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流产型布鲁菌Omp10、Omp25蛋白的表达纯化与鉴定被引量：2: 2012年; 获得高纯度具有生物学活性的重组布鲁菌Omp10、Omp25融合蛋白,并进行抗原性的分析。将用PCR扩增出的布鲁菌Omp10、Omp25基因片段分别克隆到原核表达载体pET-32α中,构建pET-32α-Omp10/Omp25原核表达质粒。将其转入大肠杆菌BL21(DE3)PlysS中,用IPTG诱导表达,经HisTrap HP亲和层析柱分离纯化,分别用Western-blot和间接ELISA检测产物的抗原性。基因测序及酶切鉴定证明pET-32α-Omp10/Omp25原核表达载体构建成功。SDS-PAGE表明,Omp10、Omp25融合蛋白均以包涵体的形式在大肠杆菌中高效表达。经过包涵体的变性、复性及亲和层析纯化,成功获得了大小分别为34 000和44 000的融合蛋白,与预测的相对蛋白分子质量一致。Western和间接ELISA试验证明纯化的Omp10、Omp25融合蛋白能被免疫的牛布鲁菌阳性血清所识别。结果表明,成功获得了布鲁菌Omp10、Omp25融合蛋白,且均具有一定的免疫原性,通过血清学反应证实,Omp10、Omp25蛋白为布鲁菌病临床诊断试剂盒的研制奠定了基础。; 张三东王晶钰王利勤杨幼聪马超陈婷董睿李成山任娟娟刘万华; 关键词：布鲁菌纯化抗原性

鸡源沙门菌PFGE分型及耐药性研究被引量：13: 2013年; 为了解某规模化养鸡场沙门菌的流行情况及耐药现状,对分离于该场的病、死鸡42株沙门菌进行血清型鉴定,K-B药敏纸片法检测分离菌的药物敏感性,采用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)对分离菌进行PFGE分型研究。结果显示,42株鸡源沙门菌可分为4种血清型,其中以肠炎沙门菌为优势血清型;分离菌对四环素、氨苄青霉素和萘啶酸普遍耐药,耐药率均在60%以上,4重以上耐药菌株占88.9%;42株鸡源沙门菌可分为7个PFGE型,各型间相似性较高,部分型菌株间相似性高达90%以上。结果表明,该养殖场鸡源沙门菌的耐药性普遍存在,且以多重耐药为主,PFGE分型结果表明,该场流行的沙门菌可能是由少数菌株传播引起的。; 唐攀崔恩慧刘万华任娟娟武宁邱渊皓王晶钰; 关键词：沙门菌血清型耐药性脉冲场凝胶电泳

陕西省H1N1猪流感病毒的分离鉴定及全基因序列分析: 猪流感（SI）是猪群难以根除的群发性疾病之一，给养猪业造成重大经济损失，严重威胁人类健康，具有重要的公共卫生学意义。本实验从2011年10月～2013年3月对陕西省部分养猪场和生猪屠宰场感观健康猪群开展猪流感调查研究，目...; 任娟娟; 关键词：全基因序列 HI抗体中和抗体; 文献传递

屠宰生猪胸膜炎的病原检测: 2014年; 在屠宰场内,经常可以看到屠宰生猪存在不同程度的胸膜炎病变。这些胸膜上的炎症往往由胸膜肺炎病变持续感染发展而来。试验从宏观角度上统计屠宰生猪出现胸膜炎病变的发生情况,并对胸膜肺炎病变肺脏进行病原菌的分离鉴定。采用屠宰场胸膜炎评估系统(SPES),选取某集约化生猪养殖场的9个畜群,每个畜群随机抽取200份肺脏样品,进行胸膜炎的评价,并随后检测胸膜肺炎的病原菌。其中不同程度的胸膜炎病例占调查肺脏总数的52.1%。打分SPES>1的病变肺脏比例为24.0%。从胸膜肺炎病变肺脏中分离出胸膜肺炎放线杆菌26株,副猪嗜血杆菌9株,多杀性巴氏杆菌11株和猪链球菌15株。; 邱渊皓魏江华任娟娟唐攀刘万华武宁李涛伍成奇王晶钰; 关键词：屠宰生猪胸膜炎胸膜肺炎病原菌检测

