姜一峰 作品数:153 被引量:399 H指数:9 供职机构: 中国农业科学院上海兽医研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家生猪现代产业技术体系建设项目 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 轻工技术与工程 更多>>
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)5'末端病毒RNA合成相关茎环结构的界定 <正>1介绍像其他动脉炎病毒一样,猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)的5非翻译区(5''''Untranslate... 高飞 陆嘉琦 韦祖樟 袁世山 李丽薇 周艳君 姜一峰 童光志文献传递 介导PRRSV ORF1a/1b间程序性-1核糖体移码的刺激元件为假节结构 <正>1目的PRRSV复制酶翻译过程涉及程序性-1核糖体移码,但PRRSV程序性-1核糖体移码信号的结构和作用机制尚不清楚。为研究PRRSV程序性-1核糖体移码信号的结构和移码机制以及移码在病毒生命周期中的作用。本研究采... 韦祖樟 高飞 姜一峰 周艳君 袁世山 童光志文献传递 猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白磷酸化位点鉴定及其作用研究 被引量:1 2017年 为了探索猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白磷酸化对于病毒复制和转录的影响,本研究利用Phos-tag和点突变技术实现了N蛋白磷酸化形式的分离并鉴定出磷酸化位点为第120位丝氨酸(Ser120)。通过反向遗传操作系统将N蛋白的磷酸化位点突变并拯救出病毒。空斑实验、IFA检测、病毒生长曲线结果显示,磷酸化位点突变对于病毒的感染性和N蛋白的核定位没有影响,但是病毒的复制能力减弱。进一步利用荧光定量RT-PCR方法检测突变病毒与亲本病毒在不同感染时间的基因组RNA和亚基因组RNA的转录水平,结果表明突变病毒的g RNA和长链sg RNAs转录水平明显低于亲本病毒,表明N蛋白Ser120磷酸化可能参与了病毒的转录调控过程。 刘欢 姜一峰 黄勤锋 杨莘 张文超 虞凌雪 高飞 周艳君 童光志关键词:PRRSV N蛋白 磷酸化 转录调控 表达猪瘟病毒E2蛋白重组猪繁殖与呼吸道综合征病毒的研究 被引量:3 2012年 为构建表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白重组猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV),本研究首先利用高致病性PRRSV弱毒疫苗HuN4-F112株的感染性分子克隆作为平台,构建了一个在nsp2区有缺失的感染性分子克隆,命名为pHuN4-F112-△480-620。以pHuN4-F112-△480-620作为载体,采用突变PCR的方法将CSFV的主要保护性抗原E2基因1 bp~9 99 bp,1 bp~600 bp,1 bp~330 bp及256 bp~330 bp基因片段分别插到nsp2中aa 480~aa 620位氨基酸缺失编码区域。结果显示,插入完整E2基因或较大E2基因片段的重组PRRSV cDNA质粒均未能拯救出病毒,只有插入较小的E2基因片段(256 bp~330 bp)的重组病毒cDNA质粒成功地拯救出了重组病毒rPRRSV-F112-E2(256-330),拯救的病毒能够在MARC-145细胞上引起明显的细胞病变,而且生长速度明显高于其亲本病毒,间接荧光检测表明该重组病毒能够表达外源基因。 童武 周艳君 徐彦召 姜一峰 王亚欣 张善瑞 朱建平 虞凌雪 孙晶 陈焕春 童光志关键词:猪繁殖与呼吸道综合征病毒 猪瘟病毒 感染性分子克隆 重组病毒 猪源MHC Ⅱ类分子反式激活因子CIITA SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:1 2022年 Class Ⅱ Transactivator(CIITA)作为重要的MHCⅡ类分子反式激活因子在抗原递呈细胞的成熟和功能实现过程中发挥关键作用,为建立一种快速检测猪源CIITA基因的方法,本研究根据GenBank中猪源CIITA基因序列设计引物,从猪肺泡巨噬细胞的总cDNA中扩增CIITA基因,并克隆到pCold-TF载体中获得重组质粒pCold-TF-CIITA。利用重组质粒pCold-TF-CIITA作为标准品建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。试验结果显示:该方法在1.68×10^(1)~1.68×10^(7) copies/μL范围内呈现出良好的线性关系,检测灵敏度可达16.8 copies/μL,组内和组间变异系数均小于1%。利用该方法对不同细胞中的CIITA基因进行检测,结果显示该方法仅能够检测到猪源细胞中的CIITA基因。