钟昌高
- 作品数：17 被引量：69H指数：5
- 供职机构：中南大学湘雅医学院生殖与干细胞工程研究所更多>>
- 发文基金：湖南省社会发展科技支撑计划项目湖南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 杜氏肌营养不良症(DMD)的植入前遗传学诊断被引量：4
- 2009年
- 目的对杜氏肌营养不良症(duchenne muscular dystrophy,DMD)进行植入前遗传学诊断(preim-plantation genetic diagnosis,PGD),阻断DMD患儿的出生。方法针对患者的DMD基因的48号外显子缺失位点采用巢式PCR分别对患者和携带者的单个淋巴细胞、行体外授精-胚胎移植治疗的健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞进行扩增,建立稳定的经单细胞基因诊断DMD的方法。再对在该中心进行超排和体外授精-胚胎移植治疗的DMD携带者的胚胎活检后完成PGD,根据诊断结果选择健康的优质的胚胎移植入子宫。结果携带者的单个淋巴细胞的PCR扩增成功率为90.5%(95/105),健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞PCR扩增成功率为85.7%(54/63),假阳性率为0(0/28)。分别对3例DMD携带者施行了植入前遗传学诊断,病例1移植了2枚未受累的优质胚胎,且成功妊娠单胎并已于2005年4月分娩了1个健康的女婴;病例2移植了2枚优良胚胎,不幸的是未能妊娠。病例3诊断为未受累的仅有的2枚胚胎因胚胎质量差而未能移植。结论该组采用的方案可对DMD基因的48号外显子缺失突变的DMD家庭进行PGD,达到了阻断DMD患儿出生的目的。
- 钟昌高李麓芸陆长富林戈龚斐张瞻廖宏庆张红卢光琇
- 关键词：杜氏肌营养不良症植入前遗传学诊断
- 单细胞二重巢式PCR扩增影响因素初探被引量：1
- 2005年
- 目的 :对影响单细胞二重巢式PCR扩增的因素进行初步探讨。方法 :针对 β 珠蛋白基因CD4 1 4 2、IVS Ⅱ 6 5 4突变位点区域采用二重巢式PCR ,分别以不同的引物浓度组合、不同的TaqDNA聚合酶、不同的中和缓冲液、PCR反应前采用或不采用 98℃预变性扩增单个淋巴细胞和 /或单卵裂球 ,了解这些因素对PCR扩增效率的影响。结果 :不同的引物浓度组中 ,终浓度为 0 .2 5 μmol/LR1+F1引物对与 0 .3μmol/LR2 +F2引物对配对扩增效率最高 ;不同的TaqDNA聚合酶中TaKaRaEXTaq的扩增效率最高 ;中和缓冲液 1(2 0 0mmol/LTricine)的扩增效率显著高于中和缓冲液 2 (90 0mmol/LTris·HCl,pH 8.3/30 0mmol/LKCl/2 0 0mmol/LHCl)的扩增效率 (P <0 .0 5 ) ;单细胞PCR反应前采用 98℃预变性与不采用 98℃预变性的扩增效率间差异无统计学意义。结论 :不同引物浓度组合、不同的TaqDNA聚合酶、不同的中和缓冲液对单细胞的二重巢式PCR的扩增效率存在明显差异 ,而PCR反应前采用 98℃预变性不能提高PCR扩增效率。
- 钟昌高李麓芸陆长富林戈卢光琇
- 关键词：聚合酶链反应植入前诊断Β地中海贫血Β-珠蛋白基因
- 单基因遗传病的基因诊断及其应用研究
- 单基因遗传病种类多,发病率高,不仅对患者的健康造成了严重危害,而且也给家庭和社会带来了沉重的精神和经济负担.应用遗传病的基因诊断技术,可对不同发育时期的个体进行遗传病的基因诊断,既可诊断出生后的遗传病患者和症状前患者,又...
