的代谢无显著影响。结果表明,过表达E1B-19K是一种有效减缓HEK293细胞在培养过程中凋亡的策略。
- 叶玲玲刘红李世崇扬振西刘兴茂王启伟陈昭烈
- 关键词：基因HEK293细胞细胞培养代谢
- 流体动力对HEK293细胞的细胞团形成及细胞生长和代谢的影响被引量：2
- 2006年
- 利用HEK293细胞在悬浮培养中具有聚集成团的体外培养特性,在250mL的Bellco的搅拌培养体系中,以HEK293细胞团的粒径、细胞数、细胞活力、葡萄糖比消耗率(qglc)、乳酸比产率(qlac)和乳酸转化率(Ylacglc)为观察指标,考察HEK293细胞在搅拌速度分别设置为25、50、75和100rmin的培养条件下的细胞团形成、粒径分布以及细胞生长和代谢。HEK293细胞在搅拌速度为50rmin和75rmin培养条件下所形成细胞团的粒径大小适中、离散度小。培养7d后,HEK293细胞团的平均粒径分别为201μm和175μm,其中粒径≥225μm的细胞团所占比例均低于10%;在整个培养过程中,细胞团中的HEK293细胞活力维持在90%以上,qglc、qlac和Ylacglc等反映HEK293细胞代谢的参数保持相对恒定。实验结果提示:合适的搅拌速度所产生的流体动力既可使细胞团的粒径控制在合适的范围内,也可为细胞团中的HEK293细胞提供基本满足其正常生长和代谢需要的物质传递效率。
- 刘红刘兴茂吴本传叶玲玲倪小平黄培堂陈昭烈
- 关键词：流体动力HEK293细胞代谢
- 造血干/祖细胞体外的三维培养
- 造血干/祖细胞的体外培养对于造血干/祖细胞的生物学性质,造血调控,基因治疗的研究及其临床应用具有重要意义。由于造血干/祖细胞的生存环境是一个复杂而精细的调控系统,造血干/祖细胞的增殖有赖于造血生长因子,细胞因子的调控及不...
- 熊福银陈昭烈刘红刘兴茂
- 文献传递
- 定量检测组织型纤溶酶原激活剂夹心ELISA方法的建立被引量：4
- 2006年
- 目的:建立灵敏、特异的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)定量测定方法,为血栓性疾病和肿瘤性疾病的早期诊断及疗效评估提供辅助手段。方法:采用抗t-PA多克隆抗体包被酶联板、HRP标记抗t-PA单克隆抗体为标记抗体、重组t-PA为标准品,建立定量测定t-PA的夹心ELISA双抗体法。以t-PA测定的特异性、灵敏性和重复性评价夹心ELISA测定法。结果:夹心ELISA测定法可检测t-PA浓度为0.5ng/mL的样品,不同样品的组内和组间的变异系数分别为4.7%和8.4%。采用夹心ELISA法测定40份正常人血浆,t-PA的平均含量为(4±2.1)ng/mL。结论:夹心ELISA测定法具有灵敏性高、特异性强的特点,可用于人血浆中t-PA水平的定量测定。
- 吴本传李世崇刘红刘兴茂叶玲玲陈昭烈
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂ELISA双抗体夹心法
- 诱导表达p27对HEK293细胞生长代谢的影响
- 2011年
- 目的:研究诱导表达p27对HEK293细胞生长和代谢的影响。方法:将pTet-on载体和响应于Dox的p27诱导表达载体共转染HEK293细胞,随机挑选单克隆细胞株。以细胞周期分布和活细胞密度为主要观察指标,考察稳定转染的细胞在Dox诱导下的细胞生长;以Qglc、Qlac和Qgln为主要观察指标,考察转染细胞在Dox诱导下的细胞代谢。结果:p27基因的表达使HEK293细胞的增殖速度显著降低,G1期细胞比例显著升高,葡萄糖消耗和乳酸生产减少。结论:诱导表达p27基因是对HEK293细胞进行G1期阻滞的一种有效策略。
- 叶玲玲刘红李世崇刘兴茂陈昭烈
- 关键词：HEK293细胞细胞周期代谢P27
- 用YO-PRO-1和PI联合染色定量检测细胞凋亡被引量：4
- 2005年
- 经不同浓度staurosporine处理诱导凋亡的G7细胞样品,分别用YO-PRO-1/PI和AV/PI进行荧光染色,借助流式细胞仪检测凋亡情况,将两种检测方法得到的结果进行统计学分析显示,二者有显著的相关性(r=0.9659,P<0.01),且没有显著性差异(P<0.05);另外,上述凋亡细胞样品经YO-PRO-1/PI染色后在荧光显微镜下计数凋亡细胞比例的结果与AV/PI流式细胞仪的检测结果也有显著的相关性(r=0.9903,P<0.01),且没有显著性差异(P<0.05)。以上这些结果表明,用YO-PRO-1/PI对细胞进行染色、借助流式细胞仪和荧光显微镜均能准确地检测细胞凋亡,可替代AV/PI流式细胞仪方法用于细胞凋亡的检测。
- 叶玲玲刘红李世崇刘兴茂吴本传陈昭烈
- 关键词：PI细胞凋亡荧光显微镜流式细胞仪
- 基于枯草芽孢杆菌生物素连接酶的外源基因诱导表达调控系统及其构建方法
- 本发明公开了一种新型的真核细胞基因表达调控，该系统以枯草芽孢杆菌生物素连接酶与转录激活结构域的融合蛋白为调控元件，在生物素存在下可激活弱化启动子下游目的基因的转录。该系统具有背景表达较低、诱导率较高、响应迅速等优点，可适...
- 叶玲玲陈昭烈李世崇刘红何文俊刘兴茂王启伟
- 文献传递
- 采用细胞悬浮培养技术扩殖脐血干/祖细胞
- 自1989年Gluckman成功地将脐血移植用于治疗恶性贫血患儿以来,脐血造血干/祖细胞研究受到了极为广泛的关注。由于脐血中造血干/祖细胞的相对含量较骨髓更为丰富,且来源方便,采集容易,所以人们希望以脐血造血干细胞的移植...
- 熊福银陈昭烈刘红刘兴茂
- 文献传递
- CHO工程细胞(11G-S)悬浮培养的无血清培养基的设计被引量：6
- 2010年
- 以悬浮适应的表达重组尿激酶原(Pro-urokinase,pro-UK)CHO工程细胞系11G-S为对象,采用Plackett-Burman实验设计及响应面分析法,设计支持CHO工程细胞(11G-S)悬浮生长的无血清培养基。以细胞密度为评价指标,在单因素实验的基础上采用Plackett-Burman实验设计对影响细胞生长的培养基添加成分进行考察,确定了3种对细胞生长明显促进作用的培养基添加成分:胰岛素、转铁蛋白及腐胺。继而利用响应面法分析了这3种添加成分的最佳水平范围,设计了一种适用于CHO工程细胞(11G-S)悬浮培养的无血清培养基SFM-CHO-S。11G-S细胞在SFM-CHO-S批次悬浮培养的细胞最大生长密度达到4.12×106cells/mL,pro-UK的最大累积活性达到5614IU/mL,培养效果优于商品化的同类无血清培养基。
- 刘兴茂刘红叶玲玲李世崇吴本传王海涛谢靖陈昭烈
- 关键词：CHO工程细胞无血清培养基
