陈金卿
- 作品数：10 被引量：10H指数：2
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 海洋破囊壶菌△^5-延长酶和△^4-脱饱和酶在酿酒酵母中的共表达被引量：2
- 2009年
- 二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA C22:6n-3)是具有各种重要生理功能的高度不饱和脂肪酸.分别以质粒pYTFD5和pYFAD4为模板,扩增获得860bp的△5-延长酶基因(elo5)和1600bp的△4-脱饱和酶基因(fad4).利用重叠延伸PCR构建elo5-fad4融合基因,Hind Ⅲ/Sph Ⅰ双酶切后连接到经同样处理过的pYES2.0载体,构建重组表达质粒pYELO5-FAD4.转化酿酒酵母尿嘧啶缺陷型菌株INVScl,通过缺少尿嘧啶的选择性培养基筛选阳性克隆子.添加外源脂肪酸C20:5底物,半乳糖诱导表达.气相色谱-质谱分析表明,重组酵母总脂肪酸中出现了DHA(二十二碳六烯酸,C22:6n-3)新产物,融合基因elo5-fad4在酿酒酵母中得到了表达.
- 刘艳如江贤章高媛媛田宝玉陈晓峰陈金卿黄建忠
- 关键词：破囊壶菌二十二碳六烯酸共表达
- 破囊壶菌△4-脂肪酸脱饱和酶基因5′端侧翼区域的克隆与鉴定
- 二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,简称DHA)是目前发现的碳链最长、不饱和度最高的ω-3长链高度不饱和脂肪酸(Long-chain polyunsaturated fatty acids,Lc-P...
- 江贤章陈金卿田宝玉高媛媛舒正玉李欣蓝灿华黄建忠
- 关键词：破囊壶菌启动子绿色荧光蛋白
- 文献传递
- 海洋破囊壶菌△4-脂肪酸脱饱和酶基因在酿酒酵母中的表达
- 二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,简称DHA)具有促进婴幼儿视网膜、大脑发育、预防心血管疾病、抑制肿瘤生成等重要生理功能,市场潜力巨大。海洋破囊壶菌(Thraustochytrium)已被证实为D...
- 田宝玉陈金卿江贤章刘艳如吴松刚黄建忠
- 文献传递
- 海洋破囊壶菌△5-延长酶与△4-脱饱和酶在酿酒酵母中的共表达
- 以质粒pYTFD5和pYFAD4为模板,扩增获得860bp的△5-延长酶基因(e105和1600bp的△4-脱饱和酶基因(fad4).利用重叠延伸PCR构建融合基因e105-fad4,与pMD-18Tsimple vec...
- 蔡少丽朱亚然江贤章陈金卿田宝玉舒正玉高嫒嫒黄建忠
- 关键词：破囊壶菌二十二碳六烯酸共表达酿酒酵母
- 文献传递
- 海洋破囊壶菌Δ~4-脂肪酸脱饱和酶基因在酿酒酵母中的表达被引量：7
- 2007年
- 以质粒pGEM-TFAD4为模板,扩增获得1.6kb的Δ4-脂肪酸脱饱和酶基因(FAD4)。将FAD4酶切后连接到HindⅢ/XbaⅠ处理过的pYES2.0载体,构建重组表达质粒pYFAD4。转化酿酒酵母缺陷型菌INVScl,通过SC-U选择性培养基筛选阳性克隆子。添加外源脂肪酸C22:5底物,半乳糖诱导表达。气相色谱分析表明阳性克隆子总脂肪酸中出现了二十二碳六烯酸C22:6(占酵母总脂肪含量的41.13%),Δ4-脂肪酸脱饱和酶基因在酿酒酵母中得到了表达。
- 陈金卿江贤章刘丽霞黄建忠
- 关键词：二十二碳六烯酸酿酒酵母
- 破囊壶菌Δ~4-脂肪酸脱饱和酶基因5'端侧翼区域的克隆与鉴定被引量：5
- 2008年
- 应用衔接头PCR(LA-PCR)技术,扩增得到约1000 bp的海洋破囊壶菌Δ4-脱饱和酶基因5’端侧翼区域的单一产物.对该产物测序,经启动子软件与序列比对分析,发现该序列(Genkbank登录号EU074209)具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、CAAT盒、INR等元件.将扩增得到的脱饱和酶基因5’端侧翼序列亚克隆到含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒pGlow-TOPO中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌细胞.荧光显微观察大肠杆菌阳性转化子发出荧光,侧翼序列含有启动子功能得到确认.
- 江贤章陈金卿田宝玉高媛媛舒正玉李欣蓝灿华黄建忠
- 关键词：破囊壶菌启动子绿色荧光蛋白
- 破囊壶菌△~4-脱饱和酶基因的表达及其5’端侧翼调控区域的研究
- 为验证海洋破囊壶菌△~4-脱饱和酶cDNA序列的基因功能,构建重组表达质粒,并以酿酒酵母作为宿主进行功能表达分析,添加外源脂肪酸C22:5底物,半乳糖诱导表达后,阳性克隆子总脂肪酸中出现了二十二碳六烯酸C22:6/(占酵...
- 陈金卿
- 关键词：重叠延伸PCRDHA
- 文献传递
- 海洋破囊壶茵△5-延长酶与△4-脱饱和酶在酿酒酵母中的共表达
- 二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)是人体必需的ω-3系列长链高度不饱和脂肪酸,具有重要生理功能。由于人体自身不能合成DHA且其来源有限,因此探求新的DHA资源日益迫切。克隆DHA合成途径的...
- 江贤章陈金卿柯崇榕田宝玉舒正玉高媛媛黄建忠
- 关键词：破囊壶菌二十二碳六烯酸共表达
- 破囊壶茵△4-脂肪酸脱饱和酶基因5'端侧翼区域的克隆与鉴定
- 二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,简称DHA)是目前发现的碳链最长、不饱和度最高的ω-3长链高度不饱和脂肪酸(Long-chain polyunsaturated fatty acids,Lc-P...
- 江贤章陈金卿田宝玉高嫒嫒舒正玉李欣蓝灿华黄建忠
- 关键词：破囊壶菌启动子绿色荧光蛋白
- 海洋破囊壶菌△5-延长酶与△4-脱饱和酶在酿酒酵母中的共表达
- 二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)是人体必需的ω-3系列长链高度不饱和脂肪酸,具有重要生理功能。由于人体自身不能合成DHA且其来源有限,因此探求新的DHA资源日益迫切。克隆DHA合成途径的...
- 江贤章陈金卿柯崇榕田宝玉舒正玉高嫒媛黄建忠
- 关键词：破囊壶菌二十二碳六烯酸共表达
- 文献传递
