曹以诚
- 作品数：64 被引量：151H指数：5
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技基础条件平台建设计划广州市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术化学工程更多>>
- 三类整合酶基因(intⅠ)的简并引物PCR方法建立及应用被引量：20
- 2005年
- 目的 建立一种筛选第一、二和三类整合酶基因 (intⅠ )的简并引物PCR方法 ,并对临床菌株进行整合子筛选和分类。方法 用梯度PCR方法确定PCR反应的最适退火温度 ,并对 1 6株临床标本进行PCR扩增 ,通过对阳性PCR扩增产物的限制性内切酶分析进行整合子分类。结果 根据梯度PCR结果确定最适退火温度为 4 6℃。应用简并引物PCR法检测 1 6株临床分离株 ,其中 8株阳性 ,经酶切分类后确定其中 4株只含有第一类整合酶基因 ,有 3株含有第二类整合酶基因 ,1株同时含有第一类和第二类整合酶基因。结论 建立了一种同时筛选第一、二和三类整合子的方法 ,实际检测显示其可行性 ,为全面细致研究整合子介导的细菌耐药提供了一种快速、简便的方法。
- 李心晖石磊杨维青曹以诚张宏梅尹晓琳郑美萍
- 关键词：PCR方法PCR法检测PCR反应临床菌株
- 靶向TTF-1的siRNA腺相关病毒载体组装验证
- 2012年
- 为了解决靶向TTF-1的siRNA导入肺腺癌细胞的问题,设计了3条靶向NCI-H1975细胞TTF-1基因的siRNA,并将其分别构建到腺相关病毒上.在293细胞中装配病毒,收获病毒原初液后进行超滤浓缩、层析柱纯化,测定病毒滴度.重组病毒感染肺腺癌细胞系NCI-H1975,通过Western-Blot实验检测siRNA效果,利用凋亡实验验证细胞生物学效应.Western-Blot实验测得siRNA有较好的干扰效果,凋亡实验测得肺腺癌细胞NCI-H1975产生了凋亡,从而证明具有感染性的靶向TTF-1的siRNA腺相关病毒载体组装成功.
- 高强曹以诚杨磊
- 关键词：TTF-1腺相关病毒小分子干扰RNA
- 乙型肝炎多表位DNA疫苗的发展趋势
- 2006年
- 乙型肝炎多表位DNA疫苗(epitopeDNAvaccine,minigenes/epigenes)是指多个表位(包括T细胞、B细胞等表位)经过优化组合,以能产生高效的细胞、体液免疫应答进而清除HBV病毒为目的而得到的新型乙肝疫苗。该文介绍近年来国内外在乙型肝炎多表位DNA疫苗方面的发展趋势。
- 陶嫦立曹以诚
- 关键词：乙型肝炎多表位基因DNA疫苗
- Rspo1-EGFP重组腺相关病毒载体的构建
- 2009年
- 本文通过构建携带Rspo1-EGFP融合基因的重组腺相关病毒载体,包装出含有目标基因的重组腺相关病毒。首先利用PCR从cDNA文库中把Rspo1基因扩增出来,插入到pcDNA6-EGFP中EGFP的上游形成融合基因Rspo1-EGFP。采用AAVHelper-free包装系统,将融合基因用PCR方法从质粒pcDNA6-Rspo1-EGFP上扩增出来,亚克隆到AAV表达质粒pAAV-MCS多克隆位点中,构建出重组质粒pAAV-Rspo1-EGFP。重组质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper磷酸钙法共转染AAV-293细胞制备重组病毒rAAV-Rspo1-EGFP。重组病毒感染AAV-HT1080细胞,荧光显微镜检测病毒介导的目标基因表达,流式细胞技术测定病毒滴度。结果:酶切鉴定和测序确定重组病毒载体pAAV-Rspo1-EGFP构建成功。病毒感染的细胞中检测到绿色荧光,表明重组病毒包装成功并介导融合基因在宿主细胞里表达,病毒滴度达107VP/mL。本研究成功包装出具有侵染性的重组腺相关病毒AAV-Rspo1-EGFP,为今后利用腺相关病毒载体进行Rspo1相关的体内体外研究提供了实验基础。
- 杜淑敏曹以诚李新建
- 关键词：R-SPONDIN增强型绿色荧光蛋白腺相关病毒流式细胞技术
- 膜反向斑点杂交技术在结核分枝杆菌耐药突变株中的检测应用被引量：2
- 2011年
- 本文通过对膜反向斑点杂交中各杂交条件的摸索,旨在建立一种快速检测katG、rpoB基因突变的膜反向斑点杂交技术。通过验证该技术成功的验证了膜反向斑点杂交技术在检测结核分枝杆菌耐药性上的应用价值。本实验首先应用PCR技术扩增结核分枝杆菌的katG、rpoB耐药基因,然后用膜反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌的耐药基因,最后将膜反向斑点杂交技术方法的结果与DNA测序结果相比较,进而验证此方法的准确性。通过对实验结果的分析,表明膜反向斑点杂交技术准确的检测了结核分枝杆菌的耐药性,其结果与DNA测序结果的符合率为100%。从而可以得出结论:膜反向斑点杂交技术可以其简便、快速、灵敏、特异的方式直接检测结核分枝杆菌的katG、rpoB基因突变,可以为临床检测结核分支杆菌的耐药性提供辅助诊断手段。