布鲁菌S2疫苗株免疫牛与牛种、羊种布鲁菌自然感染牛ELISA鉴别诊断方法的建立被引量：6: 2014年; 为建立区分猪种布鲁菌S2疫苗株接种奶牛与布鲁菌自然感染奶牛,BLAST比对分析羊种、牛种、猪种、犬种、沙林鼠种和绵羊种6种布鲁菌基因序列,发现repA-related基因是猪种布鲁菌与牛种及羊种布鲁菌的差异基因。设计引物PCR扩增获得repA-related基因片段,克隆并原核表达得到了布鲁菌repA-related融合蛋白,以repA-related蛋白建立间接ELISA检测方法。用repA-related蛋白间接ELISA检测猪种S2疫苗株接种动物血清为阳性,检测牛种和羊种布鲁菌自然感染动物血清为阴性。repA-related蛋白间接ELISA能从试管凝聚实验(SAT)及常规ELISA检测阳性的奶牛血清样本中,区分出S2疫苗接种牛与牛种布鲁菌感染牛。; 武宁王晶钰刘万华邱渊皓任娟娟唐攀曹晓蕾陈占莉江越德; 关键词：布鲁菌病

陕西省avian-like H1N1猪流感病毒的遗传进化分析被引量：1: 2013年; 【目的】监测陕西省猪流感的流行与传播情况,为猪流感研究提供参考。【方法】从生猪养殖场和屠宰场表观健康猪中随机采取猪鼻/气管拭子样本,经SPF鸡胚分离,对HA阳性样本进行猪流感病毒RT-PCR鉴定。测定分离株全基因序列,通过MEGA4构建基因进化树,并进行遗传变异分析。【结果】从500份样本中分离鉴定出6株H1N1流感病毒,病毒分离率为1.2%。获得6个核苷酸相似性为98.3%—99.1%的分离株全基因序列。遗传进化分析表明6个分离株都位于avain-like H1N1猪流感病毒谱系,与中国江苏,辽宁,山东和香港等地H1N1猪流感病毒株同源性达97%—99%。6个分离株的8个基因片段均在蛋白受体结合位点、潜在糖基化位点等处发生核苷酸变异,这将会影响猪流感病毒的抗原特性、宿主适应性和致病力。【结论】首次从西北地区表观健康猪中分离到H1N1猪流感病毒,并获得6个分离株的全基因序列。遗传进化分析表明,6个分离株为avain-like H1N1猪流感病毒,且多处氨基酸位点发生变异。; 任娟娟王晶钰刘红彦刘万华武宁邱渊皓唐攀江跃德; 关键词：遗传进化

规模化养鸡场大肠杆菌病综合防治措施: 目的：以我国3省份规模化养鸡场分离鉴定的1002株鸡源大肠杆菌为研究对象,了解我国鸡源E.coli的耐药性和耐药基因的年度变化及耐药基因与耐药性之间的相关性,制定科学的防治方案.方法：采用K-B药敏纸片法检测E.coli...; 王晶钰唐攀王利勤刘万华任娟娟武宁邱渊皓; 关键词：规模化养鸡场大肠杆菌病耐药基因; 文献传递

鸡新城疫病毒的分离鉴定与交叉免疫保护试验被引量：6: 2013年; 为了评价疫苗免疫保护效果,进而筛选出最佳的免疫方案,将分离到的鸡新城疫病毒(Newcas-tle disease virus,NDV)流行毒株制备成灭活疫苗进行交叉免疫保护试验研究。把采集到的疑似发生新城疫的病鸡肺、气管环等组织经处理后接种10日龄SPF鸡胚进行病毒的分离和增殖,并用血清学和分子生物学方法进行毒株的鉴定;用分离到的NDV/Chicken/TC/1/2011毒株制成油乳剂灭活苗,与La Sota疫苗以不同的疫苗组合免疫SPF鸡,进行交叉免疫保护试验。结果显示,共分离到9株新城疫病毒,其F蛋白裂解位点的氨基酸均为112 R-R-Q-K-R-F117,表现为强毒株的分子特征,与致病指数结果一致。分离株灭活苗组和分离株灭活苗+La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最高,其次是La Sota灭活苗+La Sota弱毒苗和LaSota灭活苗,La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最低。NDV分离株与疫苗株La Sota存在明显抗原性差异,这将对新城疫疫苗的发展和疾病控制策略制定至关重要。; 刘万华王晶钰武宁唐攀任娟娟邱渊皓江跃德陈占莉曹晓蕾; 关键词：新城疫病毒疫苗

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任娟娟

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