目的利用基因工程手段构建hB7-H1-Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白。方法PCR方法从活化的人T细胞cDNA文库中扩增编码人B7-H1膜外区的cDNA序列,将其与人IgG1Fc和pC I-neo片段连接,构建成hB7-H1-Fc重组表达载体。用脂质体法转染CHO细胞,夹心ELISA法检测上清中融合蛋白hB7-H1-Fc的表达,经Prote in A亲合层析纯化,SDS-PAGE、免疫印迹鉴定表达产物。结果PCR扩增得到编码人B7-H1膜外区的727bp基因片段,与hIgG1Fc的cDNA片段一起连接并插入pC I-neo表达质粒。重组质粒转染CHO细胞后,夹心ELISA法检测显示培养上清中有hB7-H1-Fc蛋白表达。纯化后的hB7-H1-Fc蛋白经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定其分子质量约51.76×103,与理论预测值相符。结论成功构建了hB7-H1-Fc重组表达载体,利用哺乳动物细胞CHO表达出有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白,为进一步研究B7-H1分子在免疫耐受、自身免疫性疾病中的作用奠定了基础。
