周浩
- 作品数：20 被引量：43H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠CD62L^-/CD62L^+ T细胞体外对抗原刺激的增殖反应被引量：1
- 2009年
- 本研究旨在观察CD62L-/CD62L+T细胞应答抗原的能力,了解CD62L分子在移植物抗宿主病(GVHD)中的作用。用DC细胞呈递特异性抗原hCD4刺激T细胞,流式细胞术检测其表面CD62L分子表达;对分选获得的CD62L-/CD62L+两群T细胞再次给予新的抗原(EL4细胞冻融抗原)刺激,用流式细胞术检测CD62L-及CD62L+T细胞在前后两次受到不同抗原刺激后的活化增殖能力。结果显示:T细胞表面CD62L+分子在受到抗原刺激后表达下调,CD62L+细胞由69.34%降至36.75%,相应的CD62L-T细胞由30.04%升至63.15%。比较第1天及第7天在高CFSE荧光值区(M1)的细胞数表明,在特异性抗原(hCD4)的刺激下,CD62L+T细胞平均百分比值分别为(87.88±1.08)%,(86.88±1.46)%(p>0.05);CD62L-T的测得值分别为(84.52±2.73)%(84.71±2.33)%(p>0.05)。两群细胞数在第7天与第1天相比均未出现明显增殖;在非特异性抗原刺激下,CD62L+T细胞在第1天和第6天于M1区的细胞数平均百分比值分别为(76.49±2.41)%,(22.25±3.29)(p<0.001);CD62L-T测得值分别为(77.35±3.82)%,(74.76±3.90)%(p>0,05)。此结果说明CD62L+T细胞发生了分裂增殖,而CD62L-T细胞群则没有出现类似的情况。结论:通过体外方法获得了CD62L-CD62L+T细胞,这两类细胞在特异性抗原刺激下未发生增殖反应,但在非特异性抗原刺激下CD62L+T细胞发生了分裂增殖,而CD62L-T细胞无此反应。此结果表明CD62L+T细胞在GVHD发生中有着重要作用,同时也为临床上通过体外方法获得CD62L-T细胞而选择性地去除移植物中CD62L+T细胞以减少GVHD的发生提供了思路。
- 雷蕾刘黎琼周浩胡俊斌
- 关键词：移植物抗宿主病冻融抗原
- 曲古菌素A诱导急性髓性白血病细胞表达共刺激分子CD80和CD86的研究被引量：1
- 2011年
- 目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatin A,TSA)诱导急性髓性白血病细胞表达共刺激分子CD80和CD86。方法:流式细胞仪检测TSA诱导HL-60细胞、急性髓性白血病患者单个核细胞表达共刺激分子CD80和CD86及细胞活力;RT-PCR法分析CD80和CD86 mRNA的表达情况;75Gy(gray,Gy)照射TSA诱导的HL-60细胞后,采用CCK-8法检测共刺激分子表达增高后,HL-60细胞对健康人单核细胞的增殖作用。结果:TSA使HL-60细胞CD86的表达上调,也可急性髓性白血病患者单核细胞CD86的表达上调,TSA诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86后,可促进健康人单核细胞的增殖。结论:TSA诱导HL-60细胞、急性髓性白血病患者单核细胞共刺激分子CD86表达增高,促进健康人单核细胞的增殖。
- 余美霞郭伟周浩周咏明
- 关键词：曲古菌素ACD80CD86淋巴细胞反应
- 配对免疫球蛋白样受体B在小鼠树突细胞上的表达及其与免疫耐受关系的研究被引量：2
- 2007年