- 陈丹华曹以诚
- 关键词：结核分支杆菌耐药KATG基因RPOB基因
- 肝脏特异性表达载体的构建及Western blotting检测被引量：1
- 2011年
- 研究靶向于肝细胞的组织特异性siRNA,实现siRNA基因治疗的组织特异性,可用于特异性治疗乙肝,突破RNA干扰技术在临床应用的一大障碍。用靶向于EGFP的siRNA(以下简称siEGFP)替代靶向于乙肝病毒保守区的siRNA,构建可以在肝细胞中特异性表达的载体,用来表达siRNA。将目标载体分别转染肝癌细胞HepG2、乳腺癌细胞MDB-MB-231、人胚肾细胞293,在蛋白质水平上检验siRNA抑制的组织特异性。Western blotting结果证实,siEGFP在肝组织来源的细胞系HepG2中抑制效率明显高于其他两组细胞。构建的载体可以在肝癌细胞系中特异性的表达siRNA,而在其他组织细胞中不表达,实现了组织特异性。进一步将siEGFP替换为抑制HBV表达的siRNA,同样可以实现肝脏特异性的表达。
- 张利涛刘慧琳曹以诚
- 关键词：RNAIEGFPWESTERNBLOTTING
- siRNA理性设计原理分析被引量：2
- 2007年
- siRNA作为基因功能研究和临床治疗的重要工具,已经引起了科学界的广泛关注,世界上许多学术和商业机构也开发了相应的siRNA设计程序。近年来,随着对siRNA机制研究的不断深入,尤其是2004年Reynolds等提出siRNA理性设计规则之后,许多新的理论极大地推动了siRNA设计程序的发展。本文就siRNA设计程序所普遍考虑的设计原理,从基本经验规则、siRNA序列特征、靶mRNA的可接近性、热动力学特征以及特异性检验方法等5个方面进行了分析和论述,为国内科研机构开发自己的siRNA设计程序提供思路和方法。
- 方翔曹以诚杜正平郭旭卓敏
- 关键词：SIRNA热动力学特异性
- 1993—2000年霍乱弧菌耐药整合子的分布状况被引量：2
- 2007年
- 目的检测Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅳ类整合子及Ⅰ类整合子携带的耐药基因盒在霍乱弧菌临床菌株中的分布,分析整合子对细菌耐药性的影响。方法纸片扩散法行药物敏感试验,PCR法检测50株临床菌株Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅳ类整合酶基因(intⅠ)阳性菌株,并对intⅠ1阳性菌株整合的耐药基因行序列分析。结果全部菌株至少对一种抗生素耐药。3株Ⅰ类整合酶基因阳性菌株的耐药基因盒PCR扩增得到1009 bp的产物。序列分析表明,1009 bp序列与已知的aadA 1c 100%同源,为对壮观霉素、链霉素产生耐药的基因盒;未检测到Ⅱ类整合子阳性菌株;50株临床菌株均含有第Ⅳ类整合酶基因,2株菌株第Ⅳ整合酶基因扩增得到2200bp产物,序列分析表明,在第Ⅳ类整合酶基因序列中含有一个插入片段IS1359转座酶基因。结论第1类整合子存在于孟加拉国的临床致病弧菌中,第Ⅳ类整合子在霍乱弧菌临床菌株中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。
- 闫鹤石磊曹以诚杨连生
- 关键词：弧菌霍乱整合子类药物耐受性
- A组轮状病毒G1和G9亚型的二重qPCR检测被引量：1
- 2013年
- 目的建立快速检测A组轮状病毒G1和G9亚型的二重实时荧光定量PCR(qPCR)检测法。方法针对A组轮状病毒G1和G9亚型VP7基因的保守区域与高变区域,设计特异的引物、探针。构建含A组轮状病毒G1和G9亚型VP7基因的质粒,将其作为该检测系统的阳性标准品,优化A组轮状病毒G1和G9亚型的qPCR检测系统。结果该方法检测A组轮状病毒G1和G9亚型阳性样本的灵敏度为103copies/μL,对其他亚型的标准质粒检测呈阴性。结论本实验建立的A组轮状病毒G1和G9亚型的二重qPCR检测方法具有良好的特异度、敏感度和重复性,该方法的应用有助于A组轮状病毒G1与G9亚型感染的早期快速诊断。
- 徐垚曹以诚李晖方苓祖冬梅
- 关键词：轮状病毒属聚合酶链反应核酸探针
- 结核分枝杆菌融合抗原Ag85B-ESAT6真核表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2006年
- 以结核分枝杆菌H37Rv株的基因组作为模板,将Ag85B和ESAT6编码基因进行PCR扩增,然后采用基因剪接重叠扩增PCR法(gene SOEing)将其通过疏水甘氨酸接头(GGIGIAPG)连接融合,定向克隆至质粒Pvax1中,构建结核分枝杆菌Ag85B-ESAT6融合抗原的真核表达质粒Pvax1/AE.经单双限制性内切酶图谱、PCR产物及DNA测序分析等多种方法鉴定,证实Pvax1/AE真核表达质粒构建成功.为进一步研究其结核核酸疫苗原型的免疫保护效果奠定了基础.
- 程春明曹以诚杜正平杨化强郭旭方翔张珍武
- 关键词：AG85BESAT6融合基因核酸疫苗