- 钟昌高
- 关键词：单基因遗传病基因诊断产前基因诊断
- 文献传递
- 粘多糖贮积症Ⅱ型患者艾杜糖-2-硫酸酯酶基因常见突变的检测被引量：8
- 2002年
- 目的 探讨并建立粘多糖贮积症 型 (mucopolysaccharidosis ,MPS )患者艾杜糖 - 2 -硫酸酯酶 (iduronate- 2 - sulphatase,IDS)基因常见突变的检测方法。方法 应用聚合酶链反应 -单链构象多态性(polymerase chain reaction- single strand conformation polymorphism,PCR- SSCP)对 IDS基因突变热点外显子 3、8和 9进行点突变检测 ;应用 DNA测序对 PCR- SSCP检出的突变进行序列分析 ;应用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (polymerase chain reaction- restriction fragment length polymorphism,PCR-RFL P)对 DNA测序的结果进行检测。结果 经 PCR- SSCP发现该患者的 IDS基因外显子 9有明显异常泳动的条带 ;DNA测序发现患儿的外显子 9发生点突变 (C16 72 T) ,从而导致患者艾杜糖 - 2 -硫酸酯酶蛋白发生氨基酸替换 (R46 8W) ;PCR- RFL P电泳检测结果显示粘多糖贮积症 型患者仅出现 5 5 4bp 1条带 ,而患儿父母出现 2 5 7bp和 2 97bp 2条带 ,进一步验证了序列分析的结果。结论 PCR- SSCP分析、DNA序列分析和 PCR- RFL P分析是诊断 MPS 的有效方法 ,三者联合使用可以相互验证、互为补充 ,提高基因诊断的准确率和成功率。
- 刘上峰李麓芸傅俊江钟昌高卢光琇
- 关键词：聚合酶链反应-单链构象多态性基因突变
- 全基因组扩增应用于胚胎植入前遗传学诊断被引量：1
- 2014年
- 植入前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis, PGD）是指借助显微操作技术对具有高遗传病风险夫妇，从其体外受精培养得到的胚胎中取出个别卵裂球细胞或极体或几个滋养层细胞进行遗传学检查，通过分析选择正常的胚胎移植，可以防止遗传学异常妊娠的发生，将产前诊断提前到胚胎植入子宫内膜之前。避免了反复流产、引产对孕妇及其家庭造成的伤害。但由于可用于PGD分析的材料为胚胎中取出的个别卵裂球细胞或极体或几个滋养层细胞，这些材料十分有限，所以在进行PGD之前，需对单细胞进行全基因组扩增（whole genome ampliflication，WGA），全基因组扩增一组在基因组DNA数量极有限情况下对全部基因组序列进行非选择性扩增的技术，其目的是在没有序列倾向性的前提下大幅度增加DNA的总量，对进行疾病诊断的组织或单个细胞的基因组进行大量扩增，使得后续分析的模板量增加，从而完成多位点、多基因的检测研究。该技术能很好的解决PGD的标本少和准确性要求高等要求。本文介绍了WGA方法中PEP、DOP—PCR、MDA应用于PGD的情况，分析了MDA方法的优势与不足。
- 杨超钟昌高
- 关键词：植入前遗传学诊断全基因组扩增多重置换扩增
- 两例常染色体显性多囊肾患者PKD1基因的突变检测
- 2007年
- 目的研究两例常染色体显性多囊肾患者的致病原因。方法对常染色体显性多囊肾患者的多囊肾病1基因（PKD1）3′端单拷贝区进行了聚合酶链反应-变性高效液相色谱（PCR-denaturing high-per-formance liquid chromatography,DHPLC）分析,并对有异常峰形的PCR产物进行测序。结果在1例患者中发现第42外显子的C11901A有一个无义突变,导致原丝氨酸3897变为终止密码子;而另一例患者第35外显子的C10737T有一个错义突变,导致原苏氨酸3509变为甲硫氨酸。在正常对照中发现两种同义突变分别为第42外显子的G11824A及C11860T。结论用DHPLC和DNA测序方法对两名患者进行PKD1的突变检测中,发现一个新的无义突变、一个错义突变以及两种同义突变。