- 目的研究配对免疫球蛋白样受体B（PIR—B）在小鼠树突细胞（Dc）上的表达及其与免疫耐受的关系。方法DC2．4为C57BL／6小鼠来源的不成熟的DC株。脂多糖（LPS）刺激48h为成熟DC（mDC）。分别以重组小鼠IL-10（rmlL-10）、重组人转化生长因子β1（rhTGFβ1）诱导DC2．4为耐受性DC（T—DC），体外化学合成PIR—B特异性RNA小干扰分子（siRNA），以Lip2000转染DC2．4（si．Dc），分别用半定量RT—PCR、Westernblot检测maiL-10、rhTGFβ1、LPS及PIR—B特异的siRNA对DC2．4上PIR—B表达的变化。以。H—TdR标记检测同种异体淋巴细胞反应（MLR），ELISA法测定MLR上清中IFN-γ的水平变化。结果RT—PCR、Westernblot结果显示DC2．4表达PIR—BmRNA及蛋白相对值为0．51±0．08和0．58±0．23；mlL-10、rhTGFβ1诱导的T—DC上PIR—B的mRNA及蛋白表达相对水平均明显升高，相对值分别为0．85±0．07和0．87±0．14；0．79±0．10和0．85±0．34（P值均〈0．05），LPS刺激的mDCPIR—BmRNA及蛋白表达则降低（0．35±0．10和0．32±0．04，P〈0．05），转染PIR—B特异性siRNA后DC2．4上PIR—B的mRNA及蛋白表达水平也明显受抑，干扰48h后分别下降了78．9％和74．2％（P〈0．05）。正常DC2．4可以刺激异基因淋巴细胞增殖；LPS—DC刺激异基因淋巴细胞增殖的能力明显增强，其反应体系中的IFN-γ水平明显升高；T—DC刺激淋巴细胞增殖的能力明显受到抑制，其反应体系中的IFN-γ水平明显下降；而转染PIR—BsiRNA后，DC刺激淋巴细胞增殖的能力得到明显恢复，其反应体系中的IFN-γ水平明显回升。结论高度表达免疫抑制性受体PIR—B是小鼠DC获得免疫耐受的共同特征及分子机制之一。
- 刘峥嵘张敏黎纬明周浩邹萍
- 关键词：树突细胞免疫耐受白细胞介素10转化生长因子Β受体小干扰
- 三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞周期及Survivin表达的影响被引量：4
- 2004年
- 目的 研究三氧化二砷 (As2 O3 )对慢性髓系白血病细胞 (K5 62 )的作用特点及其机制。方法 不同浓度As2 O3 作用于K5 62细胞后 ,四唑盐 (MTT)比色法分析细胞增殖 ;流式细胞术检测细胞周期分布、细胞凋亡及Survivin抗原表达 ;RT PCR检测SurvivinmRNA的表达。结果 2～ 10 μmol/L的As2 O3 能有效抑制K5 62细胞增殖 ,但未能诱导明显的细胞凋亡。周期分析显示 ,G2 /M期细胞比例显著增多 ;同时G2 /M细胞周期依赖性表达的SurvivinmRNA和蛋白表达增加。结论 As2 O3 明显抑制K5 62细胞的生长 ,其机制是诱导G2 /M期细胞周期停滞。Survivin表达上调可能是K5 62细胞对As2O3诱导凋亡抵抗的机制之一。
- 伍晓菲陈智超刘仲萍周浩游泳黎纬明邹萍
- 关键词：三氧化二砷K562SURVIVIN
- Foxp3转染小鼠CD4^+CD25^-T细胞体外诱导耐受性树突状细胞
- 2007年
- 目的利用转染 Foxp3基因的 CD4^+CD25^-T 细胞来研究体外诱生的调节性 T 细胞对树突状细胞的功能影响。方法通过逆转录病毒转染 Foxp3基因,在幼稚 CD4^+CD25-T 细胞内强制性表达FOXP3蛋白,成功建立了表达Foxp3的 CD4^+CD25^-T 细胞模型。结果转染1周后Foxp3阳性表达的 T 细胞比例为38%。
- 周浩邹萍黎纬明张敏刘峥嵘
- 关键词：树突状细胞转染淋巴细胞增殖体外诱生逆转录病毒小鼠
