王宇
- 作品数：39 被引量：65H指数：5
- 供职机构：贵州省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科技攻关计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学环境科学与工程更多>>
- 家蝇热休克蛋白HSP20基因克隆、表达和序列分析被引量：5
- 2015年
- 目的对家蝇热休克蛋白20(HSP20)基因进行生物信息学分析,并进行克隆、表达研究。方法利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具,结合其他生物信息学分析软件包,从Gen Bank上家蝇基因组序列识别出编码HSP20的基因,分析预测该蛋白质的结构功能;设计引物PCR扩增HSP20基因,将其克隆到原核表达质粒PEASY-E1中,重组质粒在大肠杆菌Origmi B/DE3中经用异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)鉴定。结果 HSP20基因序列全长865bp,最大开放阅读框(ORF)为567bp,编码188个氨基酸,理论分子量为21443.2 Da,等电点为5.96;所构建的重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定成功;SDS-PAGE分析结果显示,重组质粒在Origmi B/DE3中表达并纯化,得到的融合蛋白相对分子质量约为21443.2 Da,诱导12 h蛋白表达量最高,SDS-PAGE法得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。结论成功构建PEASY-E1-HSP20重组原核表达质粒并表达出融合HSP20蛋白,为进一步研究该蛋白的功能奠定基础。
- 彭传林王宇吴建伟修江帆魏川川国果
- 关键词：家蝇克隆
- 七氟烷对新生大鼠海马胶质纤维酸性蛋白表达的影响
- 2014年
- 目的探讨吸入2.3%七氟烷对新生大鼠海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平和远期学习记忆功能的影响。方法 7d龄SD大鼠24只,随机分为对照组和七氟烷组,每组12只。对照组持续吸入氧气6h,氧浓度29%;七氟烷组持续吸入2.3%七氟烷6h,氧浓度29%。停止吸氧和七氟烷后4h,每组随机断头处死6只,提取海马组织,蛋白免疫印迹法测定GFAP水平。其余每组6只饲养至14d时行跳台试验。结果与对照组比较,七氟烷组海马GFAP表达明显减少(P<0.05)。跳台试验中,七氟烷组反应时间长于对照组,错误次数也明显多于对照组,七氟烷组潜伏时间短于对照组(P均<0.05)。结论新生期大鼠七氟烷可影响远期学习记忆功能,该效应可能与新生期海马内GFAP表达减少有关。
- 王璐王飞清王宇高鸿
- 关键词：七氟烷学习记忆胶质纤维酸性蛋白
- 亚洲带绦虫60S核糖体蛋白L8基因的克隆表达和免疫学分析被引量：1
- 2011年
- 目的原核克隆表达亚洲带绦虫成虫60S核糖体蛋白L8基因(TaRPL8),探索其应用前景。方法用RT-PCR方法从亚洲带绦虫成虫cDNA中获取RPL8基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析。结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-TaRPL8重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌BL21/DE3中获得高效表达,亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别但不能够被正常大鼠血清识别,表明其具有免疫原性。结论亚洲带绦虫成虫TaRPL8基因可在大肠埃希菌BL21/DE3中获得具有免疫原性的表达,为进一步的功能研究奠定了基础。
- 王宇戴佳琳黄江廖兴江
- 关键词：亚洲带绦虫基因克隆原核表达
- 家蝇GAPDH基因的克隆、表达及作为内参的可靠性分析被引量：6
- 2016年
- 目的探讨家蝇甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的转录和表达情况,评价其作为家蝇功能基因研究内参的稳定性。方法运用PCR技术扩增GAPDH基因完整编码序列,生物信息学方法预测该基因及其编码蛋白功能。构建pET-28a(+)-GAPDH重组质粒,转化到大肠埃希菌Transetta(DE3)中进行诱导表达,纯化重组蛋白制备多克隆抗体。运用Real-time PCR和Western blot检测家蝇不同发育期、三龄幼虫不同组织和不同饲养物处理下GAPDH基因的表达情况。结果家蝇GAPDH基因ORF全长999bp,编码332个氨基酸,理论分子质量37.3ku,等电点为8.57,具有GAPDH家族的蛋白保守结构域;构建的重组质粒经PCR及测序鉴定正确;SDS-PAGE分析显示重组质粒在Transetta(DE3)中表达,纯化后的表达产物与目的蛋白大小相符,Western blot显示该蛋白可被相应血清识别;Real-time PCR分析GAPDH基因在不同饲料饲养3龄幼虫、不同发育期均保持较好的转录稳定性,同时,Western blot分析GAPDH分子在家蝇不同发育期及3龄幼虫不同组织中均有表达,且表达量无明显差别。结论 GAPDH基因在不同发育期、不同组织及不同饲养物饲养的家蝇表达稳定,可作为家蝇可靠性内参基因使用。