- 李立李麓芸钟昌高高伯笛卢光琇
- 关键词：常染色体显性多囊肾基因突变变性高效液相色谱
- 应用连锁分析对杜氏/贝氏肌营养不良症家系进行快速携带者检测和产前基因诊断被引量：6
- 2002年
- 钟昌高李麓芸卢光琇
- 关键词：家系DMD基因产前基因诊断
- 单细胞二重巢式PCR诊断β地中海贫血
- 2006年
- 【目的】探讨单细胞水平诊断β地中海贫血(β-thalassemia)的可靠性,为开展β地中海贫血的胚胎植入前遗传学诊断(preimplantationgeneticdiagnosis,PGD)打下基础。【方法】采用二重巢式PCR并结合扩增特异的突变系统检测技术(amplificationrefractorymutationsystem,ARMS)扩增含有CD41-42突变位点的β地中海贫血患者的单淋巴细胞及正常人单淋巴细胞和单卵裂球的β-珠蛋白基因的5个常见突变位点(CD41-42、IVS-Ⅱ-654、CD17、CD71-72和nt.-28位点),扩增产物经过2%的琼脂糖凝胶电泳检测。【结果】患者的88个单淋巴细胞的扩增成功率为95.5%,等位基因脱扣的发生率为4.8%,诊断准确率为95.2%;正常人的41个单淋巴细胞的扩增成功率均为95.1%,假阳性率为0;正常人的34个单卵裂球细胞的PCR扩增成功率为88.2%;35管细胞洗脱液空白对照组假阳性扩增率为0。【结论】单细胞二重巢式PCR并结合ARMS技术诊断β地中海贫血是稳定的、可靠的,适用于β地中海贫血的PGD。
- 钟昌高张瞻李麓芸陆长富林戈卢光
- 关键词：聚合酶链反应
- 46,XY女性性反转患者SRY基因的一个新突变类型被引量：20
- 2003年
- 目的 研究 46,XY女性性反转患者发病的分子机理。方法 应用聚合酶链反应 (polymerasechain reaction,PCR)扩增 1例性反转患者和其父亲的 SRY基因片段 ;PCR产物连接到 p UCm-T载体上 ,在 ABI 3 77-3自动测序仪上完成测序以查明突变 ;应用 PCR-限制性酶切对 DNA测序的结果进行检测。结果 发现该患者的 SRY基因存在点突变 (T3 87A) ,导致 SRY蛋白发生氨基酸翻译终止 (酪氨酸 12 9终止密码 ) ,患者父亲的序列正常。由于患者 SRY序列中增加一个 Mae 酶切位点 ,PCR-限制性内切酶酶切电泳检测 ,结果显示患者出现 3条带 (13 1bp、2 3 1bp和 2 47bp) ,而正常人出现 2条带 (13 1bp和 478bp) ,进一步验证了序列分析的结果。经查证数据库 ,该突变是一个未见报道的新型 SRY基因突变。结论 这一新型突变的发现 ,有助于进一步阐明 46。
- 周畅李麓芸傅俊江莫亚勤钟昌高卢光琇
- 关键词：女性SRY基因聚合酶链反应无义突变性反转综合征
- 单细胞单轮二重PCR诊断X-连锁鱼鳞病被引量：1
- 2009年
- X-连锁鱼鳞病(X-linked ichthyosis,XLI)是隐性遗传病,是人类最常见的先天性代谢疾病之一.从单细胞水平诊断XLI,就可为开展XLI的胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)打下基础.采用单轮二重PCR扩增患者和正常女性的单淋巴细胞以及正常人单卵裂球的STS基因和amelogenin(Amel)基因,在正常人单淋巴细胞组和正常人单卵裂球组中STS基因扩增成功率分别为95.8%、90.9%,在患者单淋巴细胞组中的假阳性率为1.5%;在Amel-X和Amel-Y基因位点扩增成功率分别为91.9%、92.7%,污染率分别为1.4%、0;ADO的发生率为6.2%.结果表明单细胞单轮二重PCR诊断XLI具有较高的准确性和特异性,有助于我们进一步开展XLI的PGD.
- 钟昌高李麓芸陆长富龚斐廖宏庆张瞻高佰笛张硕平卢光琇
