黄泳塔
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南方医科大学生物技术学院生物技术系暨分子免疫学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省医学科学技术研究基金广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Ad-sTNFRI-IgGFc腺病毒载体的构建及其转染人气道平滑肌细胞
- 2008年
- TNF-α是一种具有广泛生物学活性的前炎症细胞因子,参与哮喘整个病理生理过程。可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)可以拮抗肿瘤坏死因子活性,已被用来治疗与TNF相关的炎性疾病。将sTNFRI-IgGFc基因插入腺病毒穿梭质粒pDC316,与辅助质粒pBHGloxΔE1,3Cre共转染HEK293细胞,重组产生Ad-sTNFRI-IgGFc,PCR鉴定毒种正确后,进行扩增、纯化和滴度测定,转染人气道平滑肌细胞,利用RT-PCR、免疫组化方法,流式细胞仪,ELISA检测转染后细胞中sTNFRI-IgGFc的转录和表达。实验结果证明成功构建了Ad-sTNFRI-IgGFc腺病毒载体,感染性滴度达3×1010TCID50/mL,200moi转染气道平滑肌细胞阳性率达99.32%,转染后气道平滑肌细胞在mRNA和蛋白水平均有sTNFRI-IgGFc表达。转染上清稀释64倍后仍对TNF有拮抗活性。为将表达sTNFRI-IgGFc腺病毒基因治疗哮喘的实验研究提供了基础。
- 苏瑾尤长宣蔡绍曦马骊王小宁温茜罗微黄泳塔
- 关键词：可溶性肿瘤坏死因子受体腺病毒载体人气道平滑肌细胞
- 重组腺病毒Ad-sTNFRI-IgGFc转染人气道上皮细胞及其表达的实验研究
- 2008年
- 目的构建携带人可溶性肿瘤坏死因子受体I胞外区和IgGFc融合基因的重组腺病毒载体(Ad-sTNFRI-IgGFc),体外转染正常人气道上皮细胞株(HBE135-E6E7),探讨重组腺病毒Ad-sTNFRI-IgGFc转染气道上皮治疗支气管哮喘的可行性。方法将sTNFRI-IgGFc基因插入腺病毒穿梭质粒pDC316,与辅助质粒pBHGloxΔE1,3Cre共转染HEK293细胞,重组产生Ad-sTNFRI-IgGFc,PCR鉴定毒种正确后,进行扩增、纯化和滴度测定,转染培养HBE135-E6E7,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR、免疫组化检测转染后细胞中sTNFRI-IgGFc的表达和转录。结果成功构建了Ad-sTNFRI-IgGFc,感染性滴度达3×1010TCID50/ml,转染后HBE135-E6E7在mRNA和蛋白水平均有sTNFRI-IgGFc表达。结论构建的Ad-sTNFRI-IgGFc可有效转染HBE135-E6E7,并在其中高效表达,并能拮抗TNF活性,为将表达sTNFRI-IgGFc腺病毒基因治疗哮喘的实验研究提供了基础。
- 苏瑾尤长宣蔡绍曦马骊温茜罗微黄泳塔
- 关键词：可溶性肿瘤坏死因子受体腺病毒载体气道上皮细胞
