沈如凌
- 作品数：6 被引量：12H指数：3
- 供职机构：同济大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目上海市科委科研计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Onconase对B16黑色素瘤细胞的体内外生长抑制作用被引量：4
- 2007年
- Onconase(Onc)是一种从林蛙(Rana pipiens)卵细胞内提取的核酸酶,实验证实其在体外和体内对多种肿瘤细胞都具有显著的杀伤效果。在大肠杆菌中表达纯化的重组Onc和天然提取蛋白质具有相似的活性,通过测定该蛋白质对黑色素瘤B16细胞的IC50和建立荷瘤小鼠模型探讨了Onc体内外的抗肿瘤效果。实验结果表明:B16细胞在体外对Onc敏感性较K562细胞低,其IC50为6.37μmol/L;但体内每次每只小鼠给予5mg/kg Onc也可显著地抑制B16细胞的生长,延长小鼠的生存时间。实验提供了一种简化高效获得具有天然活性Onc的方法,同时通过Onc对低敏感性肿瘤黑色素瘤细胞的杀伤研究,丰富了对Onc抗肿瘤作用的认识,为治疗黑色素瘤提供了线索。
- 沈如凌孙瑞林王庆诚欧伶费俭
- 关键词：ONCONASE黑色素瘤动物模型抗肿瘤
- Rag1、Rag2基因缺陷小鼠的构建及在异种肿瘤移植中的应用
- 2016年
- 目的 建立重组激活基因,Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型,并对其表型和异种肿瘤移植的成瘤性进行分析.方法 通过传统的胚胎干细胞（ES）细胞打靶、囊胚注射方式,分别构建Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型;通过流式细胞术对缺陷小鼠外周血T/B淋巴细胞含量进行检测;通过外源异种肿瘤细胞移植实验,对移植肿瘤细胞的成瘤性进行评价.结果 建立了Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型,两种基因突变纯合子小鼠模型外周血中T、B淋巴细胞含量较野生型小鼠显著降低;人源肿瘤细胞A549在上述两种基因突变纯合子小鼠中较BALB/c-nu（裸小鼠）或（NOD-SCID）非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷小鼠表现出更强的成瘤性.结论 分别成功建立了Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型,两种小鼠模型均发生了T、B淋巴细胞生成障碍,导致免疫系统严重缺陷,可作为异种外源肿瘤移植的受体,用于小鼠荷瘤模型的建立.
- 沈如凌石嘉豪盛哲津冯晓龙吴文婷费俭
- 关键词：基因缺陷免疫缺陷GENES
- C57BL/6J、129/SvJ及其杂交一代小鼠的行为学比较研究
- 2019年
- 目的比较C57BL/6J和129/SvJ两种不同遗传背景及其杂交一代(F1)在行为学表型上的差异。方法将C57BL/6J小鼠和129/SvJ小鼠交配繁育,得到两种F1小鼠129B6F1和B6129F1,连同C57BL/6J和129/SvJ按照不同性别分为8组,每组小鼠数量n≥12,进行旷场活动、悬尾、水迷宫、被动回避、热板实验等行为学研究,分别从焦虑、抑郁、学习记忆、热痛四个方面比较C57BL/6J和129/SvJ小鼠及F1小鼠的行为表现。结果在旷场活动中,与129/SvJ比较,F1在外周、边缘的活动差异显著(P<0.01);在悬尾活动中,F1的行为没有显著性差异;在水迷宫和被动回避活动中,与C57BL/6J比较,F1寻找到平台的潜伏期和进入暗箱的潜伏期差异显著(P<0.05)。结论 F1的不同行为表型受到亲代的不同遗传背景影响。
- 万颖寒沈如凌王珏龚慧李俊董茹费俭
- 关键词：近交系小鼠C57BL/6J行为学
- Toll样受体4(TLR4)基因剔除小鼠构建及初步表型分析被引量：5
- 2020年
- 目的:利用CRISPR/Cas9技术构建Toll样受体4(TLR4)基因敲除小鼠模型,并观察突变小鼠对革兰氏阴性细菌脂多糖(LPS)刺激响应的变化。方法:针对TLR4基因外显子2设计并合成1对sgRNA片段,与编码Cas9的mRNA混合后通过受精卵显微注射方法,建立TLR4基因敲除小鼠,通过繁育获得基因敲除纯合子小鼠(TLR4-/-小鼠);通过LPS刺激,分析TLR4-/-小鼠对炎症应激的反应情况,并在分子和病理水平上和野生型对照(WT)进行比较。结果:PCR及测序检测表明TLR4基因外显子2在小鼠基因中被成功敲除;给予LPS刺激后,IL1β、IL6、My D88、i NOS及TNFa等炎症因子的表达在野生型小鼠的心、肝和肺组织中显著上调,而在TLR4-/-小鼠中则几乎没有变化;血生化指标显示LPS刺激后WT小鼠血清中的尿素(Urea)和肌酐(Cre)水平显著升高,而TLR4-/-小鼠刺激前后无显著变化,病理分析同样发现TLR4-/-小鼠能够抵抗LPS对肾组织的损伤。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功构建了TLR4基因剔除小鼠模型,TLR4的缺失能够降低IL1β、IL6、My D88、i NOS及TNFa炎症因子对LPS刺激的响应,抑制LPS引起的炎症反应及对组织的损伤。
- 郭洋万颖寒王珏龚慧周宇慈磊万志鹏孙瑞林费俭沈如凌
- 关键词：基因敲除LPS
- 核酸酶ONCONASE的基因工程表达
- ONCONASE(ONC)是一种在两栖类蛙(RANA PIPIENS)卵细胞内存在的核糖核酸酶，是RNASEA超家族中的一员。研究证实其具有很好的抗肿瘤效果，目前已经进入三期临床实验。本文主要是通过基因工程的方法，利用P...
- 沈如凌
- 关键词：核酸酶基因工程抗肿瘤效果肿瘤治疗靶向治疗
- 文献传递网络资源链接
- 淋巴细胞活化基因-3敲除(Lag-3-/-)小鼠构建及初步表型分析被引量：3
- 2020年
- 目的构建淋巴细胞活化基因-3(Lag-3)基因敲除小鼠,初步分析Lag-3基因敲除对小鼠表型影响,为后续Lag-3体内功能研究提供动物模型。方法利用CRISPR/Cas9技术结合受精卵显微注射构建敲除小鼠,通过分子鉴定筛选基因敲除阳性小鼠,利用RT-PCR和流式检测方法进一步验证Lag-3基因敲除小鼠体内Lag-3基因敲除效果;通过建立Con A诱导的肝损伤模型研究Lag-3基因在体内的功能。结果PCR和产物测序结果显示,获得了exon 2缺失的Lag-3基因敲除小鼠;该基因敲除纯合子小鼠(Lag-3-/-)经刀豆蛋白(Con A)刺激后,小鼠心脏、脾、肺、巨噬细胞和淋巴结中仅能检测到Lag-3 mRNA本底表达信号,小鼠巨噬细胞、脾细胞和淋巴结中仅能检测到非常低数量的Lag-3阳性细胞。表型分析发现,Lag-3基因的缺失显著减少了Con A诱导的小鼠外周血、骨髓和脾CD3+T细胞的数量,减轻了Con A诱发的急性肝损伤情况。结论成功构建Lag-3基因敲除小鼠模型,肝损伤过程中的体内功能研究显示,Lag-3缺失可以显著缓解Con A引发的肝损伤的发生。
- 万颖寒慈磊王珏龚慧万志鹏奚骏何敏珠孙瑞林费俭费俭
- 关键词：基因敲除