- 胡红元任春丽尚小丽陈明明王宇王涛吴建伟
- 关键词：家蝇克隆表达内参基因
- 家蝇变应原Tropomyosin基因的克隆、序列分析及诱导表达被引量：1
- 2014年
- 对家蝇变应原原肌球蛋白(Tropomyosin)基因进行同源克隆,序列分析;构建原核表达载体并在大肠杆菌中表达。从家蝇幼虫cDNA文库中筛选获得Tropomyosin基因。以该基因的cDNA文库质粒为模板,进行PCR扩增,获得家蝇Tropomyosin完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽、二级结构、三级结构、抗原表位和亚细胞定位等方面进行预测和分析。构建pEASY-E1-Tropomyosin重组质粒,转化到大肠杆菌OrigamiB(DE3)中进行诱导表达。Tropomyosin基因ORF全长828 bp,编码275个氨基酸,理论分子量31.6 kD;等电点为4.65,具有Tropomyosin家族的蛋白保守结构域。成功构建重组原核表达pEASY-E1-Tropomyosin并诱导表达重组蛋白。
- 魏川川修江帆王宇国果彭传林吴沁怡吴建伟
- 关键词：家蝇TROPOMYOSIN克隆生物信息学变应原
- 牛带绦虫ATE基因功能预测及原核表达
- 2011年
- 目的分析和预测牛带绦虫成虫精氨酰-tRNA转移酶（arginyl-tRNA-protein transferase,ATE）基因及其编码蛋白的结构域特性,并进行原核表达。方法利用在线生物信息学网站及工具对牛带绦虫精氨酰-tRNA转移酶基因的功能进行预测并将其编码区序列克隆到原核表达载体pET-28 a（＋）上,测序鉴定重组质粒。结果该基因全长1 476 bp,编码区为141~1 617 bp,编码491个氨基酸;该基因为全长基因,无跨膜区,具有多个磷酸化位点,蛋白的理化性质稳定,理论分子量为56 436.3Da;没有质体、线粒体定位序列;十二烷基-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL21~DE3中表达成功。结论筛选出牛带绦虫成虫精氨酰-tRNA转移酶基因,成功构建重组原核表达质粒。
- 刘玉江戴佳琳黄江王宇
- 关键词：牛带绦虫生物信息学原核表达
- 猪带绦虫成虫EF-1基因生物信息分析及原核表达被引量：3
- 2011年
- 目的分析和预测猪带绦虫成虫延伸因子（elongation factor-1,EF-1）基因及其编码蛋白的结构域特性,并进行原核表达。方法利用在线生物信息学网站及工具进行序列分析、预测其编码的延伸因子的理化特性、抗原表位、翻译后的修饰、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象等,将其编码区序列克隆岛原核表达载体pET-28 a（＋）上,测序鉴定重组质粒。结果该基因全长1 657 bp,编码区为186~1 533 bp,编码448个氨基酸,为全长基因;无跨膜区,具有多个磷酸化位点,蛋白的理化性质稳定,理论分子量为49 011.5 Da;没有质体、线粒体定位序列;十二烷基-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL21~DE3中表达成功。结论发现猪带绦虫成虫延伸因子基因,成功构建重组原核表达质粒。
- 刘玉江戴佳琳黄江王宇
- 关键词：猪带绦虫生物信息原核表达
- 白假丝酵母菌侵染家蝇幼虫中肠转录组及围食膜蛋白质组学研究
- 目的：利用家蝇与人类机会性致病真菌白假丝酵母菌(Candida albicans)的互作探讨宿主与病原体的相互作用，筛选家蝇(Musca domestica)幼虫中肠应对白假丝酵母菌侵染的应答基因，研究家蝇3日龄幼虫中肠...
- 王宇
- 关键词：家蝇幼虫致病真菌白假丝酵母菌应答基因凝胶电泳检测
- 猪带绦虫谷胱甘肽转移酶GST的原核表达及免疫学初步研究
- ＜正＞目的通过对猪带绦虫谷胱甘肽转移酶GST的表达,对其免疫性进行初步研究。方法通过生物信息学从猪带绦虫成虫cDNA质粒文库中筛选出谷胱甘肽转移酶（GST）基因,将其克隆到原核表达载体p ET28a（+）,经过双酶切、P...
- 戴佳琳黄江廖兴江江楠王宇刘玉江
- 文献传递
- 亚洲带绦虫六钩蚴Ta8基因的克隆表达及免疫原性分析
- 2012年
- 目的原核克隆表达亚洲带绦虫六钩蚴8kDa基因(Ta8),探索其表达蛋白在检测亚洲带绦虫感染中的应用价值。方法用RT-PCR方法从亚洲带绦虫六钩蚴cDNA中获取Ta8基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析。结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-Ta8重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌BL21/DE3中获得高效表达,亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别但不能够被正常大鼠血清识别,表明其具有免疫原性。结论成功地构建了亚洲带绦虫六钩蚴8kDa基因重组质粒,在大肠埃希菌BL21/DE3中获得了成功表达;证明了8kDa基因表达产物具有免疫原性;还发现该绦虫成虫的头节、成节、孕节中也存在8kDa基因。
- 王宇程金芝黄江戴佳琳陈小睿廖兴江
- 关键词：亚洲带绦虫六钩蚴基因克隆原核表达免疫原性