- 改良的高纯度人早孕绒毛膜滋养层细胞培养方法被引量：3
- 2008年
- 目的培养纯度较高的人早孕绒毛膜滋养层细胞,为研究胎盘绒毛在妊娠期间的作用及其机制提供细胞学基础。方法胰蛋白酶-DNA酶消化法分离培养绒毛膜滋养层细胞,再运用流式细胞仪细胞分选获得高表达HLA-G的人早孕绒毛膜滋养层细胞。流式细胞术检测分选前后原代培养细胞HLA-G的表达率,相差显微镜观察滋养层细胞形态学特点,免疫荧光显微镜鉴定细胞来源,台盼蓝染色检测细胞活力。结果通过流式细胞检测,分选前的原代培养细胞体系中HLA-G的表达率为86·5%,经过分选带有PE荧光/HLA-G阳性表达的原代培养细胞后,其纯度可达98·0%。倒置相差显微镜下,可见细胞为上皮样细胞形态,呈片状铺展生长。细胞角蛋白染色阳性,波形蛋白染色阴性,表明细胞性质为上皮来源的绒毛膜滋养层细胞。台盼兰排斥试验检测细胞活力,细胞活力良好,存活率超过92%。结论该方法可以有效获得高纯度的,具有生物学活性的人早孕绒毛膜层细胞,为在体外研究生理妊娠及病理妊娠中滋养细胞的作用提供了一种改良的技术手段。
- 陈莉娟周浩朱剑文邹丽
- 关键词：滋养层细胞HLA-G细胞培养
- 转化生长因子β_1诱导的耐受性树突状细胞及其机制被引量：1
- 2007年
- 目的探讨耐受性树突状细胞(DC)的诱导及其机制。方法以20ng/ml转化生长因子β_1(TGF-β_1)与C57BL/6小鼠来源的树突状细胞系(DC2.4)共培养6d,诱导耐受性DC(TGFβ- DC);以脂多糖(LPS)刺激DC 48 h即为成熟DC(LPS-DC);以特异性针对免疫球蛋白样受体B(PIR- B)的小RNA干扰片段(PIR-B siRNA)转染TGF-BC(si-DC)。应用半定量逆转录聚合酶链反应和流式细胞仪测定各细胞表面PIR-A/B共同的胞外段PIR的表达、PIR-A/B及其mRNA的表达,以Balb/c小鼠脾淋巴细胞为反应细胞进行混合淋巴细胞反应(MLR),观察各组DC刺激反应细胞增殖的能力,同时以酶联免疫吸附试验测定MLR上清液中γ干扰素(IFN-γ)的水平。结果TGFβ-DC的PIR-B mRNA表达明显上调,PIR-A mRNA的表达明显下调(P<0.05),而LPS-DC的PIR-B mRNA表达明显下调,PIR-A mRNA表达明显上调(P<0.05),二者表面PIR的表达均增加,但差异无统计学意义(P>0.05);转染PIR-B siRNA后,TGFβ-DC的PIR-B mRNA表达明显下调,细胞表面的PIR表达也受到明显抑制(P<0.05)。正常DC2.4细胞可以刺激异基因淋巴细胞增殖;LPS-DC刺激异基因淋巴细胞增殖的能力明显增强,其反应体系中的IFN-γ水平明显升高;TGFβ-DC刺激淋巴细胞增殖的能力受到明显抑制,其反应体系中的IFN-γ水平明显下降;而转染PIR-B siRNA后,TGFβ-DC刺激淋巴细胞增殖的能力得到明显恢复,其反应体系中的IFN-γ水平明显回升。结论TGF-β_1可诱导产生耐受性DC,其高度表达免疫抑制性受体PIR-B,上调PIR-B的表达可能是TGF-β_1诱导产生耐受性DC的分子机制之一。
- 刘峥嵘黎纬明张敏周浩王利葛超韩红邹萍
- 关键词：树突细胞转化生长因子Β免疫耐受
- 干扰素-γ在异基因造血干细胞移植中的作用被引量：1
- 2011年