本试验结果表明,利用pCold-TF-CIITA作为标准品建立的CIITA基因SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于CIITA基因的定量检测。 朱豪杰 高飞 李丽薇 虞凌雪 张玉娇 张宽 童光志 姜一峰 李国新高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪肺泡巨噬细胞的差异转录基因文库构建 被引量:1 2009年 为鉴定高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后,细胞内转录发生差异的基因,本研究采用抑制性消减杂交技术,以HP-PRRSV HuN4株感染后48h的PAM细胞mRNA为实验方(Tester),以未感染的PAM细胞为驱动方(Driver)进行消减杂交,得到了HP-PRRSV HuN4株感染后PAM内转录后发生上调的基因。反之,实验方与驱动方互换进行消减杂交,得到了HP-PRRSV HuN4株感染后PAM内转录后发生下调的基因。将2种杂交所得的差异转录基因经PCR扩增后分别克隆到T载体中并转化大肠杆菌感受态细胞,从而构建了正向(上调)和反向(下调)的差异cDNA文库。随机挑取文库中的多个克隆用PCR方法进行鉴定,结果表明差异文库中的cDNA具有较好的多样性。本研究为下一步的文库克隆的序列测定与差异基因的功能分析奠定了基础。 肖燕 安同庆 田志军 韦天超 姜一峰 彭金美 周艳君 仇华吉 童光志关键词:高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 抑制性消减杂交 差异基因 一株串联表达非洲猪瘟病毒P30、P54基因重组伪狂犬病毒基因工程疫苗及其应用 本发明提供一株串联表达非洲猪瘟病毒P30、P54基因重组伪狂犬病毒基因工程疫苗及其应用,本研究以PRV JS‑2012‑ΔgI/gE株为基础,利用同源重组的方法,将现今国内流行的非洲猪瘟病毒的主要抗原蛋白(P30、P54... 童武 周艳君 童光志 包玮玲 高飞 郑浩 李国新 于海 单同领 姜一峰 虞凌雪 刘长龙 李丽薇 孔宁一种调节MHC-II类反式激活因子CIITA基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗的构建及其应用 本发明涉及一种定点突变的猪繁殖与呼吸综合征病毒,其特征在于能够恢复调控MHC‑II类分子抗原递呈途径的关键基因CIITA的表达。所述的突变猪繁殖与呼吸综合征病毒将Nsp4调控CIITA的关键氨基酸位点199突变成天冬氨酸... 姜一峰 沈奇 李丽薇 虞凌雪 高飞 童光志 周艳君 刘长龙我国大规模高生物安全风险车间 防烟排烟设计关键点探讨 2023年 我国已经在大规模高生物安全风险车间的设计和建设领域取得了丰富的工程实践经验,并逐步完成了对发达国家的追跑和并跑,在部分领域处于相对领先状态。但由于消防、生物安全等领域关注点的差异,以及动物、人用产品的不同要求,导致不同领域防烟排烟的设计理念存在差异,对大规模高生物安全风险车间建设的进一步提升存在影响。本文通过对国内外生物安全设施(生产车间和实验室)相关规范和标准中对生物安全和消防关切要点的梳理与凝练,结合对实际工程案例的分析和总结,系统性地阐述了我国大规模高生物安全风险车间防烟排烟设计的相关要求,对防火分区划分、排烟系统、70℃防火阀和排烟防火阀设置等关键环节的设计进行重点讨论,并提出了针对性解决方案,为相关国家规范标准的编制(修订)提供建议,为同类项目的实施提供参考。 崔磊 王燕芹 祁建城 姜一峰 赵刚 宋国亮 李晓斌 牛维乐 刘文利 梁磊关键词:消防 猪PCSK9单克隆抗体的制备及其在PRRSV感染过程中的应用 2023年 实验室前期shot-gun质谱结果表明PCSK9在PAM空细胞和PRRSV感染组PAM细胞间存在差异表达。为了深入研究PCSK9与PRRSV间的相互作用机制,本实验在体外合成猪PCSK9基因并克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28aPCSK9。利用该原核表达系统获得了高效表达的重组蛋白PCSK9(约75kDa),进一步通过镍柱亲和层析技术纯化重组蛋白PCSK9作为免疫原,皮下免疫5-6周龄的BALB/c小鼠(100ng/只),获得了1株产生PCSK9特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2A2B12)。应用此单克隆抗体对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染PAM细胞后的内源性PCSK9变化情况进行了检测。Western blot和IFA结果表明本实验制备的PCSK9单克隆抗体具有良好的特异性,抗体针对的表位位于PCSK9的C端结构域(463-705 aa);此外,Western blot结果表明PRRSV感染可抑制PCSK9蛋白的表达,过表达PCSK9对PRRSV的复制有明显的抑制作用。本研究中研制的抗体可为今后猪源PCSK9与PRRSV的相互作用研究提供工具支持。 张玉娇 刘长龙 姜一峰 姜一峰 周艳君 虞凌雪 李丽薇 周艳君 童光志 高飞关键词:PCSK9 单克隆抗体 PRRSV