- 干扰素-γ（IFN-γ）是最重要的Th1型细胞因子之一，可由多种类型的免疫活性细胞产生。IFN-γ具有多种生物学效应，并可能在接受了异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）的患者发生移植物抗宿主病（GVHD）的过程中起了关键性的作用。IFN-γ最初被认为是急性GVHD过程中介导组织损伤的关键因素之一，且与GVHD严重程度相关。然而，越来越多的实验证据显示IFN-γ也具有抑制GVHD的保护作用。同时，IFN-γ还可促进移植物抗白血病（GVL）效应。因而深入研究IFN-γ在GVHD和GVL中的作用及其机制可能为改善allo—HSCT患者的预后提供新的见解。
- 曹海燕邹萍周浩
- 关键词：Γ-干扰素移植物抗宿主病移植物抗白血病异基因造血干细胞移植
- Foxp3转染小鼠CD4^+CD25^-T细胞抑制NK细胞活性被引量：6
- 2009年
- 目的:通过逆转录病毒载体转染Foxp3基因到小鼠CD4+CD25-T细胞,以研究体外诱导获得的调节性T细胞对NK细胞免疫活性的调节作用及其机制。方法:携带Foxp3基因的逆转录病毒转染初始CD4+CD25-T细胞,以获得持续性高表达Foxp3的CD4+T细胞模型。CD4+Foxp3+T细胞与NK细胞共培养后,用[51Cr]标记的YAC-1细胞检测NK细胞的杀伤毒性。在TGF-β阻断实验中,通过Transwell共培养实验以及向细胞共培养体系加入抗TGF-β抗体,并检测NK细胞杀伤毒性。结果:逆转录病毒转染初始CD4+CD25-T细胞,成功建立了表达Foxp3的CD4+T细胞模型,转染后1周Foxp3阳性表达的T细胞比例为38.0%。CD4+Foxp3+T细胞在与NK细胞共培养的24 h和48 h后,对NK细胞的细胞毒性杀伤效应的抑制率分别为42.9%和22.7%。在CD4+Foxp3+T细胞与NK细胞的共培养体系中加入抗TGF-β抗体后,其抑制率分别由原来的42.9%(24 h)、22.7%(48 h)变为3.2%(24 h)、2.1%(48 h)。在Transwell共培养实验中与NK细胞直接接触的Foxp3+CD4+T细胞可以诱导NK细胞免疫抑制,而没有直接接触的Foxp3+CD4+T细胞则不能抑制NK细胞的杀伤作用。结论:强制性表达Foxp3的CD4+CD25-T细胞可以在体外发挥免疫抑制作用,可以抑制NK细胞的细胞毒性杀伤作用。转染Foxp3的CD4+CD25-T细胞对NK细胞发挥作用依赖于细胞之间的直接接触,与转染后T细胞表面表达TGF-β有关。
- 陈莉娟周浩朱剑文邹丽
- 关键词：FOXP3调节性T细胞NK细胞转化生长因子Β
- MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86及对混合淋巴细胞反应的影响被引量：1
- 2007年
- 目的研究蛋白酶体抑制剂 MG132诱导 HL-60细胞表达共刺激分子 CD80、CD86及其对混合淋巴细胞反应的作用。方法流式细胞仪检测 MG132诱导 HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及细胞活力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析 CD80和 CD86 mRNA 表达情况;75 Gy照射 MG132诱导的 HL-60细胞后,用 CCK-8检测提高共刺激分子表达后,HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用。结果 MG132上调 HL-60细胞表达 CD86,高浓度的 MG132对 HL-60细胞有直接杀灭作用,MG132诱导 HL-60细胞表达共刺激分子 CD86后,对健康人单个核细胞起增殖作用。结论 MG132诱导 HL-60细胞表达共刺激分子 CD86,促进对健康人单个核细胞的增殖作用。
- 周咏明郭伟薛克营周浩程艳香郭天南李慧玉黄士昂
- 关键词：蛋白酶抑制药CD86淋巴细胞培养试验
